pBI121载体酶切位点添加及拟南芥Na^+/H^+逆向转运蛋白基因表达载体的构建 被引量：8

1

作者 张俊莲 王蒂 +1 位作者 张金文 陈正华 《分子植物育种》 CAS CSCD 2006年第6期811-818,共8页

对pBI121载体GUS基因后的终止子序列(SacⅠ-EcoRⅠ)通过PCR扩增法进行了酶切位点的添加,即在SacⅠ后添加了XhoⅠ、在EcoRⅠ前添加了KpnⅠ。序列分析发现,两个酶切位点的添加是成功的,但扩增的终止子序列与原序列的同源性间有差异,即有4... 对pBI121载体GUS基因后的终止子序列(SacⅠ-EcoRⅠ)通过PCR扩增法进行了酶切位点的添加,即在SacⅠ后添加了XhoⅠ、在EcoRⅠ前添加了KpnⅠ。序列分析发现,两个酶切位点的添加是成功的,但扩增的终止子序列与原序列的同源性间有差异,即有4个碱基发生了变异,特别是第17个碱基位点出现了缺失。利用绿色荧光蛋白(GFP)对添加酶切位点载体进行了终止子活性的检测,结果发现,它与携带GFP的pBI121载体一样,GFP基因能正常表达,说明pBI121载体终止子序列酶切位点的添加是成功的。利用改造后的载体(pBI121-GZ)构建了CaMV35S启动子驱动AtNHX1基因的植物表达载体。 展开更多

关键词 pbi121 终止子 限制性酶 绿色荧光蛋白 植物表达载体

下载PDF 职称材料

水稻精细胞优势表达基因RSSG58的启动子克隆和功能鉴定 被引量：3

2

作者 张小林 王胜华 +3 位作者 唐琳 徐莺 贾勇炯 陈放 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期271-275,共5页

利用本实验室已经克隆的水稻精细胞优势表达基因RSSG58的cDNA序列与NCBI中的粳稻基因组文库进行比对、定位,结合生物信息学方法分析预测基因上游的启动子序列.在此基础上设计引物,以粳稻Oryzasativa(japonicacultivar-group)日本晴黄化... 利用本实验室已经克隆的水稻精细胞优势表达基因RSSG58的cDNA序列与NCBI中的粳稻基因组文库进行比对、定位,结合生物信息学方法分析预测基因上游的启动子序列.在此基础上设计引物,以粳稻Oryzasativa(japonicacultivar-group)日本晴黄化苗总DNA为模板,采用DNA聚合酶链式反应(PCR)的方法扩增出基因上游1093bp和462bp两个不同长度的启动子缺失片段(分别命名为JP58B和JP58S),测序结果显示,其具有大多数高等植物启动子的保守元件.进一步构建启动子片段的植物表达载体pBI121-JP58B和pBI121-JP58S,瞬时表达结果显示,两个启动子片段对报告基因GUS均具有启动活性. 展开更多

关键词 水稻 RSSG58 生物信息学 JP58 瞬时表达 pbi121

下载PDF 职称材料

东方百合“元帅”查尔酮合酶基因表达载体构建 被引量：3

3

作者 和凤美 朱永平 《北方园艺》 CAS 北大核心 2010年第16期145-148,共4页

利用Genbank中公布的东方百合"元帅"查尔酮合酶cDNA序列,从东方百合"元帅"花瓣中扩增CHS1的cDNA开放阅读框,正向插入植物表达载体pBI121,并采用液氮冻融法将其转化到根癌农杆菌EHA105中。结果表明:经酶切和菌液PCR... 利用Genbank中公布的东方百合"元帅"查尔酮合酶cDNA序列,从东方百合"元帅"花瓣中扩增CHS1的cDNA开放阅读框,正向插入植物表达载体pBI121,并采用液氮冻融法将其转化到根癌农杆菌EHA105中。结果表明:经酶切和菌液PCR分析鉴定,获得与预期大小相符的1 200 bp片段,得到含有目的片段表达载体pBI121-CHS1的农杆菌菌株,可用于新铁炮百合的遗传转化。 展开更多

关键词 百合 CHS 表达载体 pbi121 基因

下载PDF 职称材料

渗透胁迫相关基因高通量筛选技术体系的建立 被引量：2

4

作者 杨靓 纪巍 +1 位作者 代翠红 朱延明 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期60-64,共5页

随着功能基因组学的发展,在基因组水平上获得了大量渗透胁迫相关基因。农杆菌介导的超量表达是筛选和鉴定这些基因功能最为常用的技术。以植物表达载体pBI121为基础,在不改变其氨基酸序列的基础上通过定点突变消除了其上与质粒复制和稳... 随着功能基因组学的发展,在基因组水平上获得了大量渗透胁迫相关基因。农杆菌介导的超量表达是筛选和鉴定这些基因功能最为常用的技术。以植物表达载体pBI121为基础,在不改变其氨基酸序列的基础上通过定点突变消除了其上与质粒复制和稳定性有关的trfA基因(X00713)内部的SfiI酶切位点,并在表达单元CaMV35s启动子和NOS终止子之间引入了SfiIA和SfiIB位点,改造成通用植物表达载体卡盒pBHT-5。该载体卡盒可直接用于连接Clontech SMARTTM技术构建的cDNA文库,提高了大规模构建cDNA文库基因植物表达载体的工作效率。为高通量的筛选与鉴定基因功能,从大量的渗透胁迫相关基因中筛选出具有独立知识产权的、对植物抗渗透胁迫起重要作用的新基因奠定了坚实的基础。 展开更多

关键词 pbi121 渗透胁迫 SMART技术 基因功能分析

下载PDF 职称材料

根癌农杆菌介导载体pBI121转化少根根霉条件的研究 被引量：1

5

作者 赵有玺 冀颐之 +1 位作者 欧阳艳华 龚平 《食品科技》 CAS 北大核心 2014年第7期46-49,共4页

考察了脂肪酶生产菌株少根根霉N1023 G418的敏感性,结果表明,G418对少根根霉最小抑制浓度为500μg/mL。研究了不同条件对载体pBI121转化少根根霉的影响,结果表明,以根癌农杆菌LBA4404为介导菌,少根根霉N1023为受体菌株,G418为筛选标记... 考察了脂肪酶生产菌株少根根霉N1023 G418的敏感性,结果表明,G418对少根根霉最小抑制浓度为500μg/mL。研究了不同条件对载体pBI121转化少根根霉的影响,结果表明,以根癌农杆菌LBA4404为介导菌,少根根霉N1023为受体菌株,G418为筛选标记的最佳转化条件为:乙酰丁香酮(AS)300μmol/L、根癌农杆菌的初始浓度OD600为0.6、共培养时间2 d。在此条件下pBI121对少根根霉的转化率达到112 cfu/106 cfu孢子。转化菌株经过5次连续培养后仍然稳定。通过上述研究,建立了根癌农杆菌介导载体pBI121转化少根根霉的方法。这是首次成功建立少根根霉的转化方法,为进一步的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 pbi121 根癌农杆菌介导的转化 少根根霉

原文传递

枯草芽孢杆菌突变株proBA基因植物表达载体的构建及转基因拟南芥的耐盐性能初探

6

作者 曾永辉 陈喜涵 +1 位作者 苗丽霞 曹军卫 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期316-322,共7页

从枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)抗脯氨酸结构类似物突变株中克隆得到脯氨酸合成途径中的关键酶基因proB(编码γ-谷氨酰胺激酶)和proA(编码谷氨酰胺-γ-半醛脱氢酶),同时设计引物从拟南芥基因组中扩增得到吡咯啉-5-羧酸合成酶B基因(p5... 从枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)抗脯氨酸结构类似物突变株中克隆得到脯氨酸合成途径中的关键酶基因proB(编码γ-谷氨酰胺激酶)和proA(编码谷氨酰胺-γ-半醛脱氢酶),同时设计引物从拟南芥基因组中扩增得到吡咯啉-5-羧酸合成酶B基因(p5csB)的第一个内含子序列,将其分别与proB和proA基因通过PCR拼接后,酶切连接构建得到植物双元表达载体pBI121pro。以LBA4404为介导,采用真空抽滤的方法转化得到转proBA基因拟南芥;第三代的纯合子(T3)通过半巢式PCR的方法验证外源基因已整合到拟南芥基因组中,GUS活性分析表明外源基因在叶片中表达最强,茎部其次,根部最弱;对600mmol.L-1致死浓度NaCl耐受能力的分析表明,转基因拟南芥的平均存活时间(37.8min)明显高于野生型拟南芥(26min)。 展开更多

关键词 拟南芥 转基因 枯草芽孢杆菌 proBA基因 pbi121 耐盐

下载PDF 职称材料

菜豆几丁质酶、烟草葡聚糖酶基因的分离克隆及双价表达载体的构建 被引量：1

7

作者 晏慧君 张婷 +3 位作者 杨春梅 于丽霞 张宝琼 李涵 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2008年第6期867-872,共6页

几丁质酶基因(Chitinase,Chi)和葡聚糖酶基因(β-1,3-glucanase,Glu)具有协同抗真菌作用,根据GenBank号M13968,X53600分别设计引物,经RT-PCR扩增,克隆菜豆Chi基因和烟草Glu基因,将两个目的基因分别连上CaMV35S启动子和终止子Nos,然后串... 几丁质酶基因(Chitinase,Chi)和葡聚糖酶基因(β-1,3-glucanase,Glu)具有协同抗真菌作用,根据GenBank号M13968,X53600分别设计引物,经RT-PCR扩增,克隆菜豆Chi基因和烟草Glu基因,将两个目的基因分别连上CaMV35S启动子和终止子Nos,然后串联在一起共同组建于一个表达载体pBI121中,重组表达质粒经过限制性酶切分析鉴定,结果表明含有双价抗真菌基因的植物重组表达载体已构建成功。为非洲菊、香石竹等花卉抗真菌基因工程育种奠定了基础。 展开更多

关键词 几丁质酶 葡聚糖 pB1121 双价表达载体

下载PDF 职称材料

马尾松纤维素合成酶基因PmCesA2的克隆及其植物表达载体的构建 被引量：1

8

作者 阮维程 郭天玮 +1 位作者 苏江 季孔庶 《林业科技开发》 北大核心 2015年第3期11-16,共6页

为了探究马尾松木材形成的分子机制,以马尾松嫩枝的总RNA反转录得到的cDNA为模板,利用反转录PCR和RACE技术克隆得到马尾松CesA2基因的全长cDNA序列(命名为Pm Ces A2),序列长度为3 500 bp,包含一个长为3 174 bp的开放阅读框(open reading... 为了探究马尾松木材形成的分子机制,以马尾松嫩枝的总RNA反转录得到的cDNA为模板,利用反转录PCR和RACE技术克隆得到马尾松CesA2基因的全长cDNA序列(命名为Pm Ces A2),序列长度为3 500 bp,包含一个长为3 174 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),编码1 057个氨基酸。序列分析表明:PmCesA2序列与已报道的火炬松Ces A2基因(AY789651.1)的相似性达98%。将全长基因克隆到载体p BI121质粒的Sna BI,Sac I双酶切位点之间,构建正义表达载体p BI121-PmCesA2。 展开更多

关键词 马尾松 纤维素合成酶基因 CDNA克隆 序列分析 植物表达载体 pbi121

下载PDF 职称材料

重组质粒pBI190的构建

9

作者 周晶琳 《牡丹江医学院学报》 2011年第6期52-53,共2页

利用质粒pBI121为载体,通过对其酶切位点的改造,引入一个目的基因(204 bp),构建成一个新的质粒pBI190。方法:用Sac I和Xba I分别对质粒pBI121进行酶切,0.8%低熔点琼脂糖凝胶电泳回收所需片段,将已知DNA片段用引物进行PCR扩增后,使用T4 ... 利用质粒pBI121为载体,通过对其酶切位点的改造,引入一个目的基因(204 bp),构建成一个新的质粒pBI190。方法:用Sac I和Xba I分别对质粒pBI121进行酶切,0.8%低熔点琼脂糖凝胶电泳回收所需片段,将已知DNA片段用引物进行PCR扩增后,使用T4 DNA连接酶将上述得到的DNA片段与酶切回收的质粒pBI121 DNA进行连接。结果:将连接产物转化大肠杆菌DH5α及筛选与测序公司进行鉴定,最终符合目的要求。结论:本实验将质粒pBI121进行了改造,构建了新的表达载体pBI190,并且分析了实验过程中遇到的相关问题。 展开更多

关键词 酶切位点 基因工程 pbi121

下载PDF 职称材料

翅碱蓬CMO cDNA基因克隆、测序及重组植物表达载体的构建 被引量：8

10

作者 仲崇斌 刘长江 +2 位作者 费腾 袁晓东 孙丽慧 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期80-83,共4页

从翅碱蓬叶片中提取总RNA,根据相关同源序列设计引物,使用反转录试剂盒进行RT- PCR,扩增得到翅碱蓬胆碱单加氧酶(CMO)cDNA,进行PCR产物测序;然后将CMO cDNA T-A克隆至pMD18-T-simple载体上,经测序正确后亚克隆至pBI121植物表达载体,进... 从翅碱蓬叶片中提取总RNA,根据相关同源序列设计引物,使用反转录试剂盒进行RT- PCR,扩增得到翅碱蓬胆碱单加氧酶(CMO)cDNA,进行PCR产物测序;然后将CMO cDNA T-A克隆至pMD18-T-simple载体上,经测序正确后亚克隆至pBI121植物表达载体,进行酶切及克隆测序鉴定。 展开更多

关键词 胆碱单加氧酶 pMD18-T-simple载体 pbi121植物表达载体 大肠杆菌 JM109

下载PDF 职称材料

pBI121表达载体及其转化植株的快速鉴定 被引量：5

11

作者 王华新 曹家树 +2 位作者 向珣 余小林 叶纨芝 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期137-142,共6页

以双元质粒pBI121为基础分别构建正义、反义和RNA干涉(RNAi)植物表达载体.根据pBI121质粒多克隆位点两侧的DNA序列设计1对通用引物,以表达载体的重组质粒DNA为模板进行PCR扩增,使用限制性内切酶BamHⅠ酶切PCR产物以验证扩增条带的真实性... 以双元质粒pBI121为基础分别构建正义、反义和RNA干涉(RNAi)植物表达载体.根据pBI121质粒多克隆位点两侧的DNA序列设计1对通用引物,以表达载体的重组质粒DNA为模板进行PCR扩增,使用限制性内切酶BamHⅠ酶切PCR产物以验证扩增条带的真实性,从而可以快速鉴定pBI121表达载体的重组克隆.这种方法也可用于快速鉴定上述表达载体的转基因植株,其检测结果与常规鉴定方法完全一致.此外,可以根据需要对表达载体的阳性PCR扩增产物进行测序,测序结果能够精确地显示出重组pBI121表达载体中目的片段的插入方向以及插入序列是否出现碱基突变.本研究为各种pBI121表达载体及其转基因植株的鉴定提供了一种快速、有效的方法. 展开更多

关键词 pbil21质粒 植物表达载体 转基因植株 鉴定方法

下载PDF 职称材料

木薯AGPase基因的克隆与载体构建 被引量：4

12

作者 赵德征 罗兴录 +3 位作者 唐娟娟 许娟 袁胜勇 杨鑫 《中国农学通报》 CSCD 2012年第21期76-80,共5页

为了研究木薯淀粉合成酶关键基因AGPase在木薯淀粉合成中的作用,根据GenBank中其他物种AGPase小亚基基因序列,从高淀粉木薯‘辐选01’中克隆得到含3’末端的909bp的基因片段,回收克隆测序。结果显示,克隆获得片段与基因库中登录的蓖麻... 为了研究木薯淀粉合成酶关键基因AGPase在木薯淀粉合成中的作用,根据GenBank中其他物种AGPase小亚基基因序列,从高淀粉木薯‘辐选01’中克隆得到含3’末端的909bp的基因片段,回收克隆测序。结果显示,克隆获得片段与基因库中登录的蓖麻、毛果杨、甜橙、番薯、蜜柑、大豆同源性依次达到91%、91%、87%、86%、86%及85%。将阳性克隆与PBI121载体进行双酶切、连接,构建植物反义表达载体PBI121-AGPss,并将其导入农杆菌,得到农杆菌工程菌株。为进一步开展木薯淀粉合成相关的基因调控、转基因及基因功能研究奠定基础。 展开更多

关键词 木薯 pbi121-AGPss 基因克隆 载体构建

下载PDF 职称材料

禽脑脊髓炎病毒VP1基因植物表达载体的构建 被引量：3

13

作者 马强 张二芹 张同旭 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2010年第5期25-27,共3页

以提取的禽脑脊髓炎病毒总RNA为模板,以P1和P2为引物,反转录为cDNA,再以cDNA为模板进行PCR扩增。将扩增产物克隆pMD18-T载体中,获得重组质粒pMD18-T-VP1,PstⅠ/BamHⅠ双酶切及PCR确认正确后,利用pMD18-T-VP1重组质粒为模板,以P3和P4为引... 以提取的禽脑脊髓炎病毒总RNA为模板,以P1和P2为引物,反转录为cDNA,再以cDNA为模板进行PCR扩增。将扩增产物克隆pMD18-T载体中,获得重组质粒pMD18-T-VP1,PstⅠ/BamHⅠ双酶切及PCR确认正确后,利用pMD18-T-VP1重组质粒为模板,以P3和P4为引物,经PCR扩增获得了大小约810bp的产物。VP1基因和pBI121植物表达载体用SmaⅠ和SacⅠ双酶切,经纯化后连接,再转化到EHA105农杆菌中,酶切和测序鉴定结果表明,成功地构建了重组质粒pBI121-VP1,为进一步利用转基因植物生产VP1蛋白奠定了基础。 展开更多

关键词 禽脑脊髓炎病毒 VP1基因 pbi121植物表达载体

下载PDF 职称材料

新城疫病毒HN基因的克隆及在苜蓿中的表达 被引量：2

14

作者 杨红军 王豪举 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2011年第1期3-6,共4页

为了克隆新城疫病毒LaSota株HN基因,构建原核重组表达质粒pBI121-HN,使HN基因在苜蓿中表达,将新城疫病毒LaSota株接种于鸡胚,培养、纯化后收获鸡新城疫病毒,提取病毒RNA,经反转录后通过PCR扩增HN基因,克隆得到重组质粒pBI121-HN,并其通... 为了克隆新城疫病毒LaSota株HN基因,构建原核重组表达质粒pBI121-HN,使HN基因在苜蓿中表达,将新城疫病毒LaSota株接种于鸡胚,培养、纯化后收获鸡新城疫病毒,提取病毒RNA,经反转录后通过PCR扩增HN基因,克隆得到重组质粒pBI121-HN,并其通过电转化导入根癌农杆菌中,以根癌农杆菌为介导将HN基因导入苜蓿细胞。最终成功构建了重组表达质粒pBI121-HN,并通过根癌农杆菌转染苜蓿细胞将其在苜蓿中成功表达。本试验为家禽的植物性苜蓿疫苗的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 新城疫病毒 HN基因 pbi121载体 表达

下载PDF 职称材料

杜氏盐藻MAPK基因植物表达载体的构建及对烟草的转化 被引量：2

15

作者 郭丽 段金秀 +4 位作者 梁占训 孙晓玲 张鹤山 王小行 曹致中 《草原与草坪》 CAS 2006年第4期32-36,共5页

以载体pBI121为基础,经SmaI和BamHI单酶切后,构建了植物表达载体pBI121-MAPK,并通过农杆菌介导采用叶盘转化法将其转入烟草中,经卡那霉素抗性筛选,获得转基因抗性植株。经PCR检测表明pBI121-MAPK已整和到烟草基因组中。

关键词 pbi121-MAPK 表达载体 农杆菌介导法 烟草

下载PDF 职称材料

白颖苔草热激转录因子(HSF1)真核表达载体的构建 被引量：2

16

作者 孙彦 郭校民 周禾 《草业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期544-548,共5页

根据表达载体PBI 121特性及酶切位点设计合适的引物,由表达引物通过PCR技术从含有白颖苔草(Carex rigescens)CrHsf全长cDNA的克隆载体的大肠杆菌上扩增出带有特定酶切位点的CrHsf完整开放阅读框。再对载体和目的片段进行酶切处理,处理... 根据表达载体PBI 121特性及酶切位点设计合适的引物,由表达引物通过PCR技术从含有白颖苔草(Carex rigescens)CrHsf全长cDNA的克隆载体的大肠杆菌上扩增出带有特定酶切位点的CrHsf完整开放阅读框。再对载体和目的片段进行酶切处理,处理后将正确的目的基因片段亚克隆至PBI 121植物表达载体。通过PCR及酶切鉴定,结果证明,目的基因片段已被正确克隆到表达载体上,载体构建成功。 展开更多

关键词 HSF基因 植物表达载体pbi121 构建

下载PDF 职称材料

甘蓝抗枯萎病基因FOC1植物表达载体构建及遗传转化 被引量：1

17

作者 刘洁 马建 +3 位作者 雷蕾 孙超 康俊根 颉建明 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期429-436,共8页

为研究甘蓝枯萎病抗性基因FOC1的抗性功能,利用前期克隆的FOC1基因,以pBI121质粒为植物表达载体,采用同源重组法构建FOC1基因的过表达载体;将构建好的重组质粒采用冻融法转入根癌农杆菌LBA4404菌株中,并通过农杆菌介导的甘蓝外植体转化... 为研究甘蓝枯萎病抗性基因FOC1的抗性功能,利用前期克隆的FOC1基因,以pBI121质粒为植物表达载体,采用同源重组法构建FOC1基因的过表达载体;将构建好的重组质粒采用冻融法转入根癌农杆菌LBA4404菌株中,并通过农杆菌介导的甘蓝外植体转化法对感病甘蓝进行遗传转化,利用载体特异引物对获得的转基因植株进行PCR鉴定。结果表明,最终成功构建FOC1基因的过表达载体pBI121-35S-FOC1,并已成功整合到受体甘蓝基因组中。 展开更多

关键词 甘蓝 抗枯萎病基因 pbi121质粒 载体构建 遗传转化

下载PDF 职称材料

LMW-GS16基因表达载体的构建

18

作者 武丽敏 江千涛 +2 位作者 李琴 魏育明 郑有良 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期381-384,共4页

采用PCR方法对来自大麦的LMW-GS16基因进行修饰,在基因5′及3′端分别加入构建表达载体所需的BamHⅠ和SacⅠ限制酶切位点,并将其连接在相应酶切的质粒pBI121上,构建成LMW-GS植物表达载体pBI121-16。重组质粒转化到E.coliDH5α和农杆菌LB... 采用PCR方法对来自大麦的LMW-GS16基因进行修饰,在基因5′及3′端分别加入构建表达载体所需的BamHⅠ和SacⅠ限制酶切位点,并将其连接在相应酶切的质粒pBI121上,构建成LMW-GS植物表达载体pBI121-16。重组质粒转化到E.coliDH5α和农杆菌LBA4404中,通过Kanamycin筛选阳性克隆,用PCR方法进行鉴定。对照组转化率为零,转化组阳性克隆特异地扩增出900 bp片段,与目标基因DNA大小一致,转化率为1.0×106/μg DNA。 展开更多

关键词 表达载体 LMW-GS基因 pbi121-16

下载PDF 职称材料

烟草反义Mlo基因表达载体的构建

19

作者 邬晓勇 时羽杰 +4 位作者 李杰 罗倩 王跃华 唐媛 孙雁霞 《成都大学学报（自然科学版）》 2017年第4期333-337,共5页

获得烟草反义Mlo基因的植物表达载体pBI 121-Mlo,为进行烟草遗传转化,获得该基因表达的缺陷型植株打下基础.从烟草叶片中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增得到Mlo基因的c DNA,以此为模板设计反义引物,通过PCR扩增出反义Mlo基因,将此反义Ml... 获得烟草反义Mlo基因的植物表达载体pBI 121-Mlo,为进行烟草遗传转化,获得该基因表达的缺陷型植株打下基础.从烟草叶片中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增得到Mlo基因的c DNA,以此为模板设计反义引物,通过PCR扩增出反义Mlo基因,将此反义Mlo基因与T载体连接,测序正确后再将此反义片段与植物表达载体pBI 121连接,构建烟草反义Mlo基因的植物表达载体pBI 121-Mlo.经Kan选择筛选出反义重组菌落,碱裂解法小量提取质粒后,用Xba I和Bam HI双酶切后再进行电泳鉴定.结果表明,目的基因已与植物表达载体pBI 121连接成功.成功构建了烟草反义Mlo基因表达载体pBI 121-Mlo. 展开更多

关键词 MLO基因 pbi 121Mlo RT-PCR 反义片段 双酶切

下载PDF 职称材料

牛酪蛋白cDNA基因克隆的改建 被引量：2

20

作者 赵双宜 张燕君 +2 位作者 粟翼玟 周同度 劳为德 《山东大学学报（自然科学版）》 CSCD 1996年第4期448-453,共6页

牛酪蛋白全长cDNA克隆pB_aS_1C184经Bgl Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切,回收其中的酪蛋白基因编码片段,与经BamH Ⅰ、SmaⅠ双酶切的植物表达载体pBI121.2分两步连接:第一步载体的BamHⅠ末端与酪蛋白基因的BglⅠ粘性末端连接;第二步用T_4DNA多聚酶... 牛酪蛋白全长cDNA克隆pB_aS_1C184经Bgl Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切,回收其中的酪蛋白基因编码片段,与经BamH Ⅰ、SmaⅠ双酶切的植物表达载体pBI121.2分两步连接:第一步载体的BamHⅠ末端与酪蛋白基因的BglⅠ粘性末端连接;第二步用T_4DNA多聚酶补平酪蛋白基因的EcoR Ⅰ末端,再与载体SmaⅠ进行平末端连接而环化,转化JM109菌株,从得到的33个转化子中,通过^(32)P标记的酪蛋白cDNA基因为探针,点杂交筛选到一个阳性克隆。经酶切鉴定,确认酪蛋白cDNA基因编码区已正确插入到pBI121.2中。 展开更多

关键词 酪蛋白基因 CDNA 植物 品种改良 牛 基因克隆

全文增补中