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变异链球菌luxS基因敲除重组质粒的构建 被引量:3
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作者 童忠春 马丽芳 +1 位作者 倪龙兴 侯波 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期182-185,共4页
目的:构建一个含有抗卡那霉素基因和变异链球菌luxS基因上下游区同源序列的重组质粒,以便以后转化入变异链球菌进行luxS的敲除。方法:设计引物,以质粒pEGFP-N1为模板,进行PCR得到抗卡那霉素的DNA片断,再以变异链球菌的DNA为模板,PCR得到... 目的:构建一个含有抗卡那霉素基因和变异链球菌luxS基因上下游区同源序列的重组质粒,以便以后转化入变异链球菌进行luxS的敲除。方法:设计引物,以质粒pEGFP-N1为模板,进行PCR得到抗卡那霉素的DNA片断,再以变异链球菌的DNA为模板,PCR得到luxS基因上下游序列,最后将这3段DNA片断分别按顺序插入到pMD19-T载体的多克隆酶切位点中,转化大肠杆菌的感受态中,通过在卡那霉素和氨苄青霉素的培养基进行筛选。结果:kana+基因和luxS基因两侧同源序列成功连入到pMD19-T载体相应酶切位点,酶切、测序结果正确。结论:成功构建变异链球菌luxS基因敲除重组质粒,为将来构建变异链球菌luxS突变株打下基础。 展开更多
关键词 变异链球菌 LUXS基因 pmd19-T载体 pEGFP-N1质粒 pmd19-tukd
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变异链球菌luxS基因对牙菌斑生物膜形成的影响研究 被引量:5
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作者 童忠春 倪龙兴 +3 位作者 马丽芳 周琳 侯波 赵秀 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期386-389,共4页
目的敲除变异链球菌中的luxS基因,构建luxS突变株,测试变异链球菌失去luxS基因后形成牙菌斑生物膜的能力。方法把luxS基因敲除重组质粒转入变异链球菌UA159中,得到转化菌,在含有卡拉霉素的培养基中进行筛选,得到变异链球菌luxS基因突变... 目的敲除变异链球菌中的luxS基因,构建luxS突变株,测试变异链球菌失去luxS基因后形成牙菌斑生物膜的能力。方法把luxS基因敲除重组质粒转入变异链球菌UA159中,得到转化菌,在含有卡拉霉素的培养基中进行筛选,得到变异链球菌luxS基因突变株,并利用聚合酶链式反应(PCR)和哈氏弧菌发光实验对变异链球菌luxS突变株进行检测,通过扫描电镜,对不同时间段变异链球菌luxS突变株和变异链球菌UA159在BHIS培养液(含1%蔗糖的脑心浸液)和BHIG培养液(含1%葡萄糖的脑心浸液)中形成的生物膜进行比较。结果成功的构建了变异链球菌luxS突变株,在BHIS培养液中,变异链球菌luxS突变株形成生物膜的能力比变异链球菌UA159弱,而在BHIG培养液中,二者无显著差异。结论变异链球菌luxS基因对牙菌斑生物膜的形成有重要的影响,并且luxS基因对变异链球菌生物膜的调控是蔗糖依赖型的。 展开更多
关键词 pmd-19tukd质粒 变异链球菌UA159 luxS突变株 生物膜
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变异链球菌LuxS突变株的构建及其耐酸性的测试
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作者 童忠春 倪龙兴 +2 位作者 马丽芳 侯波 赵秀 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2008年第8期446-449,共4页
目的:把构建好的含有luxS基因两侧同源序列的重组质粒转入变异链球菌进行luxS的敲除以形成luxS突变株,同时测试变异链球菌失去luxS基因后在pH 3.0酸性环境中的生长情况。方法:把含有luxS基因两侧同源序列的重组质粒(pMD-19TUKD)转化入... 目的:把构建好的含有luxS基因两侧同源序列的重组质粒转入变异链球菌进行luxS的敲除以形成luxS突变株,同时测试变异链球菌失去luxS基因后在pH 3.0酸性环境中的生长情况。方法:把含有luxS基因两侧同源序列的重组质粒(pMD-19TUKD)转化入变异链球菌UA159中,利用同源重组,等位基因交换进行luxS基因敲除,再对此突变株进行PCR的检测,利用测试A值、梯度稀释和平板计数法,对变异链球菌luxS突变株和野生型的变异链球菌在pH 3.0酸性环境下生存情况进行比较。结果:成功的构建了变异链球菌luxS的突变株,并且变异链球菌失去luxS基因后,在酸性环境下的生存能力相对于野生型的变异链球菌低。结论:LuxS基因对变异链球菌的耐酸性起着重要作用。 展开更多
关键词 pmd-19tukd质粒 变异链球菌luxS突变株 野生型变异链球菌
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