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葡萄病程相关蛋白1基因的克隆和表达分析 被引量:19
1
作者 侯丽霞 高超 +2 位作者 车永梅 赵方贵 刘新 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期57-62,共6页
以葡萄品种‘左优红’组培苗叶片为材料,利用同源克隆法获得其病程相关蛋白1基因VvPR1的cDNA全长序列。扩增片段大小为486bp,编码161个氨基酸,分子量17.5kDa,等电点PI=8.69,含有6个保守半胱氨酸,4个allergenV5/Tpx-1related保守结构域。... 以葡萄品种‘左优红’组培苗叶片为材料,利用同源克隆法获得其病程相关蛋白1基因VvPR1的cDNA全长序列。扩增片段大小为486bp,编码161个氨基酸,分子量17.5kDa,等电点PI=8.69,含有6个保守半胱氨酸,4个allergenV5/Tpx-1related保守结构域。VvPR1与多种植物PR1高度同源。实时定量PCR检测结果表明VvPR1在葡萄叶片中相对表达量最高;霜霉病菌、低温、盐和干旱胁迫均可显著诱导其表达;水杨酸、脱落酸、茉莉酸、一氧化氮、过氧化氢和硫化氢等亦可诱导其大量表达,据此推测,VvPR1参与了多种生物胁迫和非生物胁迫过程。 展开更多
关键词 葡萄 病程相关蛋白1 基因克隆 表达分析
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牡丹病程相关蛋白1基因的克隆及表达分析 被引量:15
2
作者 杨德翠 张玉喜 郑国生 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1583-1590,共8页
以牡丹柱枝孢叶斑病病原菌Cylindrocladium canadense处理的牡丹‘鲁菏红’叶片为材料,根据已发表植物PR1的保守区域设计兼并引物,利用RT-PCR和RACE技术,获得病程相关蛋白1基因的cDNA,命名为PsPR1。该序列全长为744bp,5′和3′非翻译区... 以牡丹柱枝孢叶斑病病原菌Cylindrocladium canadense处理的牡丹‘鲁菏红’叶片为材料,根据已发表植物PR1的保守区域设计兼并引物,利用RT-PCR和RACE技术,获得病程相关蛋白1基因的cDNA,命名为PsPR1。该序列全长为744bp,5′和3′非翻译区分别有42bp和225bp。该基因有477bp的开放阅读框(ORF),编码158个氨基酸,成熟蛋白分子量14.8kD,等电点(pI)6.19,具有典型的SCP_PR1_like保守结构域。通过Blast比对发现该基因与多种植物病程相关蛋白1基因具有高度同源性。通过实时荧光定量PCR检测,发现该基因在牡丹萼片中相对表达量最高,在正常生长的叶片中最少。该基因受病原菌C.canadense和信号物质SA的显著诱导,分别在处理的24h和12h达到最高峰,说明PsPR1可能参与了牡丹的抗病防御过程。 展开更多
关键词 牡丹 病程相关蛋白1 基因克隆 表达分析
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向日葵病程相关蛋白HaPR1基因的克隆与功能 被引量:12
3
作者 马立功 张匀华 +4 位作者 孟庆林 石凤梅 刘佳 李易初 王志英 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1819-1827,共9页
病程相关蛋白(pathogenesis-related proteins)经常被用作植物抗病反应的分子标记。本文在核盘菌诱导向日葵转录组文库的基础上克隆1个病程相关蛋白1基因Ha PR1的c DNA全长序列,并进行了表达模式和功能分析。结果表明,该基因c DNA全长... 病程相关蛋白(pathogenesis-related proteins)经常被用作植物抗病反应的分子标记。本文在核盘菌诱导向日葵转录组文库的基础上克隆1个病程相关蛋白1基因Ha PR1的c DNA全长序列,并进行了表达模式和功能分析。结果表明,该基因c DNA全长开放阅读框为489 bp,编码162个氨基酸,分子量为17.52 k D,等电点为8.19,具有6个保守半胱氨酸,4个保守的allergen V5/Tpx-1结构域,Gen Bank登录号为KR071874。经比较Ha PR1与多种物种PR1高度同源。实时荧光定量PCR检测结果表明,Ha PR1相对表达量在向日葵叶中最高,根中其次,茎中最低。干旱、盐、草酸、核盘菌及其代谢物均可显著诱导其表达。利用农杆菌介导法将该基因导入烟草,提高了转基因株系对核盘菌的抗性。对抗性株系烟草防御酶活性及丙二醛含量测定发现转基因烟草叶片在核盘菌胁迫下显著提高了SOD、POD和CAT活性,降低了MDA含量。初步推断Ha PR1具有抗核盘菌的功能。 展开更多
关键词 向日葵 病程相关蛋白1 基因克隆 功能分析
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白菜病程相关蛋白1基因cDNA全长的克隆与分析 被引量:8
4
作者 王彦华 侯喜林 申书兴 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期985-988,共4页
以水杨酸处理后的‘苏州青’白菜为材料,通过RT—PCR和RACE技术,获得了白菜病程相关蛋白PR-1基因的cDNA全长序列。该基因与甘蓝型油菜PR-1基因氨基酸序列的同源性为91%,与拟南芥的同源性为78%,与其它植物的同源性为57%~60%。So... 以水杨酸处理后的‘苏州青’白菜为材料,通过RT—PCR和RACE技术,获得了白菜病程相关蛋白PR-1基因的cDNA全长序列。该基因与甘蓝型油菜PR-1基因氨基酸序列的同源性为91%,与拟南芥的同源性为78%,与其它植物的同源性为57%~60%。Southern杂交表明该基因在白菜基因组中的拷贝数至少为2个。半定量RT—PCR分析表明,2mmol/L的水杨酸处理后12h,该基因的表达量达到高峰。 展开更多
关键词 白菜 病程相关蛋白1 水杨酸 RT—PCR
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桑树病程相关蛋白基因MuPR1-2的克隆及功能分析 被引量:5
5
作者 张华梁 王红 +5 位作者 刘琪 赵亚楠 赵怀宁 莫瑶瑶 盖英萍 冀宪领 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期979-988,共10页
病程相关蛋白(pathogenesis-related proteins,PRs)是植物体内受病原物或其他环境因子胁迫而诱导表达的一类蛋白质,在植物抗病反应过程中起着非常重要的作用。在桑树叶片中扩增得到MuPR1-2基因(Gen Bank登录号:KC453994),该基因编码区全... 病程相关蛋白(pathogenesis-related proteins,PRs)是植物体内受病原物或其他环境因子胁迫而诱导表达的一类蛋白质,在植物抗病反应过程中起着非常重要的作用。在桑树叶片中扩增得到MuPR1-2基因(Gen Bank登录号:KC453994),该基因编码区全长609 bp,编码蛋白质含有202个氨基酸,具有一个典型的信号肽和PR蛋白结构域以及PR1蛋白所共有的α-β-α夹心结构。将Mu PR1-2与绿色荧光蛋白基因gfp融合转入拟南芥,通过对转基因拟南芥根尖的显微结构观察,证明MuPR1-2蛋白定位于细胞壁或分泌到细胞间隙。转入MuPR1-2基因的拟南芥对丁香假单胞菌番茄致病变种(Pst DC3000)和灰霉菌具有较强的抵抗能力,表明Mu PR1-2在植物防御功能中具有重要作用。 展开更多
关键词 桑树 病程相关蛋白 MuPR1-2基因 基因克隆 转基因拟南芥 抗性
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大薯病程相关蛋白1(PR1)基因及其启动子序列的克隆与分析 被引量:5
6
作者 张青 赵景梅 +5 位作者 黄东益 肖鑫辉 夏薇 许云 黄小龙 吴文嫱 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期2078-2084,共7页
为了研究大薯Da PR1基因的表达模式及调控机理,本研究利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从高抗炭疽病大薯材料Da94中获得1个病程相关蛋白1(pathogensis-related protein 1,PR1)基因,命名为Da PR1。测序显示该基因包含长度为501 bp... 为了研究大薯Da PR1基因的表达模式及调控机理,本研究利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从高抗炭疽病大薯材料Da94中获得1个病程相关蛋白1(pathogensis-related protein 1,PR1)基因,命名为Da PR1。测序显示该基因包含长度为501 bp的完整开放阅读框(ORF),预测编码166个氨基酸。生物信息学分析表明该基因编码的蛋白具有典型SCP-PR1-like保守结构域,Blast比对表明Da PR1蛋白与多种植物的PR1蛋白高度同源。实时荧光定量PCR检测表明,Da PR1基因在高抗种质中受炭疽菌显著诱导,在侵染48 h时其相对表达量达到最大。通过巢式PCR扩增Da PR1上游转录调控序列的5'端,获得1 203 bp的Da PR1基因启动子,序列分析表明该区域除了含有基础的启动子元件CAAT-box和TATA-box外,还存在茉莉酸(JA)、赤霉素(GB)等激素响应元件及真菌诱导响应元件(W-box)。本研究通过克隆和分析Da PR1基因及其启动子序列,为进一步研究该基因的功能及其表达调控机制奠定了基础。 展开更多
关键词 大薯 病程相关蛋白1 启动子 基因克隆 生物信息学分析
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小麦病程相关蛋白1基因的亚细胞定位及信号肽鉴定 被引量:4
7
作者 张家瑞 孙僖 +4 位作者 梁芳 王菲 张艳俊 王海燕 刘大群 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期1-7,共7页
前期研究克隆获得了一个叶锈菌诱导的小麦病程相关蛋白1基因TaLr35PR1,明确了其基因结构和表达特征。本研究首先预测TaLr35PR1的信号肽和亚细胞定位情况,进而通过试验予以佐证。将信号肽编码的核酸序列克隆、连接到酵母信号肽诱捕载体pS... 前期研究克隆获得了一个叶锈菌诱导的小麦病程相关蛋白1基因TaLr35PR1,明确了其基因结构和表达特征。本研究首先预测TaLr35PR1的信号肽和亚细胞定位情况,进而通过试验予以佐证。将信号肽编码的核酸序列克隆、连接到酵母信号肽诱捕载体pSUC2T7M13ORI上,并转化到酵母蔗糖酶缺陷菌株YTK12中,明确了TaLr35PR1基因的信号肽具有分泌功能。同时,利用酶切连接的方法成功构建亚细胞定位重组体pCamA-TaLr35PR1-GFP,利用基因枪轰击技术瞬时转化洋葱表皮细胞。结果表明,pCamA-TaLr35PR1-GFP融合蛋白主要在细胞外表达,与亚细胞定位预测的结果一致。这些研究结果丰富了小麦病程相关蛋白1基因的研究内容,为进一步探索该类基因的生物学功能及其作用机制提供了研究基础。 展开更多
关键词 病程相关蛋白1 信号肽 分泌活性 亚细胞定位
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牡丹病程相关蛋白1表达载体的构建及遗传转化 被引量:3
8
作者 杨德翠 郑国生 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1267-1272,共6页
为了对牡丹病程相关蛋白1(PsPR1)基因功能进行研究,构建了PsPR1基因超表达载体pBI121-PsPR1,通过农杆菌介导法将PsPR1基因转入普通烟草NC89中。经过抗性筛选和RT-PCR分子检测,获得含PsPR1转基因植株。对转化烟草的T0代植株进行抗病性鉴... 为了对牡丹病程相关蛋白1(PsPR1)基因功能进行研究,构建了PsPR1基因超表达载体pBI121-PsPR1,通过农杆菌介导法将PsPR1基因转入普通烟草NC89中。经过抗性筛选和RT-PCR分子检测,获得含PsPR1转基因植株。对转化烟草的T0代植株进行抗病性鉴定,发现转PsPR1基因烟草能轻微增强对烟草黑胫病的抗性,说明PsPR1基因具有抗烟草黑胫病原菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae)的功能。 展开更多
关键词 牡丹 病程相关蛋白1 载体构建 遗传转化
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非洲菊PR-1基因的克隆与表达分析 被引量:3
9
作者 李乾玉 王秀美 +6 位作者 倪珊珊 王乐 张舒婷 夏朝水 叶炜 陈裕坤 赖钟雄 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2021年第7期1851-1859,共9页
以非洲菊‘G088’为材料,基于本研究所测序得到的非洲菊转录组数据(SRA:SRR9937065)的基础上,采用RT-PCR技术克隆获得2个病程相关蛋白1(PR-1)基因,分别命名为GjPR-1-like1和GjPR-1-like2(GenBank登录号:MW057342和MW057343),GjPR-1-like... 以非洲菊‘G088’为材料,基于本研究所测序得到的非洲菊转录组数据(SRA:SRR9937065)的基础上,采用RT-PCR技术克隆获得2个病程相关蛋白1(PR-1)基因,分别命名为GjPR-1-like1和GjPR-1-like2(GenBank登录号:MW057342和MW057343),GjPR-1-like1和GjPR-1-like2编码序列长度分别为534 bp和489 bp,可编码177和162个氨基酸。生物信息学分析表明,GjPR-1-like1属于碱性不稳定性蛋白,GjPR-1-like2属于弱酸性稳定蛋白;它们编码的蛋白质均含有CAP_PR-1和CAP superfamily保守结构域,属于富含半胱氨酸超家族蛋白,含有信号肽、跨膜结构和磷酸化位点;亚细胞定位表明均位于液泡中。PR-1基因在不同组织(叶、叶柄和根)、不同激素与逆境(SA、MeJA、ABA、NaCl)以及根腐病病原菌处理非洲菊的表达模式分析结果表明,GjPR-1-like1和GjPR-1-like2均在叶片中表达水平最高,在SA、MeJA、ABA和NaCl胁迫以及根腐病病原菌处理下,均显著影响GjPR-1-like1和GjPR-1-like2的表达水平。研究表明,GjPR-1-like1和GjPR-1-like2可能参与调控非洲菊生长发育过程,尤其是叶片的发育过程;且可能参与了非洲菊生物及非生物胁迫过程,尤其在响应非洲菊根腐病的抗病防御过程中发挥了一定的作用。 展开更多
关键词 非洲菊 病程相关蛋白1 基因克隆 激素 根腐病
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利用农杆菌介导法快速鉴定小麦病程相关蛋白基因TaPR1的功能 被引量:3
10
作者 梁芳 刘亦菲 +2 位作者 崔钟池 王海燕 刘大群 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期12-17,共6页
本研究拟采用农杆菌瞬时表达体系,在小麦叶片中快速表达目的基因,以鉴定其在小麦抗叶锈病防御反应中的功能。在前期研究基础上,将已克隆获得的小麦病程相关蛋白基因TaPR1构建到小麦过表达载体pLGY-02,转化农杆菌菌株GV3101。然后以感病... 本研究拟采用农杆菌瞬时表达体系,在小麦叶片中快速表达目的基因,以鉴定其在小麦抗叶锈病防御反应中的功能。在前期研究基础上,将已克隆获得的小麦病程相关蛋白基因TaPR1构建到小麦过表达载体pLGY-02,转化农杆菌菌株GV3101。然后以感病小麦品种‘金禾9123’为试材,将携带pLGY-02-TaPR1重组质粒的农杆菌GV3101注射到小麦叶片中,以空载体pLGY-02为对照。3 d后接种叶锈菌,14 d后观察小麦叶片表型。同时,在接菌后24、36、48 h时分别采集小麦叶片材料,利用DAB组织化学染色法,监测接种叶锈菌后叶片中H_2O_2的变化,并通过组织病理学显微观察,快速验证TaPR1在小麦与锈菌互作过程中的功能。结果发现,注射重组质粒pLGY-02-TaPR1的叶片发病程度、叶片孢子堆数均轻于、少于对照组叶片,且发病滞后;DAB组织化学染色结果表明,TaPR1表达量增加使得H_2O_2的清除在一定程度上受到抑制,小麦叶片中H_2O_2的分布与积累量均显著多于对照组叶片,说明TaPR1对小麦叶锈菌的致病性具有抑制作用,即TaPR1基因参与了小麦抗叶锈病防御反应。本研究成功构建了能在小麦中瞬时表达的重组载体pLGY-02-TaPR1,并建立了农杆菌介导的在小麦叶片细胞中高效表达外源基因的转化体系,为利用瞬时表达法验证小麦抗性基因功能奠定了基础。 展开更多
关键词 小麦 叶锈菌 病程相关蛋白基因 农杆菌 TaPR1 H2O2
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欧洲花楸病程相关蛋白基因Sa PR1-like的克隆及序列分析 被引量:2
11
作者 刘亚辉 李佳兴 +3 位作者 王升 王铁霖 袁杰 郭兰萍 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第21期118-123,共6页
目的:探究欧洲花楸类病程相关蛋白1(Sa PR1-like)在响应生物胁迫中的功能。方法:克隆得到了Sa PR1-like基因全长序列,并对该序列进行生物信息学分析;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)方法检测Sa PR1-like在欧洲花楸悬浮细胞响应har... 目的:探究欧洲花楸类病程相关蛋白1(Sa PR1-like)在响应生物胁迫中的功能。方法:克隆得到了Sa PR1-like基因全长序列,并对该序列进行生物信息学分析;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)方法检测Sa PR1-like在欧洲花楸悬浮细胞响应harpin蛋白胁迫后的表达特征。结果:克隆得到的Sa PR1-like基因包含1个完整开放阅读框,编码161个氨基酸。该编码蛋白质亲水性强且稳定,具有跨膜结构和信号肽,属于分泌蛋白。氨基酸序列比对分析发现,Sa PR1-like蛋白C端具有高度保守结构域[富含半胱氨酸的分泌蛋白、抗原5和致病性相关蛋白1肽段(CAPE)],推测其在欧洲花楸响应生物胁迫中发挥作用。harpin蛋白诱导欧洲花楸悬浮细胞24 h后,Sa PR1-like基因表达量显著提高。结论:克隆得到了欧洲花楸Sa PR1-like基因,并证明其在响应生物胁迫时表达和积累,可为进一步阐释欧洲花楸响应生物胁迫机制奠定基础和提供参考。 展开更多
关键词 病程相关蛋白1 欧洲花楸 悬浮细胞 基因克隆 生物胁迫 序列分析 荧光定量分析
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The Influence of Co-Suppressing Tomato 1-Aminocyclopropane-1-Carboxylic Acid OxidaseⅠon the Expression of Fruit Ripening-Related and Pathogenesis-Related Protein Genes
12
作者 HU Zong-li CHEN Xu-qing +2 位作者 CHEN Guo-ping Lü Li-juan Grierson Donald 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2007年第4期406-413,共8页
The purpose of this study is to explore the influence of co-suppressing tomato ACC oxidase Ⅰ on the expression of fruit ripening-related and pathogenesis-related protein genes, and on the biosynthesis of endogenous e... The purpose of this study is to explore the influence of co-suppressing tomato ACC oxidase Ⅰ on the expression of fruit ripening-related and pathogenesis-related protein genes, and on the biosynthesis of endogenous ethylene and storage ability of fruits. Specific fragments of several fruit ripening-related and pathogenesis-related protein genes from tomato (Lycopersicon esculentum) were cloned, such as the l-aminocyclopropane-1-carboxylic acid oxidase 1 gene (LeAC01), 1- aminocyclopropane-l-carboxylic acid oxidase 3 gene (LeAC03), EIN3-binding F-box 1 gene (LeEBF1), pathogenesis-related protein 1 gene (LePR1), pathogenesis-related protein 5 gene (LePR5), and pathogenesis-related protein osmotin precursor gene (LeNP24) by PCR or RT-PCR. Then these specific DNA fragments were used as probes to hybridize with the total RNAs extracted from the wild type tomato Ailsa Craig (AC++) and the LeAC01 co-suppression tomatoes (V1187 and T4B), respectively. At the same time, ethylene production measurement and storage experiment of tomato fruits were carded out. The hybridization results indicated that the expression of fruit ripening-related genes such as LeACO3 and LeEBF1, and pathogenesis-related protein genes such as LePR1, LePR5, and LeNP24, were reduced sharply, and the ethylene production in the fruits, wounded leaves decreased and the storage time of ripening fruits was prolonged, when the expression of LeACO1 gene in the transgenic tomato was suppressed. In the co-suppression tomatoes, the expression of fruit ripening-related and pathogenesis-related protein genes were restrained at different degrees, the biosynthesis of endogenous ethylene decreased and the storage ability of tomato fruits increased. 展开更多
关键词 CO-SUPPRESSION LeACO1 fruit ripening pathogenesis-related protein genes
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水稻病程相关蛋白质OsPR1A参与光响应信号 被引量:1
13
作者 燕高伟 刘玉晴 +4 位作者 张彤 王田幸子 李莉云 刘国振 窦世娟 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期23-29,共7页
水稻中有900多个PR基因,其中OsPR1A属于类丝氨酸羧肽酶家族,被广泛作为抗性反应的标志物。本试验对水稻幼苗进行冷、热、旱、淹、盐以及不同光照处理,提取全蛋白质并进行免疫印迹(Western blot,WB)分析,发现在不同逆境中OsPR1A的表达量... 水稻中有900多个PR基因,其中OsPR1A属于类丝氨酸羧肽酶家族,被广泛作为抗性反应的标志物。本试验对水稻幼苗进行冷、热、旱、淹、盐以及不同光照处理,提取全蛋白质并进行免疫印迹(Western blot,WB)分析,发现在不同逆境中OsPR1A的表达量呈现不同变化趋势,尤其对光照的响应明显,全光照下OsPR1A表达量逐步上升,昼夜交替的光照情况下OsPR1A的表达量保持稳定,全黑暗环境中表达逐渐下降,离体叶片中OsPR1A的表达与活体类似。初步证实,光有可能通过OsPR1A参与调节水稻的防卫反应,使水稻在生长发育和抗性反应过程中达到平衡,从而适应各种环境变化。 展开更多
关键词 水稻 病程相关蛋白质 OsPR1A 非生物胁迫 光照
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烟草病程相关蛋白基因启动子的克隆及序列分析 被引量:1
14
作者 马兵钢 胡新文 +1 位作者 牛建新 郑学勤 《生物技术》 CAS CSCD 2004年第1期1-3,共3页
在植物的防御反应中 ,会诱导产生一些宿主编码的蛋白 ,叫做病程相关蛋白。该文通过PCR扩增 ,从烟草 (Nicotianatabacumcv.Samsun)中克隆了水扬酸诱导表达的PR - 1a基因的两个启动子TP12及TP13。以期用于构建诱导表达基因敲除系统 ,并用... 在植物的防御反应中 ,会诱导产生一些宿主编码的蛋白 ,叫做病程相关蛋白。该文通过PCR扩增 ,从烟草 (Nicotianatabacumcv.Samsun)中克隆了水扬酸诱导表达的PR - 1a基因的两个启动子TP12及TP13。以期用于构建诱导表达基因敲除系统 ,并用于无性繁殖植物的无标记基因转化。序列分析表明 ,启动子TP12含 1313个核苷酸 ,与已报道的序列比较 ,核苷酸的同源性为 98.6 % ;TP13含 6 5 4个核苷酸 ,与已报道的序列比较 ,核苷酸的同源性为 99.4 %。 展开更多
关键词 植物 防御反应 烟草 病程相关蛋白基因 启动子 克隆 序列分析
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小麦病程相关蛋白wheatwin 1的表达及其对黄曲霉生长及产毒的影响
15
作者 王岩 张帅兵 +3 位作者 吕扬勇 翟焕趁 蔡静平 胡元森 《河南工业大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2018年第2期82-86,共5页
黄曲霉在储粮中的大量生长可严重危害粮食的储藏品质甚至产生真菌毒素。研究表明,小麦籽粒中含有多种病程相关蛋白,具有较强储藏霉变抗性的小麦品种胚部含有较多的病程相关蛋白,但其对储粮霉菌的生长和产毒的影响尚不清楚。通过PCR手段... 黄曲霉在储粮中的大量生长可严重危害粮食的储藏品质甚至产生真菌毒素。研究表明,小麦籽粒中含有多种病程相关蛋白,具有较强储藏霉变抗性的小麦品种胚部含有较多的病程相关蛋白,但其对储粮霉菌的生长和产毒的影响尚不清楚。通过PCR手段扩增从小麦基因组DNA中扩增出了病程相关蛋白wheatwin 1基因并将其在大肠杆菌中进行了表达,对wheatwin 1蛋白进行复性和纯化后分析其对黄曲霉生长及产生毒素的影响。结果表明编码成熟wheatwin 1蛋白的DNA序列长度为378 bp,将其在大肠杆菌中与谷胱甘肽转移酶融合表达可获得包涵体蛋白。将包涵体蛋白复性并利用Thrombin酶切后获得了具有核酸酶活性的wheatwin 1,其可降解黄曲霉RNA;进一步研究表明100 g/m L wheatwin蛋白可显著抑制黄曲霉孢子的萌发和黄曲霉毒素的积累。为进一步揭示wheatwin蛋白对黄曲霉生长和产毒的机理研究奠定了基础。 展开更多
关键词 小麦 病程相关蛋白 wheatwin 1 黄曲霉 真菌毒素
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巴西橡胶树病程相关蛋白基因(HbPR1)的克隆及分析 被引量:4
16
作者 罗红丽 秦云霞 +1 位作者 闫志烨 向鹏 《热带作物学报》 CSCD 2011年第8期1499-1502,共4页
利用同源克隆技术,在前期课题组对橡胶树转录组进行测序的基础上,根据模式植物中PR1蛋白的氨基酸序列进行同源搜索并设计引物,通过RT-PCR方法扩增巴西橡胶树PR1同源基因的cDNA片段,命名为HbPR1。该片段包含一个450 bp的开放阅读框,编码... 利用同源克隆技术,在前期课题组对橡胶树转录组进行测序的基础上,根据模式植物中PR1蛋白的氨基酸序列进行同源搜索并设计引物,通过RT-PCR方法扩增巴西橡胶树PR1同源基因的cDNA片段,命名为HbPR1。该片段包含一个450 bp的开放阅读框,编码150个氨基酸的多肽。生物信息学分析结果表明,该氨基酸序列与杨树(Populus tomentosa)、葡萄(Vitis vinifera)和拟南芥(Arabidopsis thaliana)的PR1蛋白高度同源,同源性分别为76%,74%和72%,并含有SCP_PR1_like结构域。半定量分析结果表明,该基因表达受水杨酸的诱导。以上结果暗示该基因为橡胶树的PR1同源基因,可作为橡胶树系统获得性抗性产生的标签基因。 展开更多
关键词 巴西橡胶树 系统获得性抗性 病程相关蛋白1(PR1)
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费尔干猪毛菜病程相关蛋白SfPR1a基因的异源表达增强了烟草对干旱、盐及叶斑病的抗性 被引量:4
17
作者 衡友强 游西龙 王艳 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期503-512,共10页
为明确一年生草本盐生植物费尔干猪毛菜(Salsola ferganica Drob.)病程相关蛋白基因SfPR1a (GenBank登录号为JQ670917)是否参与了植物对逆境胁迫的响应,采用qRT-PCR检测了该基因在不同组织部位和脱落酸(ABA)、茉莉酸(JAs)、乙烯合成直... 为明确一年生草本盐生植物费尔干猪毛菜(Salsola ferganica Drob.)病程相关蛋白基因SfPR1a (GenBank登录号为JQ670917)是否参与了植物对逆境胁迫的响应,采用qRT-PCR检测了该基因在不同组织部位和脱落酸(ABA)、茉莉酸(JAs)、乙烯合成直接前体(ACC)等相关激素胁迫及NaCl处理下的表达规律,同时对转基因烟草在盐、旱及丁香假单胞菌等胁迫下的抗性进行了鉴定。结果显示, SfPR1a基因在费尔干猪毛菜根中的表达量显著高于茎叶中,且受到ABA、JAs、ACC、NaCl的积极诱导;干旱胁迫下,转基因烟草的丙二醛(MDA)含量显著低于野生型烟草,显示出较强的抗旱表型;盐胁迫下,异源表达SfPR1a的转基因烟草幼苗生长显著优于野生型烟草;丁香假单胞菌攻毒后的转基因烟草叶片呈现严重的坏死反应,但植株的整体抗性表型显著优于野生型烟草;亚细胞定位结果显示该蛋白定位于植物细胞质外体空间。以上结果表明,费尔干猪毛菜病程相关蛋白SfPR1a基因参与了植物对非生物及生物胁迫的抗性。 展开更多
关键词 病程相关蛋白基因SfPR1a 表达规律 转基因烟草 抗性功能 亚细胞定位
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烟草PR1a基因启动子的克隆及其活性检测 被引量:1
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作者 王云鹏 韦正乙 +2 位作者 邢少辰 林春晶 王丕武 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2011年第5期154-160,共7页
【目的】从烟草中克隆得到病程相关蛋白1a基因的启动子PR1aP,并对其进行活性检测。【方法】通过PCR方法,从烟草基因组中克隆病程相关蛋白1a基因的启动子PR1aP,构建该启动子驱动的可溶性绿色荧光蛋白基因(smGFP)的植物表达载体p3300-PR1a... 【目的】从烟草中克隆得到病程相关蛋白1a基因的启动子PR1aP,并对其进行活性检测。【方法】通过PCR方法,从烟草基因组中克隆病程相关蛋白1a基因的启动子PR1aP,构建该启动子驱动的可溶性绿色荧光蛋白基因(smGFP)的植物表达载体p3300-PR1aP-GFP,并用农杆菌介导法将其导入烟草,检测转基因烟草植株经水杨酸(SA)诱导前后GFP的表达水平,通过SDS-PAGE和ELISA对其在不同诱导条件下GFP的表达情况进行分析。【结果】序列分析表明,PR1aP的长度为1 320 bp,含已报道序列的全部顺式作用元件,如水杨酸相关的W-box、ACGT序列等,也有增强子as-a-like元件及CAAT、TATA等常见应答元件。PCR检测结果显示,成功地获得了转基因植株;荧光检测表明,启动子PR1aP在正常条件下不表现活性,而在水杨酸诱导下有GFP表达。SDS-PAGE和ELISA分析结果表明,当水杨酸诱导时间为72 h、质量浓度为0.25 mg/L时,GFP表达量达到最大值,GFP最高占到总可溶性蛋白的0.083%,产率最高可达15μg/g。【结论】烟草病程相关蛋白1a的启动子PR1aP具有水杨酸诱导性。 展开更多
关键词 烟草 病程相关蛋白1a启动子 水杨酸 绿色荧光蛋白
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旋毛虫胶质瘤致病相关蛋白1样蛋白2对宿主免疫功能的影响
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作者 孙晓轲 陆滢滢 +6 位作者 齐萌 陈伟 陆明敏 徐立新 宋小凯 李祥瑞 严若峰 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期727-737,共11页
[目的]本文旨在分析旋毛虫胶质瘤致病相关蛋白1样蛋白2(GLIPR1L2)对宿主免疫功能的影响。[方法]用反转录PCR(RT-PCR)方法克隆旋毛虫GLIPR1L2基因,构建表达载体,获得重组蛋白(rGLIPR1L2),用Western blot分析rGLIPR1L2的反应原性。将大鼠... [目的]本文旨在分析旋毛虫胶质瘤致病相关蛋白1样蛋白2(GLIPR1L2)对宿主免疫功能的影响。[方法]用反转录PCR(RT-PCR)方法克隆旋毛虫GLIPR1L2基因,构建表达载体,获得重组蛋白(rGLIPR1L2),用Western blot分析rGLIPR1L2的反应原性。将大鼠外周血单核细胞(PBMC)与rGLIPR1L2共孵育,用免疫荧光检测技术(IFA)检测rGLIPR1L2与大鼠PBMC的结合,分析rGLIPR1L2对细胞增殖、迁移、NO分泌、吞噬功能和细胞凋亡的影响。大鼠腹腔注射rGLIPR1L2后,测定血清中IL-4、IL-9、IL-17、TGF-β、IFN-γ等细胞因子的变化。背部皮下多点注射对小鼠进行免疫后,ELISA检测特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体的变化,收集旋毛虫成虫和肌肉幼虫并计数,分析rGLIPR1L2的免疫保护作用。[结果]体外试验表明,rGLIPR1L2能够促进大鼠PBMC的增殖与迁移,增强细胞NO分泌和吞噬功能,一定浓度下可提高细胞凋亡比例。体内试验显示rGLIPR1L2能促进大鼠IL-4分泌,但对细胞因子IFN-γ、IL-9、IL-17和TGF-β的分泌无显著影响。rGLIPR1L2免疫小鼠可引起其体内特异性IgG抗体水平显著升高,且可显著减少受感染小鼠的肌肉幼虫数。[结论]旋毛虫胶质瘤致病相关蛋白1样蛋白2能通过多种途径影响宿主免疫功能。 展开更多
关键词 旋毛虫 胶质瘤致病相关蛋白1样蛋白2 外周血单核细胞 免疫保护
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急性髓系白血病GLIPR1基因甲基化及其表达
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作者 梁婷 谭潭 +5 位作者 肖艳华 易红 李萃 彭芳 陈主初 肖志强 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期388-394,共7页
目的:检测GLIPR1基因在急性髓系白血病(AML)细胞株和AML患者骨髓细胞中的甲基化状态和表达水平,探讨其表达水平与启动子甲基化的关系。方法:以5株白血病细胞株,以及54例治疗前AML患者骨髓、48例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者骨髓、40例... 目的:检测GLIPR1基因在急性髓系白血病(AML)细胞株和AML患者骨髓细胞中的甲基化状态和表达水平,探讨其表达水平与启动子甲基化的关系。方法:以5株白血病细胞株,以及54例治疗前AML患者骨髓、48例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者骨髓、40例慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓、35例对照骨髓和8例治疗后完全缓解AML患者骨髓为样本,采用RT-PCR检测GLIPR1mRNA表达水平,采用甲基化特异PCR(MS-PCR)方法检测GLIPR1基因甲基化状态,并对GLIPR1mRNA表达水平与其甲基化状态进行相关性分析。结果:GLIPR1基因在AML细胞株中的表达水平低于CML急性变细胞株和ALL细胞株,而前者甲基化水平高于后者。5-aza-2dC处理细胞后,GLIPR1基因在AML细胞株中的表达水平明显上调,而在CML急性变细胞株和ALL细胞株中的表达水平上调不明显。GLIPR1基因在AML骨髓中的表达水平(0.38±0.20)明显低于ALL骨髓(0.76±0.18)、CML骨髓(0.80±0.14)和对照骨髓(0.85±0.12),在完全缓解AML骨髓中的表达水平明显高于治疗前AML骨髓(0.78±0.13vs.0.36±0.20);而ALL和CML骨髓中的表达水平与对照骨髓比较无明显差异(P>0.05)。GLIPR1基因在AML骨髓的甲基化阳性率(81.5%)明显高于ALL骨髓(37.5%)、CML骨髓(27.5%)和对照骨髓(14.3%),在完全缓解AML骨髓中的甲基化阳性率明显低于治疗前骨髓(12.5%vs.75.0%);而在ALL和CML骨髓中的甲基化阳性率与对照骨髓比较无明显差异(P>0.05)。GLIPR1基因在AML骨髓中的表达水平与其甲基化呈负相关。结论:GLIPR1基因在AML中表达下调或缺失及启动子甲基化可能是导致GLIPR1基因表达沉默的原因,GLIPR1基因表达和甲基化水平对判断AML患者的疗效有一定意义。 展开更多
关键词 GLIPR1 急性髓系白血病 甲基化 表达
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