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人完整p53凋亡刺激蛋白家族抑制成员多克隆抗体的制备及鉴定 被引量：5
1
作者 蔡云 高兴 +3 位作者 辛海明 陈杰 扬新 刘泽军 《医学研究生学报》 CAS 2009年第3期240-243,共4页
目的:p53凋亡刺激蛋白(ASPP)家族可调节p53抑癌功能,其抑制成员(iASPP)具有特异性抑制p53诱导细胞凋亡的能力。为了对iASPP进行系统研究,文中报道制备完整的iASPP分子多克隆抗体的方法。方法:在完整iASPP独有的N端选择3个免疫原肽段,制... 目的:p53凋亡刺激蛋白(ASPP)家族可调节p53抑癌功能,其抑制成员(iASPP)具有特异性抑制p53诱导细胞凋亡的能力。为了对iASPP进行系统研究,文中报道制备完整的iASPP分子多克隆抗体的方法。方法:在完整iASPP独有的N端选择3个免疫原肽段,制备了3个多克隆抗体。用ELISA检测抗体效价,Western blot比较3个抗体检测内源性抗原的效果,并用体外转录翻译系统制备的完整iASPP蛋白作为对照标准。结果:1号抗体效价>1∶32000,2号和3号抗体效价>1∶16000。Western blot确定100000为完整iASPP蛋白的条带位置。结论:成功地制备了iASPP的多克隆抗体,为深入研究完整iASPP提供了有用的工具。 展开更多
关键词 p53凋亡刺激蛋白家族抑制成员 多克隆抗体 免疫原 免疫印迹
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iASPP真核表达载体构建及其功能鉴定 被引量：1
2
作者 陈杰 杨益民 +4 位作者 杨靓靓 杨婷 蔡云 辛海明 刘泽军 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第35期4233-4235,4238,共4页
目的构建P53凋亡刺激蛋白(ASPP)家族的抑制成员iASPP的真核表达载体,并将其通过脂质体转染到结肠癌细胞株SW480及Lovo中,观察转染前后iASPP表达变化及其对细胞凋亡的影响。方法将解放军第十六医院检验科经测序鉴定的pMD19-T-iASPP质粒... 目的构建P53凋亡刺激蛋白(ASPP)家族的抑制成员iASPP的真核表达载体,并将其通过脂质体转染到结肠癌细胞株SW480及Lovo中,观察转染前后iASPP表达变化及其对细胞凋亡的影响。方法将解放军第十六医院检验科经测序鉴定的pMD19-T-iASPP质粒亚克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+),构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-iASPP,测序鉴定后用脂质体将重组质粒转染至结肠癌细胞株SW480及Lovo中,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测iASPP的表达以及用流式细胞仪检测细胞凋亡的变化情况。结果重组表达质粒pcDNA3.1(+)-iASPP,经酶切测序与GenBank上记录的人iASPP cDNA序列(gi 60457962)完全一致。经pcDNA3.1(+)-iASPP质粒转染的结肠癌细胞株SW480及Lovo的iASPP mRNA表达增高,细胞凋亡率下降。结论成功构建了重组表达质粒pcDNA3.1(+)-iASPP,并成功在结肠癌细胞株SW480及Lovo中获得了表达,细胞株的凋亡率下降,提示抑制iASPP高表达有可能成为恢复P53抑癌功能的新策略。 展开更多
关键词 p53凋亡刺激蛋白家族抑制成员 遗传载体 转染 细胞凋亡
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CDK9、iASPP在子宫颈癌组织中的表达及临床意义
3
作者 张雨强 骆婕 +2 位作者 郭琴 赵曼丹 陶莹 《广东药科大学学报》 CAS 2022年第4期89-94,共6页
目的探讨细胞周期依赖性蛋白激酶9(CDK9)、p53凋亡刺激蛋白家族抑制成员(iASPP)在子宫颈癌中的表达情况以及在子宫颈癌发生发展中的意义。方法收集正常子宫颈组织21例(对照组)、子宫颈低级别鳞状上皮内病变组织39例(低级别组)、子宫颈... 目的探讨细胞周期依赖性蛋白激酶9(CDK9)、p53凋亡刺激蛋白家族抑制成员(iASPP)在子宫颈癌中的表达情况以及在子宫颈癌发生发展中的意义。方法收集正常子宫颈组织21例(对照组)、子宫颈低级别鳞状上皮内病变组织39例(低级别组)、子宫颈高级别鳞状上皮内病变组织40例(高级别组)及子宫颈癌组织45例(癌症组),采用免疫组织化学方法检测CDK9、iASPP在各组子宫颈组织中的表达情况,分析CDK9、iASPP表达与子宫颈癌临床病理特征的相关性,分析子宫颈癌组织中CDK9、iASPP的表达相关性。结果CDK9在对照组、低级别组、高级别组及癌症组中的阳性表达率分别为19.4%、43.6%、55.0%、68.9%,差异有统计学意义(χ^(2)=15.46,P=0.001);iASPP在对照组、低级别组、高级别组及癌症组中的阳性表达率分别为28.6%、51.3%、65.0%、73.3%,差异有统计学意义(χ^(2)=13.37,P=0.004);在子宫颈癌组织中,CDK9和iASPP表达与子宫颈癌的临床分期、浸润深度和淋巴结转移有关(P<0.05),与分化程度和脉管浸润无关(P>0.05);在CDK9阳性表达的子宫颈癌组织中,iASPP的阳性表达率更高,差异有统计学意义(χ^(2)=4.059,P=0.044);CDK9和iASPP在癌症组中的表达相关性为正相关(r=0.355,P=0.017)。结论CDK9、iASPP在子宫颈癌的发生发展和侵袭发展中具有协同作用,CDK9可能通过iASPP分子通路发生作用;CDK9和iASPP有望成为子宫颈癌治疗的潜在药物靶点及子宫颈癌患者临床评估预后的监测指标。 展开更多
关键词 细胞周期依赖性蛋白激酶9 p53凋亡刺激蛋白家族抑制成员 子宫颈癌 子宫颈鳞状上皮内病变 免疫组织化学
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