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pCS^(2+)-FLASH重组质粒的构建及斑马鱼FLASH基因反义mRNA探针的制备
被引量：
2
1
作者
丁可军
何志旭
+3 位作者
舒莉萍
许威
姬牧远
杨小燕
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第10期1119-1120,共2页
目的构建斑马鱼pCS2+-FLASH重组质粒,制备斑马鱼FLASH反义mRNA探针。方法提取斑马鱼胚胎总RNA后经RT-PCR克隆斑马鱼FLASH基因片段,将得到的FLASH片段和pCS2+质粒用BamHⅠ及HindⅢ双酶切后插入pCS2+质粒,通过对重组质粒进行双酶切及插入...
目的构建斑马鱼pCS2+-FLASH重组质粒,制备斑马鱼FLASH反义mRNA探针。方法提取斑马鱼胚胎总RNA后经RT-PCR克隆斑马鱼FLASH基因片段,将得到的FLASH片段和pCS2+质粒用BamHⅠ及HindⅢ双酶切后插入pCS2+质粒,通过对重组质粒进行双酶切及插入片段序列测序鉴定后,经T3RNA体外转录体系合成DIG-FLASH基因反义mRNA探针。结果RT-PCR法扩增出长度为533bp的特异性产物,构建的pCS2+-FLASH重组质粒经酶切鉴定和测序结果与预期相符;用FLASH反义mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交,观察到FLASH在野生型斑马鱼神经系统中存在表达。结论成功构建了pCS2+-FLASH重组质粒及FLASH基因反义mRNA探针。
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关键词
斑马鱼
^
pcs
^
2
+
FLASH
反义mRNA
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职称材料
Pax5基因在野生型斑马鱼全胚胎发育早期的表达
被引量：
1
2
作者
姚冬静
舒莉萍
+3 位作者
何志旭
马建娟
李涛
黄惠敏
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第1期21-25,共5页
目的为了深入了解在胚胎发育过程中,尤其是在早期B淋巴细胞的生成和中脑的发育过程中pax5基因可能的作用及其机制,选择斑马鱼作为实验动物,构建野生型斑马鱼pCS2+-pax5重组质粒,并观察pax5基因在野生型斑马鱼胚胎中的表达。方法提取斑...
目的为了深入了解在胚胎发育过程中,尤其是在早期B淋巴细胞的生成和中脑的发育过程中pax5基因可能的作用及其机制,选择斑马鱼作为实验动物,构建野生型斑马鱼pCS2+-pax5重组质粒,并观察pax5基因在野生型斑马鱼胚胎中的表达。方法提取斑马鱼胚胎总RNA后经RT-PCR克隆斑马鱼pax5基因片段,将得到的pax5基因片段和pCS2+质粒经EcoRⅠ、XbaⅠ双酶切后,在T4DNA连接酶的作用下插入pCS2+质粒中,通过对重组质粒进行双酶切、菌落PCR以及插入片段序列测定鉴定后,经T3RNA体外转录体系合成地高辛标记的pax5基因的反义mRNA探针。将得到的探针用全胚胎原位杂交技术检测pax5基因在斑马鱼早期发育过程中的表达。结果成功构建pCS2+-pax5重组质粒并制备了pax5基因的反义mRNA探针,通过斑马鱼原位杂交技术,发现在斑马鱼受精后18～72小时(18～72hpf)胚胎头部的小脑、中脑后脑交界处均可观察到pax5基因阳性杂交信号;在24～72hpf胚胎的耳蜗均可观察到pax5基因的阳性杂交信号,且随着时相的增长其表达逐渐增多;在18～48hpf胚胎的脊索部位可见pax5基因的阳性杂交信号。结论明确了pax5基因在斑马鱼胚胎的脑部、脊索神经系统高表达,并首次证实其在耳蜗听神经的早期发育过程中有表达,可能对斑马鱼早期胚胎神经系统的发育起着某些至关重要的作用。
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关键词
斑马鱼
pcs
2
+载体
pax5基因
反义mRNA
原位杂交
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职称材料
Irx5a在野生型斑马鱼早期发育中的表达
3
作者
舒莉萍
何志旭
+1 位作者
许威
丁可军
《贵阳医学院学报》
CAS
2016年第7期755-759,共5页
目的:观测Irx5a基因在Tuebingen野生型斑马鱼胚胎发育过程中的表达。方法:利用Trizol法提取斑马鱼胚胎的总RNA,应用RT-PCR方法扩增Irx5a基因,将其克隆入pCS^(2+)质粒中,经菌落PCR、双酶切法及DNA测序鉴定正确后,利用体外转录体系制备Ir...
目的:观测Irx5a基因在Tuebingen野生型斑马鱼胚胎发育过程中的表达。方法:利用Trizol法提取斑马鱼胚胎的总RNA,应用RT-PCR方法扩增Irx5a基因,将其克隆入pCS^(2+)质粒中,经菌落PCR、双酶切法及DNA测序鉴定正确后,利用体外转录体系制备Irx5a的反义mRNA探针;用该反义mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交。结果:构建和鉴定了Irx5a-pCS^(2+)重组质粒,经斑马鱼全胚胎原位杂交检测Irx5a基因的表达,发现从3.7 hpf开始有表达,并且在胚胎神经系统和造血系统都有明显表达。结论:Irx5a基因可能参与了Tuebingen野生型斑马鱼胚胎发育早期的神经系统和造血系统的发育。
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关键词
Irx5a
^
pcs
^
2
+质粒
DNA
重组
RNA探针
全胚胎原位杂交技术
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职称材料
题名
pCS^(2+)-FLASH重组质粒的构建及斑马鱼FLASH基因反义mRNA探针的制备
被引量：
2
1
作者
丁可军
何志旭
舒莉萍
许威
姬牧远
杨小燕
机构
贵阳医学院儿科教研室
郎溪县人民医院儿科
贵阳医学院组织工程与干细胞中心
贵阳医学院免疫教研室
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第10期1119-1120,共2页
基金
国家自然科学基金面上项目(30960412)
贵州省科技基础条件平台项目([2009]4005)
贵州省优秀科技教育人才省长专项资金(S2008-4)
文摘
目的构建斑马鱼pCS2+-FLASH重组质粒,制备斑马鱼FLASH反义mRNA探针。方法提取斑马鱼胚胎总RNA后经RT-PCR克隆斑马鱼FLASH基因片段,将得到的FLASH片段和pCS2+质粒用BamHⅠ及HindⅢ双酶切后插入pCS2+质粒,通过对重组质粒进行双酶切及插入片段序列测序鉴定后,经T3RNA体外转录体系合成DIG-FLASH基因反义mRNA探针。结果RT-PCR法扩增出长度为533bp的特异性产物,构建的pCS2+-FLASH重组质粒经酶切鉴定和测序结果与预期相符;用FLASH反义mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交,观察到FLASH在野生型斑马鱼神经系统中存在表达。结论成功构建了pCS2+-FLASH重组质粒及FLASH基因反义mRNA探针。
关键词
斑马鱼
^
pcs
^
2
+
FLASH
反义mRNA
分类号
R394-33 [医药卫生—医学遗传学]
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职称材料
题名
Pax5基因在野生型斑马鱼全胚胎发育早期的表达
被引量：
1
2
作者
姚冬静
舒莉萍
何志旭
马建娟
李涛
黄惠敏
机构
贵阳医学院儿科教研室
贵阳医学院组织工程与干细胞实验中心
贵阳医学院免疫学教研室
出处
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第1期21-25,共5页
基金
国家自然科学基金面上项目(30960412)
贵州省科技基础条件平台项目[(2009)4005]
贵州省优秀科技教育人才省长专项资金(S2008-4)~~
文摘
目的为了深入了解在胚胎发育过程中,尤其是在早期B淋巴细胞的生成和中脑的发育过程中pax5基因可能的作用及其机制,选择斑马鱼作为实验动物,构建野生型斑马鱼pCS2+-pax5重组质粒,并观察pax5基因在野生型斑马鱼胚胎中的表达。方法提取斑马鱼胚胎总RNA后经RT-PCR克隆斑马鱼pax5基因片段,将得到的pax5基因片段和pCS2+质粒经EcoRⅠ、XbaⅠ双酶切后,在T4DNA连接酶的作用下插入pCS2+质粒中,通过对重组质粒进行双酶切、菌落PCR以及插入片段序列测定鉴定后,经T3RNA体外转录体系合成地高辛标记的pax5基因的反义mRNA探针。将得到的探针用全胚胎原位杂交技术检测pax5基因在斑马鱼早期发育过程中的表达。结果成功构建pCS2+-pax5重组质粒并制备了pax5基因的反义mRNA探针,通过斑马鱼原位杂交技术,发现在斑马鱼受精后18～72小时(18～72hpf)胚胎头部的小脑、中脑后脑交界处均可观察到pax5基因阳性杂交信号;在24～72hpf胚胎的耳蜗均可观察到pax5基因的阳性杂交信号,且随着时相的增长其表达逐渐增多;在18～48hpf胚胎的脊索部位可见pax5基因的阳性杂交信号。结论明确了pax5基因在斑马鱼胚胎的脑部、脊索神经系统高表达,并首次证实其在耳蜗听神经的早期发育过程中有表达,可能对斑马鱼早期胚胎神经系统的发育起着某些至关重要的作用。
关键词
斑马鱼
pcs
2
+载体
pax5基因
反义mRNA
原位杂交
Keywords
zebrafish
^
pcs
^
2
＋ vector
pax5 gene
antisense mRNA
in situ hybridization
分类号
Q132.4 [生物学—普通生物学]
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职称材料
题名
Irx5a在野生型斑马鱼早期发育中的表达
3
作者
舒莉萍
何志旭
许威
丁可军
机构
贵州医科大学组织工程和干细胞实验中心
贵州医科大学实验动物中心
贵州医科大学免疫学教研室
贵州医科大学儿科学教研室
出处
《贵阳医学院学报》
CAS
2016年第7期755-759,共5页
基金
国家自然科学基金(31260284)
贵州省科技基础条件平台项目[(2009)4005]
贵州省优秀科技省长专项基金(S2008-4)
文摘
目的:观测Irx5a基因在Tuebingen野生型斑马鱼胚胎发育过程中的表达。方法:利用Trizol法提取斑马鱼胚胎的总RNA,应用RT-PCR方法扩增Irx5a基因,将其克隆入pCS^(2+)质粒中,经菌落PCR、双酶切法及DNA测序鉴定正确后,利用体外转录体系制备Irx5a的反义mRNA探针;用该反义mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交。结果:构建和鉴定了Irx5a-pCS^(2+)重组质粒,经斑马鱼全胚胎原位杂交检测Irx5a基因的表达,发现从3.7 hpf开始有表达,并且在胚胎神经系统和造血系统都有明显表达。结论:Irx5a基因可能参与了Tuebingen野生型斑马鱼胚胎发育早期的神经系统和造血系统的发育。
关键词
Irx5a
^
pcs
^
2
+质粒
DNA
重组
RNA探针
全胚胎原位杂交技术
Keywords
Irx5a
Irx5a
^
pcs
^
2
＋ plasmid
DNA,recombination
RNA probe
whole mount in situ hybrid-ization
分类号
P321-33 [天文地球—地球物理学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
pCS^(2+)-FLASH重组质粒的构建及斑马鱼FLASH基因反义mRNA探针的制备
丁可军
何志旭
舒莉萍
许威
姬牧远
杨小燕
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
2
下载PDF
职称材料
2
Pax5基因在野生型斑马鱼全胚胎发育早期的表达
姚冬静
舒莉萍
何志旭
马建娟
李涛
黄惠敏
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
1
下载PDF
职称材料
3
Irx5a在野生型斑马鱼早期发育中的表达
舒莉萍
何志旭
许威
丁可军
《贵阳医学院学报》
CAS
2016
0
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职称材料
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