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根癌农杆菌介导双价载体pPK2转化黑曲霉条件的研究
被引量：
5
1
作者
王艳
王文雅
袁其朋
《食品科技》
CAS
北大核心
2013年第8期56-61,共6页
研究探讨了不同条件对双价载体pPK2转化黑曲霉的影响,随后在T-DNA插入的黑曲霉突变体中筛选了木聚糖酶高产菌株。以根癌农杆菌EHA105为介导菌,黑曲霉2459为受体菌株,用潮霉素B基因为筛选标记的研究结果显示,较优的转化条件为:根癌农杆...
研究探讨了不同条件对双价载体pPK2转化黑曲霉的影响,随后在T-DNA插入的黑曲霉突变体中筛选了木聚糖酶高产菌株。以根癌农杆菌EHA105为介导菌,黑曲霉2459为受体菌株,用潮霉素B基因为筛选标记的研究结果显示,较优的转化条件为:根癌农杆菌的诱导时间4h、乙酰丁香酮(AS)的浓度200μmol/L、培养基的pH4.75、根癌农杆菌的初始浓度OD600=0.7、共培养时间36h、受体形式以匀浆处理的黑曲霉菌体为好,在这些条件下pPK2对黑曲霉的转化率达到120cfu/107cfu孢子;转化菌株经过5次连续培养后仍然稳定;突变菌株中,木聚糖酶活性较对照最高提高了86%。上述研究为进一步改造pPK2质粒,将其应用于丝状真菌基因工程奠定了基础。
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关键词
ppk
2
根癌农杆菌介导的转化
黑曲霉
转化效率
原文传递
结核分支杆菌核酸适配体研究进展
被引量：
4
2
作者
杨倩
王全凯
+3 位作者
宋战昀
李敏思
张健
王振国
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2014年第12期122-126,共5页
结核分支杆菌(MTB)是引起多种宿主感染结核病的重要病原菌,由于结核分支杆菌耐药菌株的产生,导致结核病在世界范围内呈高发趋势。由于MTB检出率较低,开发一种简单快速的诊断方法迫在眉睫。指数富集配体系统进化技术(SELEX)的原理是从随...
结核分支杆菌(MTB)是引起多种宿主感染结核病的重要病原菌,由于结核分支杆菌耐药菌株的产生,导致结核病在世界范围内呈高发趋势。由于MTB检出率较低,开发一种简单快速的诊断方法迫在眉睫。指数富集配体系统进化技术(SELEX)的原理是从随机寡核苷酸文库中筛选到能特异性结合靶物质的寡核苷酸配体(称为适配体)。论文对近几年国内外通过SELEX技术对结核分支杆菌筛选出的适配体做一综述,适配体的靶物质分别为分泌蛋白MPT64,CFP10-ESAT6蛋白,多磷酸激酶2(PPK2)以及结核分支杆菌(H37Rv株)整个菌体。体外筛选的结核分支杆菌适配体,能对结核病做出早期诊断,并能作为MTB疫苗的免疫佐剂,在临床诊断及药物研究等方面有很大应用前景。
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关键词
结核分支杆菌
适配体
MPT64蛋白
CFP10-ESAT6
蛋白
多磷酸激酶
2
H37Rv菌株
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职称材料
β变形菌多聚磷酸激酶PPK2的原核表达及纯化
被引量：
1
3
作者
闫东科
宫艳超
+3 位作者
吕平
许凤霞
李冬
马素静
《山东农业大学学报（自然科学版）》
北大核心
2020年第2期212-216,共5页
多聚磷酸激酶2(Polyphosphate kinase 2, PPK2)在众多病原菌的致病性中发挥重要作用,而人等后生动物体内未发现ppk2基因,因而PPK2是新型抗生素开发的靶点。为探索β变形菌CB中PPK2在大肠埃希菌中的可溶性表达,获得纯度、浓度均可用于蛋...
多聚磷酸激酶2(Polyphosphate kinase 2, PPK2)在众多病原菌的致病性中发挥重要作用,而人等后生动物体内未发现ppk2基因,因而PPK2是新型抗生素开发的靶点。为探索β变形菌CB中PPK2在大肠埃希菌中的可溶性表达,获得纯度、浓度均可用于蛋白质晶体学研究的PPK2蛋白。首先,采用生物信息学方法对PPK2蛋白的基本理化性质和二级结构进行预测,利用限制性核酸内切酶酶切位点NdeΙ和HindⅢ将ppk2基因插入到原核表达载体pET30a中,并通过全质粒酶切法和目的基因测序确认重组表达载体PPK2/pET30a的准确性;接下来,重组表达载体通过物理法转入大肠埃希菌BL21(DE3)菌株中,利用IPTG诱导目的蛋白PPK2在37℃、25℃和16℃下试表达,并通过SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定分析表达产物;最后,利用3 L表达菌液进行放大培养,表达产物先后经Ni-IDA亲和色谱柱、阴离子交换色谱柱和凝胶过滤色谱柱分离纯化。结果显示:大肠原核表达系统可在16℃、终浓度为0.2m M·L-1的IPTG诱导下稳定高效表达以可溶性单体形式存在的,相对分子质量约为35 ku的PPK2蛋白;放大培养中产生的PPK2蛋白经系列色谱法纯化后浓度可达12 mg·mL-1,纯度为95%,可用于PPK2蛋白的结构和功能研究。
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关键词
β变形菌
多聚磷酸激酶
ppk
2
原核表达
纯化
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职称材料
题名
根癌农杆菌介导双价载体pPK2转化黑曲霉条件的研究
被引量：
5
1
作者
王艳
王文雅
袁其朋
机构
北京化工大学生命科学与技术学院
出处
《食品科技》
CAS
北大核心
2013年第8期56-61,共6页
基金
中央高校基金项目(zz1026)
国家高技术研究发展计划"863计划"项目(2012AA022303)
文摘
研究探讨了不同条件对双价载体pPK2转化黑曲霉的影响,随后在T-DNA插入的黑曲霉突变体中筛选了木聚糖酶高产菌株。以根癌农杆菌EHA105为介导菌,黑曲霉2459为受体菌株,用潮霉素B基因为筛选标记的研究结果显示,较优的转化条件为:根癌农杆菌的诱导时间4h、乙酰丁香酮(AS)的浓度200μmol/L、培养基的pH4.75、根癌农杆菌的初始浓度OD600=0.7、共培养时间36h、受体形式以匀浆处理的黑曲霉菌体为好,在这些条件下pPK2对黑曲霉的转化率达到120cfu/107cfu孢子;转化菌株经过5次连续培养后仍然稳定;突变菌株中,木聚糖酶活性较对照最高提高了86%。上述研究为进一步改造pPK2质粒,将其应用于丝状真菌基因工程奠定了基础。
关键词
ppk
2
根癌农杆菌介导的转化
黑曲霉
转化效率
Keywords
ppk
2
Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation
Aspergillus niger
transformationefficiency
分类号
Q939.97 [生物学—微生物学]
原文传递
题名
结核分支杆菌核酸适配体研究进展
被引量：
4
2
作者
杨倩
王全凯
宋战昀
李敏思
张健
王振国
机构
吉林农业大学
吉林省中韩动物科学研究院
吉林出入境检验检疫局
甘肃农业大学
出处
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2014年第12期122-126,共5页
基金
国家自然科学基金项目(31001065)
国家质检总局科技计划项目(2013IK033)
国家国际科技合作专项项目(2011DFA32900)
文摘
结核分支杆菌(MTB)是引起多种宿主感染结核病的重要病原菌,由于结核分支杆菌耐药菌株的产生,导致结核病在世界范围内呈高发趋势。由于MTB检出率较低,开发一种简单快速的诊断方法迫在眉睫。指数富集配体系统进化技术(SELEX)的原理是从随机寡核苷酸文库中筛选到能特异性结合靶物质的寡核苷酸配体(称为适配体)。论文对近几年国内外通过SELEX技术对结核分支杆菌筛选出的适配体做一综述,适配体的靶物质分别为分泌蛋白MPT64,CFP10-ESAT6蛋白,多磷酸激酶2(PPK2)以及结核分支杆菌(H37Rv株)整个菌体。体外筛选的结核分支杆菌适配体,能对结核病做出早期诊断,并能作为MTB疫苗的免疫佐剂,在临床诊断及药物研究等方面有很大应用前景。
关键词
结核分支杆菌
适配体
MPT64蛋白
CFP10-ESAT6
蛋白
多磷酸激酶
2
H37Rv菌株
Keywords
MTB
aptamer
MPT64 CFP10-ESAT6
ppk
2
H37Rv
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
β变形菌多聚磷酸激酶PPK2的原核表达及纯化
被引量：
1
3
作者
闫东科
宫艳超
吕平
许凤霞
李冬
马素静
机构
天津职业大学生物与环境工程学院
天津渤海职业技术学院环境与化工学院
出处
《山东农业大学学报（自然科学版）》
北大核心
2020年第2期212-216,共5页
基金
天津职业大学科学研究基金(No.20181111)。
文摘
多聚磷酸激酶2(Polyphosphate kinase 2, PPK2)在众多病原菌的致病性中发挥重要作用,而人等后生动物体内未发现ppk2基因,因而PPK2是新型抗生素开发的靶点。为探索β变形菌CB中PPK2在大肠埃希菌中的可溶性表达,获得纯度、浓度均可用于蛋白质晶体学研究的PPK2蛋白。首先,采用生物信息学方法对PPK2蛋白的基本理化性质和二级结构进行预测,利用限制性核酸内切酶酶切位点NdeΙ和HindⅢ将ppk2基因插入到原核表达载体pET30a中,并通过全质粒酶切法和目的基因测序确认重组表达载体PPK2/pET30a的准确性;接下来,重组表达载体通过物理法转入大肠埃希菌BL21(DE3)菌株中,利用IPTG诱导目的蛋白PPK2在37℃、25℃和16℃下试表达,并通过SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定分析表达产物;最后,利用3 L表达菌液进行放大培养,表达产物先后经Ni-IDA亲和色谱柱、阴离子交换色谱柱和凝胶过滤色谱柱分离纯化。结果显示:大肠原核表达系统可在16℃、终浓度为0.2m M·L-1的IPTG诱导下稳定高效表达以可溶性单体形式存在的,相对分子质量约为35 ku的PPK2蛋白;放大培养中产生的PPK2蛋白经系列色谱法纯化后浓度可达12 mg·mL-1,纯度为95%,可用于PPK2蛋白的结构和功能研究。
关键词
β变形菌
多聚磷酸激酶
ppk
2
原核表达
纯化
Keywords
β proteobacterium
polyphosphoric kinase
ppk
2
prokaryotic expression
purification
分类号
Q814.1 [生物学—生物工程]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
根癌农杆菌介导双价载体pPK2转化黑曲霉条件的研究
王艳
王文雅
袁其朋
《食品科技》
CAS
北大核心
2013
5
原文传递
2
结核分支杆菌核酸适配体研究进展
杨倩
王全凯
宋战昀
李敏思
张健
王振国
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2014
4
下载PDF
职称材料
3
β变形菌多聚磷酸激酶PPK2的原核表达及纯化
闫东科
宫艳超
吕平
许凤霞
李冬
马素静
《山东农业大学学报（自然科学版）》
北大核心
2020
1
下载PDF
职称材料
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