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血吸虫生殖产卵相关基因pcDNA3/Sj SDISP DNA在小鼠体内的组织分布及整合的观察
1
作者 刘芬 汪希雅 +2 位作者 高冬梅 余平 汪世平 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期944-947,共4页
目的探讨日本血吸虫生殖产卵相关基因DNA在小鼠体内组织分布以及整合到宿主基因组上的可能性。方法将生殖产卵相关基因重组质粒pcDNA3/Sj SDISP经肌注免疫小鼠后,在注射后12h、1w、3w和6w取小鼠各组织,抽提其基因组DNA进行PCR扩增,然后... 目的探讨日本血吸虫生殖产卵相关基因DNA在小鼠体内组织分布以及整合到宿主基因组上的可能性。方法将生殖产卵相关基因重组质粒pcDNA3/Sj SDISP经肌注免疫小鼠后,在注射后12h、1w、3w和6w取小鼠各组织,抽提其基因组DNA进行PCR扩增,然后纯化基因组DNA进行PCR扩增,结果经琼脂糖凝胶电泳分析。结果注射后12h,在血液、心、肝、脾、肺、肾及注射部位肌肉中可检测到pcDNA3/Sj SDISP,至第1w,仍可在部分小鼠中检测到,至第3w不再检出。未发现生殖产卵相关基因pcDNA3/Sj SDISP整合入小鼠基因组中。结论肌注pcDNA3/Sj SDISP后,可在组织中广泛分布,但并未持续存在体内。未发现与宿主细胞基因组整合的直接证据。 展开更多
关键词 pcdna3/sj SDISP DNA疫苗 组织分布 整合
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抗血吸虫DNA疫苗pcDNA3／SjHGPRT局部肌肉刺激与全身过敏实验 被引量：3
2
作者 蔡胜蓝 向选东 +3 位作者 汪世平 刘芬 高冬梅 彭先楚 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期528-530,共3页
目的评价日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3/Sj HGPRT的安全性。方法同体左右侧自身对比法对3只家兔进行局部肌肉刺激实验,22只豚鼠随机分为4组:无菌生理盐水阴性对照组、牛血清白蛋白阳性对照组、pcDNA3/Sj HGPRT低剂量组、pcDNA3/Sj HGPRT高剂... 目的评价日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3/Sj HGPRT的安全性。方法同体左右侧自身对比法对3只家兔进行局部肌肉刺激实验,22只豚鼠随机分为4组:无菌生理盐水阴性对照组、牛血清白蛋白阳性对照组、pcDNA3/Sj HGPRT低剂量组、pcDNA3/Sj HGPRT高剂量组,进行全身过敏试验。结果日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3/Sj HGPRT对家兔局部肌肉刺激反应轻微,对豚鼠无全身过敏反应。结论日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3/Sj HGPRT在该实验条件下安全。 展开更多
关键词 日本血吸虫 基因疫苗 pcdna3/sjHGPRT 组织分布 聚合酶链反应
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日本血吸虫真核表达重组质粒pcDNA3-Sj26的构建及其在树突状细胞中的表达 被引量：1
3
作者 沈定文 李雍龙 +2 位作者 刘文琪 龙小纯 刘娟 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2005年第2期65-70,共6页
本研究构建日本血吸虫2 6kDa谷胱苷肽转移酶(Sj2 6 )基因的真核表达重组质粒(pcDNA3 Sj2 6 ) ,并探讨其在树突状细胞(DC)中的表达。采用PCR扩增Sj2 6基因片段,定向克隆至真核表达载体pcDNA3中,阳性克隆经双酶切、PCR扩增鉴定后,双脱氧... 本研究构建日本血吸虫2 6kDa谷胱苷肽转移酶(Sj2 6 )基因的真核表达重组质粒(pcDNA3 Sj2 6 ) ,并探讨其在树突状细胞(DC)中的表达。采用PCR扩增Sj2 6基因片段,定向克隆至真核表达载体pcDNA3中,阳性克隆经双酶切、PCR扩增鉴定后,双脱氧链末端终止法进行序列测定。用脂质体介导DNA转染法将pcDNA3- Sj2 6转染DC ,G4 18加压筛选获得阳性克隆并传代培养,用RT PCR检测Sj2 6mRNA的转录水平,用SDS- PAGE、Westernblot和间接免疫荧光法检测Sj2 6蛋白在DC中的表达。结果PCR扩增得到特异的Sj2 6基因片段,双酶切及PCR鉴定表明获得正确的pcDNA3 -Sj2 6重组质粒;测序结果表明,核苷酸序列和推导的氨基酸序列与GenBank报道的Sj2 6的一致性均为99% ;RT PCR结果显示pcDNA3- Sj2 6转染的DC中有Sj2 6基因mRNA的表达,SDS -PAGE和Westernblot、间接免疫荧光法显示pcDNA3- Sj2 6转染的DC中有Sj2 6的表达。结果证实构建的真核表达重组质粒pcDNA3- Sj2 6成功的转染至DC中并在DC中获得表达。 展开更多
关键词 日本血吸虫 真核表达重组质粒 pcdna3-sj26 树突状细胞 基因转染 免疫功能
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日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3/SjSDISP对小鼠诱导自身免疫和免疫耐受的观察
4
作者 刘芬 汪世平 +2 位作者 刘明社 高冬梅 徐绍锐 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期147-149,178,共4页
目的观察日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3/SjSDISP免疫小鼠后可否引起自身免疫性疾病和免疫耐受。方法采用ELISA的方法检测pcDNA3/SjSDISP免疫小鼠后,SjSDISP特异性抗体的效价及自身免疫性抗体(抗核抗体和抗dsD-NA抗体)的产生情况,同时通过体... 目的观察日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3/SjSDISP免疫小鼠后可否引起自身免疫性疾病和免疫耐受。方法采用ELISA的方法检测pcDNA3/SjSDISP免疫小鼠后,SjSDISP特异性抗体的效价及自身免疫性抗体(抗核抗体和抗dsD-NA抗体)的产生情况,同时通过体重变化及主要脏器病理切片观察质粒DNA的毒性作用。结果以ELISA的方法检测小鼠产生的抗SjSDISP特异性抗体的效价为1:400,未检出自身免疫性抗体。实验组与对照组小鼠体重变化无明显差异,组织病理学观察未见异常变化。结论DNA疫苗pcDNA3/SSDISP对小鼠无诱导自身免疫性疾病和免疫耐受的迹象。 展开更多
关键词 pcdna3/sjsDISP DNA疫苗 抗核抗体 抗DSDNA抗体 免疫耐受
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