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题名Pax5基因在野生型斑马鱼全胚胎发育早期的表达
被引量：1
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作者
姚冬静
舒莉萍
何志旭
马建娟
李涛
黄惠敏
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机构
贵阳医学院儿科教研室
贵阳医学院组织工程与干细胞实验中心
贵阳医学院免疫学教研室
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出处
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第1期21-25,共5页
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基金
国家自然科学基金面上项目(30960412)
贵州省科技基础条件平台项目[(2009)4005]
贵州省优秀科技教育人才省长专项资金(S2008-4)~~
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文摘
目的为了深入了解在胚胎发育过程中,尤其是在早期B淋巴细胞的生成和中脑的发育过程中pax5基因可能的作用及其机制,选择斑马鱼作为实验动物,构建野生型斑马鱼pCS2+-pax5重组质粒,并观察pax5基因在野生型斑马鱼胚胎中的表达。方法提取斑马鱼胚胎总RNA后经RT-PCR克隆斑马鱼pax5基因片段,将得到的pax5基因片段和pCS2+质粒经EcoRⅠ、XbaⅠ双酶切后,在T4DNA连接酶的作用下插入pCS2+质粒中,通过对重组质粒进行双酶切、菌落PCR以及插入片段序列测定鉴定后,经T3RNA体外转录体系合成地高辛标记的pax5基因的反义mRNA探针。将得到的探针用全胚胎原位杂交技术检测pax5基因在斑马鱼早期发育过程中的表达。结果成功构建pCS2+-pax5重组质粒并制备了pax5基因的反义mRNA探针,通过斑马鱼原位杂交技术,发现在斑马鱼受精后18～72小时(18～72hpf)胚胎头部的小脑、中脑后脑交界处均可观察到pax5基因阳性杂交信号;在24～72hpf胚胎的耳蜗均可观察到pax5基因的阳性杂交信号,且随着时相的增长其表达逐渐增多;在18～48hpf胚胎的脊索部位可见pax5基因的阳性杂交信号。结论明确了pax5基因在斑马鱼胚胎的脑部、脊索神经系统高表达,并首次证实其在耳蜗听神经的早期发育过程中有表达,可能对斑马鱼早期胚胎神经系统的发育起着某些至关重要的作用。
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关键词
斑马鱼
pcs2+载体
pax5基因
反义mRNA
原位杂交
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Keywords
zebrafish
pcs^2＋ vector
pax5 gene
antisense mRNA
in situ hybridization
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分类号
Q132.4
[生物学—普通生物学]
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