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特异性沉默Eca109细胞系stathmin基因siRNA表达载体的构建 被引量：1
1
作者 王峰 王留兴 +2 位作者 王瑞林 樊青霞 赵培荣 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期549-552,643,共5页
目的构建并筛选特异性沉默stathmin基因的pSUPER-S逆转录病毒载体以及稳定表达的细胞克隆。方法用DNA重组技术,将64nt能转录产生靶向stathmin小发夹RNA(shRNA)的寡核苷酸序列,定向克隆入逆转录病毒载体pSUPER-EGFP,应用脂质体将重组逆... 目的构建并筛选特异性沉默stathmin基因的pSUPER-S逆转录病毒载体以及稳定表达的细胞克隆。方法用DNA重组技术,将64nt能转录产生靶向stathmin小发夹RNA(shRNA)的寡核苷酸序列,定向克隆入逆转录病毒载体pSUPER-EGFP,应用脂质体将重组逆转录病毒载体pSUPER-S转染细胞系Eca109,G418筛选建立稳定产生逆转录病毒的细胞克隆,RT-PCR检测转染细胞stathminmR-NA的表达。结果重组逆转录病毒载体经EcoRⅠ、HindⅢ双酶切,可见4692nt和285nt条带;测序结果表明插入序列正确;重组载体转染Eca109细胞,可表达绿色荧光蛋白(EGFP),经G418筛选得到抗性细胞克隆,转染细胞stathmin mRNA的表达较对照组明显减弱。结论特异性沉默stathmin基因的pSUPER-S逆转录病毒载体以及稳定表达的细胞系构建和筛选成功。 展开更多
关键词 小干扰RNA STATHMIN基因 psuper-egfp载体 ECA109细胞
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