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重组质粒pSUPER-HBs RNAi的构建及筛选
1
作者
罗祥基
程庆保
+5 位作者
徐峰
谭蔚锋
姜小清
张柏和
王红阳
吴孟超
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第12期1491-1494,共4页
目的:利用pSUPER-RNAi载体系统进行HBsRNAi序列的初步筛选和干扰效果鉴定。方法:设计并合成针对HBs基因区的3条siRNA(HBs-siRNA1、HBs-siRNA2、HBs-siRNA3),构建3种重组载体pSUPER-HBs-siRNA,与HBV质粒同时瞬转人胚肾293T细胞,72h后观...
目的:利用pSUPER-RNAi载体系统进行HBsRNAi序列的初步筛选和干扰效果鉴定。方法:设计并合成针对HBs基因区的3条siRNA(HBs-siRNA1、HBs-siRNA2、HBs-siRNA3),构建3种重组载体pSUPER-HBs-siRNA,与HBV质粒同时瞬转人胚肾293T细胞,72h后观察转染效果,实时定量PCR和ELISA法鉴定3种干扰序列对HBs的干扰效果,筛选最佳干扰序列。结果:成功构建3种干扰质粒pSUPER-HBs-siRNA,能高效转染人胚肾上皮细胞293T,转染效率在70%以上;实时定量PCR和ELISA法结果均显示HBs-siRNA2可有效抑制HBs的表达,抵制率可达80%,而HBs-siR-NA1、HBs-siRNA3干扰效果不显著,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:成功构建3种干扰质粒pSUPER-HBs-siR-NA,筛选出其中能有效抑制HBs基因表达的pSUPER-HBs-siRNA2序列,为后续研究奠定了基础。
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关键词
psuper
载体
hbs
基因
小RNA干扰
筛选
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职称材料
题名
重组质粒pSUPER-HBs RNAi的构建及筛选
1
作者
罗祥基
程庆保
徐峰
谭蔚锋
姜小清
张柏和
王红阳
吴孟超
机构
第二军医大学东方肝胆外科医院胆道一科
出处
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第12期1491-1494,共4页
基金
上海市科委重点基金(54119519)~~
文摘
目的:利用pSUPER-RNAi载体系统进行HBsRNAi序列的初步筛选和干扰效果鉴定。方法:设计并合成针对HBs基因区的3条siRNA(HBs-siRNA1、HBs-siRNA2、HBs-siRNA3),构建3种重组载体pSUPER-HBs-siRNA,与HBV质粒同时瞬转人胚肾293T细胞,72h后观察转染效果,实时定量PCR和ELISA法鉴定3种干扰序列对HBs的干扰效果,筛选最佳干扰序列。结果:成功构建3种干扰质粒pSUPER-HBs-siRNA,能高效转染人胚肾上皮细胞293T,转染效率在70%以上;实时定量PCR和ELISA法结果均显示HBs-siRNA2可有效抑制HBs的表达,抵制率可达80%,而HBs-siR-NA1、HBs-siRNA3干扰效果不显著,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:成功构建3种干扰质粒pSUPER-HBs-siR-NA,筛选出其中能有效抑制HBs基因表达的pSUPER-HBs-siRNA2序列,为后续研究奠定了基础。
关键词
psuper
载体
hbs
基因
小RNA干扰
筛选
Keywords
psuper
vectors
hbs
gene
small
interfering
RNA
screening
分类号
R373.21 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组质粒pSUPER-HBs RNAi的构建及筛选
罗祥基
程庆保
徐峰
谭蔚锋
姜小清
张柏和
王红阳
吴孟超
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008
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