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用导向选择链更替技术建立抗肝癌抗原HAb18G的人源性Fab基因库 被引量：2
1
作者 包国强 马庆久 +2 位作者 邢金良 杨向民 陈志南 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期437-440,共4页
目的 :在嵌合HAb18 Fab抗体的基础上 ,利用载体pComb3X ,采用导向选择链更替技术建立全人源性Fab基因库。方法 :用RT PCR自肝癌患者外周血单个核细胞 (PBMC)中 ,扩增全套人抗体Fd基因片段和L链基因。首先 ,将Fd基因克隆入已含嵌合L链基... 目的 :在嵌合HAb18 Fab抗体的基础上 ,利用载体pComb3X ,采用导向选择链更替技术建立全人源性Fab基因库。方法 :用RT PCR自肝癌患者外周血单个核细胞 (PBMC)中 ,扩增全套人抗体Fd基因片段和L链基因。首先 ,将Fd基因克隆入已含嵌合L链基因的展示载体pComb3X/CL中 ,建立人 -鼠杂合的Fab基因库 ,以原核表达的非融合HAb18G的胞外区片段为抗原 ,筛选杂合的Fab基因 ,以得到人Fd基因。然后应用筛选出的Fd基因与人L链基因库配对 ,建立全为人Fab的基因库 ,并筛选全人Fab基因。将IPTG诱导的表达菌裂解 ,取其上清对pⅢ Fab融合蛋白的功能进行分析 ,并对其编码基因进行测序。结果 :建立了库容为 2× 10 7的杂合Fab基因库 ,经 6轮筛选后得到 7株杂合Fab基因。利用筛选的人Fd基因建立了库容为 0 .8× 10 7的全人Fab基因库 ,经 4轮筛选得到 2株亲和力较高、特异性强的人Fab基因。测序结果显示 ,2株Fab基因具有相同的Fd基因序列 ,与亲本抗体同属IgG2亚类 ;L链基因为κ型 ,可变区均属于Vκ3家族。结论 :利用导向选择链更替技术 ,筛选出特异性较强、完全人源化的抗肝癌抗原HAb18G的Fab抗体 ,为进一步的工作打下了基础。 展开更多
关键词 抗体基因库 人源化 肝癌 pcomb3x 导向选择 链更替
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以鼠源重链Fd片段为模板导向筛选人源性抗γ-浆蛋白抗体轻链
2
《第四军医大学学报》 北大核心 2006年第15期1387-1387,共1页
以鼠源抗γ-sm抗体重链Fd片段为模板，筛选人源性抗人γ-精浆蛋白抗体轻链．方法：利用RT-PCR从前列腺癌患者外周血淋巴细胞扩增出全套的人抗体轻链基因，克隆入含鼠源性抗γ-sm抗体重链Fd片段的噬粒载体pComb3X／mFd中，电转化大肠杆菌... 以鼠源抗γ-sm抗体重链Fd片段为模板，筛选人源性抗人γ-精浆蛋白抗体轻链．方法：利用RT-PCR从前列腺癌患者外周血淋巴细胞扩增出全套的人抗体轻链基因，克隆入含鼠源性抗γ-sm抗体重链Fd片段的噬粒载体pComb3X／mFd中，电转化大肠杆菌XL1-Blue后建立人-鼠杂合的Fab抗体库。 展开更多
关键词 抗体重链 轻链基因 蛋白抗体 mFd 鼠源性 人源性 片段 筛选 模板 pcomb3x
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