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反刍动物埃立克体微滴数字PCR方法的建立及初步应用 被引量：3
1
作者 王素华 王忠才 +6 位作者 黄凌哲 吕继洲 吴绍强 赵治国 付海滨 韩小虎 张舟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期60-64,共5页
为建立反刍动物埃立克体(E.ruminantium)准确定量的微滴数字PCR方法(ddPCR),本研究以E.rum-inantium pCS20基因为靶基因,选取保守区域设计引物和探针,建立了E.ruminantium ddPCR方法。利用本研究建立的ddPCR方法检测E.ruminantium、牛... 为建立反刍动物埃立克体(E.ruminantium)准确定量的微滴数字PCR方法(ddPCR),本研究以E.rum-inantium pCS20基因为靶基因,选取保守区域设计引物和探针,建立了E.ruminantium ddPCR方法。利用本研究建立的ddPCR方法检测E.ruminantium、牛巴贝斯虫、牛双芽巴贝斯虫、环形泰勒虫、无形体、犬埃立克体、牛埃立克体、马埃立克体和立氏埃立克体等,结果显示仅E.ruminantium出现特异性扩增,而与其他寄生虫均无交叉反应,特异性强;将pUC57-pCS20重组质粒标准品10倍倍比稀释(1×10^(-1)拷贝/μL~1×10^(5)拷贝/μL)后,利用该ddPCR方法检测,结果显示,该方法对重组质粒标准品的检测限为1.8拷贝/μL,比相应荧光定量PCR方法的敏感性高10倍,本实验建立的ddPCR方法敏感性高;批内和批间重复性试验结果变异系数(CV)均小于2%,重复性好。利用建立的ddPCR方法对50只钝眼蜱样品检测,结果显示,阳性样品反刍动物埃立克体核酸的最低拷贝数为26拷贝/μL,ddPCR和荧光定量PCR检测试剂盒的检出率均为16.0%(8/50)。本研究首次建立的ddPCR方法敏感性高、特异性强、重复性好,可作为E.ruminantium准确定量检测的有效手段。 展开更多
关键词 反刍动物埃立克体 检测 pcs20基因 微滴数字PCR
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蜱传反刍动物艾立希体巢式PCR检测方法的建立及应用 被引量：3
2
作者 王素华 袁淑辉 +4 位作者 吴绍强 吕继洲 帅江冰 张晓峰 赵治国 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期271-275,共5页
为建立一种快速、敏感检测反刍动物艾立希体的方法,本研究根据GenBank中登录的反刍动物艾立希体pCS20基因保守区设计2对特异性引物,经各反应条件的优化,建立了反刍动物艾立希体巢式PCR检测方法。结果显示,该方法可以特异性检测反刍动物... 为建立一种快速、敏感检测反刍动物艾立希体的方法,本研究根据GenBank中登录的反刍动物艾立希体pCS20基因保守区设计2对特异性引物,经各反应条件的优化,建立了反刍动物艾立希体巢式PCR检测方法。结果显示,该方法可以特异性检测反刍动物艾立希体DNA,而对牛巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫、牛环形泰勒虫和弓形虫的检测均为阴性,具有良好的特异性;该方法灵敏度可达1.04×101拷贝/μL,是反刍动物艾立希体实时荧光PCR检测试剂盒的10倍,是常规PCR的1 000倍。对50只血蜱、花蜱和微小牛蜱DNA进行检测,巢式PCR、反刍动物艾立希体实时荧光PCR检测试剂盒和常规PCR的阳性检出率分别为26.0%,14.0%和0.0%。本试验建立的巢式PCR检测方法适用于反刍动物艾立希体病的早期诊断和分子流行病学调查,为蜱传反刍动物艾立希体病的防控提供技术支持。 展开更多
关键词 反刍动物艾立希体 pcs20基因 巢式PCR 蜱传
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反刍动物埃立克体荧光定量PCR检测技术的建立和应用 被引量：1
3
作者 王素华 王忠才 +5 位作者 黄凌哲 莫虹斐 吴绍强 吕继洲 赵治国 帅江冰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期1975-1982,共8页
为快速、准确地检测反刍动物埃立克体,本研究以反刍动物埃立克体pCS20为靶基因设计特异性引物和探针,建立了TaqMan和Eva Green荧光定量PCR方法,对其反应的特异性、敏感性和重复性进行了分析,并与OIE推荐的套式PCR方法一起对临床样品进... 为快速、准确地检测反刍动物埃立克体,本研究以反刍动物埃立克体pCS20为靶基因设计特异性引物和探针,建立了TaqMan和Eva Green荧光定量PCR方法,对其反应的特异性、敏感性和重复性进行了分析,并与OIE推荐的套式PCR方法一起对临床样品进行检测。结果显示,本方法特异性强,与牛巴贝斯虫、牛双芽巴贝斯虫、环形泰勒虫、犬埃立克体、牛埃立克体、马埃立克体和立氏埃立克体无交叉反应;TaqMan和Eva Green荧光定量PCR对pCS20质粒标准品的最低检测限分别为17.4拷贝·μL^(-1)和1.74拷贝·μL^(-1),标准曲线相关系数大于0.99,组内和组间CV均小于1.5%。对420只钝眼蜱样本的检测显示,TaqMan和Eva Green荧光定量PCR的检出率分别为25.48%和29.29%,与套式PCR检测方法相比,敏感性更高。本研究为反刍动物埃立克体的检测和流行病学调查提供了一种快速、准确的检测方法。 展开更多
关键词 反刍动物埃立克体 pcs20基因 TaqMan荧光定量PCR Eva Green荧光定量PCR
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