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HO-1基因真核表达载体pcDNA3.1-hHO-1的构建及表达
1
作者 王媛 金国平 +1 位作者 马惠敏 单杰 《河南医学研究》 CAS 2009年第1期19-22,共4页
目的:构建人HO-1真核表达载体pcDNA3.1-hHO-1并检测其表达。方法:利用分子生物学技术,将hHO-1基因与质粒pcDNA3.1连接,构成重组质粒并用RT-PCR及Western blotting方法检测重组载体在Eca-9706细胞中的表达情况,最终确定重组载体是否构建... 目的:构建人HO-1真核表达载体pcDNA3.1-hHO-1并检测其表达。方法:利用分子生物学技术,将hHO-1基因与质粒pcDNA3.1连接,构成重组质粒并用RT-PCR及Western blotting方法检测重组载体在Eca-9706细胞中的表达情况,最终确定重组载体是否构建成功。结果:用HindⅢ和BamHⅠ双酶切,RT-PCR检测,Western blotting检测证明hHO-1成功克隆入表达载体pcDNA3.1中。结论:本部分实验成功构建了能够在细胞内大量表达HO-1基因产物的真核表达载体pcDNA3.1-hHO-1,为进一步实验奠定基础。 展开更多
关键词 血红素加氧酶-1 Eca-9706细胞 pcdna3.1质粒
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大鼠Hes1基因真核表达载体的构建及瞬时表达在神经前体细胞分化中的作用
2
作者 李宝园 马存根 +3 位作者 赵焕英 赵春礼 徐群渊 高福禄 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期187-192,共6页
目的探讨Hes1基因高表达对神经前体细胞分化的影响。方法从大鼠脑组织中提取总RNA,用RT-PCR方法获得Hes1基因的全长cDNA,插入pGEM-T-Easy克隆载体中进行序列测定,测序正确后将其亚克隆至表达载体pCDNA3.1,用脂质体将重组质粒转染原代培... 目的探讨Hes1基因高表达对神经前体细胞分化的影响。方法从大鼠脑组织中提取总RNA,用RT-PCR方法获得Hes1基因的全长cDNA,插入pGEM-T-Easy克隆载体中进行序列测定,测序正确后将其亚克隆至表达载体pCDNA3.1,用脂质体将重组质粒转染原代培养的神经前体细胞,经G418筛选获得抗性细胞克隆,用RT-PCR方法鉴定Hes1基因在神经前体细胞基因组中的存在,实时荧光定量PCR检测Hes1基因在转染细胞中的过表达情况。结果经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定,证实目的基因已插入重组质粒,RT-PCR证明,经G418筛选得到的转基因神经前体细胞克隆的基因组DNA中存在Hes1基因;实时荧光定量PCR进一步证明,转基因神经前体细胞Hes1基因的mRNA高表达。结论构建了大鼠Hes1基因的真核表达载体,获得了高表达Hes1基因的神经前体细胞克隆。Hes1基因高表达可抑制神经前体细胞Ngn1的表达,并促进神经前体细胞向神经胶质细胞的分化。 展开更多
关键词 Hes1基因 Ngn1基因 pcdna3.1质粒 神经前体细胞 细胞分化 反转录-聚合酶链式反应 大鼠
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PCR克隆EB病毒潜伏膜蛋白-1基因
3
作者 张文 汤郡 +2 位作者 梁希若 马炳南 钟平宇 《广州医学院学报》 1999年第3期16-19,共4页
目的：构建ＥＢ病毒潜伏膜蛋白－１重组表达质粒。方法：ＰＣＲ克隆技术，即用ＰＣＲ方法从Ｂ９５－８细胞中钓出ＥＢ病毒ＬＭＰ１基因ＤＮＡ序列，然后定向克隆到真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３．１中，以此构建成ｐｃＤＮＡ３．１－ＬＭＰ... 目的：构建ＥＢ病毒潜伏膜蛋白－１重组表达质粒。方法：ＰＣＲ克隆技术，即用ＰＣＲ方法从Ｂ９５－８细胞中钓出ＥＢ病毒ＬＭＰ１基因ＤＮＡ序列，然后定向克隆到真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３．１中，以此构建成ｐｃＤＮＡ３．１－ＬＭＰ重组质粒。结果：经酶切鉴定，确定已获得重组质粒ｐｃＤＮＡ３．１ＬＭＰ１。结论：在真核表达质粒中已成功地克隆了ＥＢ病毒ＬＭＰ１基因。 展开更多
关键词 PCR克隆 EB病毒 潜伏膜蛋白-1 pcdna3.1质粒
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波形蛋白过表达质粒pcDNA3.1b-Vim的构建及鉴定
4
作者 邵晓婷 施倩雯 王凯旋 《齐齐哈尔医学院学报》 2019年第12期1453-1455,共3页
目的以波形蛋白(vimentin)基因为靶基因,构建波形蛋白过表达质粒pc DNA3.1b-Vim。方法在PC12H细胞中抽提RNA,进行逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR),得到c DNA,设计引物将目的基因扩增并进行胶回收,将空载质粒pc DNA3.1b与目的基因片段进行... 目的以波形蛋白(vimentin)基因为靶基因,构建波形蛋白过表达质粒pc DNA3.1b-Vim。方法在PC12H细胞中抽提RNA,进行逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR),得到c DNA,设计引物将目的基因扩增并进行胶回收,将空载质粒pc DNA3.1b与目的基因片段进行双酶切(分别为EcoRI/Xba I)、连接,构建重组过表达质粒,转化到Top10感受态细胞,经氨苄青霉素筛选挑取阳性克隆,扩大培养,提取质粒,凝胶电泳鉴定并进行测序分析。结果凝胶电泳鉴定及DNA测序分析显示重组质粒pc DNA3.1b-Vim构建成功。结论成功构建波形蛋白过表达质粒pc DNA3.1b-Vim,为研究波形蛋白的生物学功能打下基础。 展开更多
关键词 波形蛋白 pcdna3.1b质粒
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PcDNA3.1/hTM质粒对真核细胞转染表达的实验研究
5
作者 乔正荣 俞慎林 +1 位作者 戴毅 郭颖 《中国普通外科杂志》 CAS CSCD 2006年第12期917-919,共3页
目的探讨含有人血栓调节蛋白(hTM)基因的真核表达质粒pcDNA 3.1/hTM转染脐静脉内皮细胞(HUVECs)的抗凝效应。方法由阳离子脂质体介导将pcDNA 3.1/hTM质粒转入内皮细胞中,以RT-PCR法检测hTMmRNA的表达;免疫组化法检测hTM分子的表达。结... 目的探讨含有人血栓调节蛋白(hTM)基因的真核表达质粒pcDNA 3.1/hTM转染脐静脉内皮细胞(HUVECs)的抗凝效应。方法由阳离子脂质体介导将pcDNA 3.1/hTM质粒转入内皮细胞中,以RT-PCR法检测hTMmRNA的表达;免疫组化法检测hTM分子的表达。结果转染重组质粒的HUVECs表达的hTMmRNA约为载体质粒组及未转染组的1.7倍。免疫组化显示有平均1 0%的HUVECs获得转染,阳性细胞较阴性细胞hTM的表达强度有明显提高。结论pcDNA 3.1/hTM质粒能被导入HUVECs中表达,而且外源性hTM分子具有完全的抗凝生物学活性。 展开更多
关键词 pcdna3.1/hTM质粒 真核细胞 基因表达 转染 血栓形成/治疗
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