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Tumor blood vessels formation in osteosarcoma:vasculogenesis mimicry 被引量:45
1
作者 蔡宣松 贾永伟 +1 位作者 梅炯 汤如勇 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2004年第1期94-98,共5页
BACKGROUND: Osteosarcoma is characterized by high neovascularization and a high propensity for metastasis through bloodstream. This study was to examine whether there is evidence for vasculogenic mimicry in osteosarco... BACKGROUND: Osteosarcoma is characterized by high neovascularization and a high propensity for metastasis through bloodstream. This study was to examine whether there is evidence for vasculogenic mimicry in osteosarcoma and to illustrate mechanism of tumor blood vessels formation in osteosarcoma. METHODS: Osteosarcoma cell lines (U-2OS) were tested for their ability to form tubular networks in three-dimensional culture containing type I collagen. The structures of the tubular networks were observed with phase contrast microscope and transmission electron microscope (TEM). Morphometric studies using hematoxylin and eosin (HE) stain and CD31 immunohistochemical stain to show tumor-lined channels in human osteosarcoma were also performed. RESULTS: Observation with light microscope and TEM showed that highly aggressive osteosarcoma cell lines (U-2OS) formed networks containing channels when grown in three-dimensional culture containing type I collagen, in the absence of endothelial cells or fibroblasts. Morphometric observation using HE stain and CD31 immunohistochemical stain showed that tumor cell-lined channels were also detected in vivo in osteosarcoma; by comparison, all vascular areas in the pedicle of osteochondroma or outside osteochondroma were endothelial-lined. CONCLUSION: These observations strongly suggest that aggressive osteosarcoma cells may generate vascular channels that facilitate tumor perfusion independent of tumor angiogenesis and have the ability of vasculogenic mimicry. 展开更多
关键词 Bone Neoplasms cell line Tumor Collagen Humans IMMUNOHISTOCHEMISTRY Neovascularization Pathologic osteosarcoma Research Support Non-U.S. Gov't
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Stathmin基因反义核酸对人成骨肉瘤细胞系的生长抑制作用 被引量:10
2
作者 范熙明 张惠中 +1 位作者 张明华 范清宇 《第四军医大学学报》 北大核心 2002年第5期469-470,共2页
目的 探讨 Stathmin基因的反义核酸 (AS- ODN)对人成骨肉瘤细胞系的生长抑制作用 ,并观察与化疗药物合用后的协同作用 .方法 以高表达 Stathm in的人成骨肉瘤细胞系 SOSP- 96 0 7为靶细胞、反义 Stathmin(AS- ODN)为阻断剂 ,通过 MTT... 目的 探讨 Stathmin基因的反义核酸 (AS- ODN)对人成骨肉瘤细胞系的生长抑制作用 ,并观察与化疗药物合用后的协同作用 .方法 以高表达 Stathm in的人成骨肉瘤细胞系 SOSP- 96 0 7为靶细胞、反义 Stathmin(AS- ODN)为阻断剂 ,通过 MTT试验观察 AS- ODN对成骨肉瘤细胞的生长抑制作用及与紫杉醇 (PTX)的协同作用 ,流式细胞仪分析细胞增殖周期的影响 .结果  AS- ODN及 AS- ODN与 PTX联合应用均明显抑制成骨肉瘤细胞的生长 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1) .SOSP- 96 0 7在 AS- ODN作用下 ,细胞分裂阻滞在分裂期的中期 ,并诱导细胞发生凋亡 .结论  Stathmin基因的反义核酸(AS- ODN)对成骨肉瘤细胞的生长可能起十分重要的作用 ,它有望成为成骨肉瘤治疗的新靶点 。 展开更多
关键词 STATHMIN基因 反义核酸 成骨肉瘤 细胞系 生长抑制作用
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人骨肉瘤细胞系OS-9901的建立及其生物学特性 被引量:9
3
作者 张殿忠 范清宇 +3 位作者 马保安 周勇 张惠中 裘秀春 《第四军医大学学报》 1999年第12期1048-1050,共3页
建立人骨肉瘤细胞系,为骨肉瘤研究提供新的实验模型.方法:取经病理证实的新鲜骨肉瘤手术标本,进行体外原代组织快培养.对存活细胞进行形态学观察、组织化学染色、细胞周期检查、核型分析、电镜观察和异种移植等.结果:建成细胞系O... 建立人骨肉瘤细胞系,为骨肉瘤研究提供新的实验模型.方法:取经病理证实的新鲜骨肉瘤手术标本,进行体外原代组织快培养.对存活细胞进行形态学观察、组织化学染色、细胞周期检查、核型分析、电镜观察和异种移植等.结果:建成细胞系OS-99o1,其形态学表现、组化染色、电镜观察和异种移植等均符合骨肉瘤细胞特征.经半年多体外培养,已连续传代7O余次.细胞倍增时间为33h,细胞周期测定:GI期6o.2%、GZ期17.3%、S期22.6%.染色体具有亚三倍体核型,众数为62~65条.异种移植成瘤率IOo%,无支原体污染.结论:OS-99o1是一株人骨肉瘤细胞系。 展开更多
关键词 骨肉瘤 细胞系 生物学特性 OS-9901
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人骨肉瘤细胞株中类肿瘤干细胞的分离培养及鉴定 被引量:6
4
作者 欧阳振 王栓科 +3 位作者 康学文 王翠芳 汪静 郭洪章 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期36-39,共4页
目的:从人骨肉瘤株U2-OS中分离并鉴定类肿瘤干细胞。方法:用无血清培养法从骨肉瘤细胞株中分离出肿瘤细胞球,流式细胞术检测骨肉瘤细胞株中Stro-1的阳性表达率,MTT法检测其增殖能力,免疫磁珠分选Stro-1阳性细胞,反转录-聚合酶链反应(RT-... 目的:从人骨肉瘤株U2-OS中分离并鉴定类肿瘤干细胞。方法:用无血清培养法从骨肉瘤细胞株中分离出肿瘤细胞球,流式细胞术检测骨肉瘤细胞株中Stro-1的阳性表达率,MTT法检测其增殖能力,免疫磁珠分选Stro-1阳性细胞,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法研究Stro-1阳性细胞中Stro-1 mRNA的表达,并将Stro-1阳性细胞和阴性细胞分别接种于NOD/SCID小鼠。结果:U2-OS中CD44的阳性百分率为5.67%,Stro-1阳性细胞形成的细胞球具有增殖和分化的能力,Stro-1阳性细胞中呈现Stro-1 mRNA的高表达,Stro-1阳性细胞能形成骨肉瘤。结论:骨肉瘤细胞株中存在类骨肉瘤干细胞,并具有自我更新和多向分化的能力。 展开更多
关键词 肿瘤干细胞 骨肉瘤 细胞系 肿瘤 细胞培养技术
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RNAi对骨肉瘤细胞株HMGA1基因表达及侵袭力抑制的实验研究 被引量:5
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作者 袁绍辉 潘琦 +3 位作者 尚剑 曹阳 付春江 毕郑钢 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2010年第15期1185-1189,共5页
目的:探讨RNA干扰(RNAi)技术对骨肉瘤细胞株(MG-63)中HMGA1基因表达和侵袭力的影响。方法:采用单细胞克隆技术,从MG-63中分离培养出高表达HMGA1的骨肉瘤细胞株,将细胞分成3组,通过pU6mRFP载体进行转染:实验组,转染HMGA1的小干扰RNA(siRN... 目的:探讨RNA干扰(RNAi)技术对骨肉瘤细胞株(MG-63)中HMGA1基因表达和侵袭力的影响。方法:采用单细胞克隆技术,从MG-63中分离培养出高表达HMGA1的骨肉瘤细胞株,将细胞分成3组,通过pU6mRFP载体进行转染:实验组,转染HMGA1的小干扰RNA(siRNA);阴性对照组,转染HMGA1的无关序列;细胞对照组为未转染的MG-63细胞。转染细胞株后,荧光检测转染效率;用实时荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹法分别从mRNA和蛋白质水平检测siRNA对HM-GA1表达的影响;Transwell趋化侵袭实验观察转染后细胞株侵袭能力的变化。结果:荧光检测转染效率,实验组为(55.68±6.74)%,阴性对照组为(49.87±4.33)%;细胞对照组观察不到明显的荧光细胞。实验组HMGA1siRNA转染骨肉瘤细胞后,明显下调细胞中HMGA1mRNA及蛋白的表达,与转染时间和转染浓度相关;阴性对照组和细胞对照组在转染前后HMGA1基因的mRNA及蛋白质表达均无明显变化。实验组细胞株穿过侵袭膜的细胞数明显低于阴性对照组和细胞对照组,P<0.01。结论:HMGA1siRNA可以下调骨肉瘤细胞中HMGA1mRNA及其蛋白的表达,抑制骨肉瘤细胞侵袭能力。 展开更多
关键词 骨肉瘤/病理学 基因 肿瘤抑制 细胞系 肿瘤 基因表达
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基于ERK1/2通路探讨八宝丹抑制骨肉瘤生长的机制
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作者 陈鹏 张冬龙 +3 位作者 刘宇 林庆宾 刘俊宁 洪振强 《福建中医药》 2023年第6期18-21,51,共5页
目的通过观察八宝丹(BBD)对U2OS细胞生长的抑制作用以及对细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)通路的影响,以期揭示八宝丹抑制骨肉瘤生长的机制。方法选用U2OS细胞株作为研究对象,实验分为对照组和八宝丹高、中、低剂量组,高剂量组药物浓度为1.5... 目的通过观察八宝丹(BBD)对U2OS细胞生长的抑制作用以及对细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)通路的影响,以期揭示八宝丹抑制骨肉瘤生长的机制。方法选用U2OS细胞株作为研究对象,实验分为对照组和八宝丹高、中、低剂量组,高剂量组药物浓度为1.5 mg/mL;中剂量组药物浓度为1.0 mg/mL、低剂量组药物浓度为0.5 mg/mL,干预结束后采用CCK8法检测八宝丹对U2OS细胞增殖的影响;流式细胞术检测八宝丹对细胞凋亡的影响;qPCR检测八宝丹对ERK1/2通路上游Ras、Raf基因表达水平的影响;Western blot检测八宝丹对Cy⁃clinD1、MEK1/2、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表达量的影响。结果与对照组比较,不同浓度的八宝丹在干预24 h和48 h对U2OS细胞均有不同程度的生长抑制作用(P均<0.05);不同浓度八宝丹干预48 h均能明显降低Ras、Raf基因的表达,同时下调CyclinD1、MEK1/2蛋白的表达,下调ERK1/2与p-ERK1/2蛋白比率(P均<0.05)。结论八宝丹可抑制U2OS骨肉瘤细胞增殖,促进其凋亡,可能是通过抑制ERK1/2信号通路实现的。 展开更多
关键词 骨肉瘤 八宝丹 U2OS细胞 增殖 凋亡 ERK1/2信号通路
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去甲基化诱导肿瘤特异性CD8^+T细胞识别杀伤骨肉瘤 被引量:4
7
作者 李冰皓 林鹏 +3 位作者 王战 孙凌凌 李恒元 叶招明 《中华骨科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期329-339,共11页
目的探索肿瘤特异性免疫细胞杀伤骨肉瘤的实现方法,并分析使用过继性细胞输注免疫治疗对骨肉瘤产生的治疗效果。方法使用地西他滨(Decitabine,DAC)作为去甲基化药物对HOS及U2OS骨肉瘤细胞系进行治疗,采用PCR及Western Blot检测治... 目的探索肿瘤特异性免疫细胞杀伤骨肉瘤的实现方法,并分析使用过继性细胞输注免疫治疗对骨肉瘤产生的治疗效果。方法使用地西他滨(Decitabine,DAC)作为去甲基化药物对HOS及U2OS骨肉瘤细胞系进行治疗,采用PCR及Western Blot检测治疗后肿瘤-睾丸抗原(cancer-testis antigen,CTA)的表达情况。在动物实验中,使用转染了萤火虫荧光素酶和HLA-A0201的人源肿瘤细胞系HOS在免疫缺陷NOD-SCID小鼠上成瘤,并使用DiR染色标记体外培养扩增的CTA特异性对应HLA人源CD8^+ T细胞输注,通过小动物活体成像系统检测T细胞在小鼠体内的分布,同时监测治疗过程中小鼠瘤块的生长情况。使用鼠源骨肉瘤细胞系K7M2在免疫健全鼠BALB/c成瘤,进行去甲基化,使用流式细胞仪分析治疗前后肿瘤块内淋巴细胞的比例、数量以及CD8^+ T细胞的活化情况,判断去甲基化对自体淋巴细胞浸润、活化的作用。结果使用DAC对骨肉瘤细胞系HOS及U2OS进行去甲基化后,所有被检测的CTA表达均不同程度的提高。在体外培养的骨肉瘤细胞经过至少5 d的DAC治疗后能被CTA特异性CD8^+ T细胞显著杀伤,DAC本身对骨肉瘤细胞系生长可产生抑制作用。在免疫缺陷动物模型中,经过DAC去甲基化预治疗的荷瘤小鼠能观测到明显的CTA特异性T细胞向肿瘤组织归巢现象,同时,去甲基化预治疗联合CTA特异性T细胞输注治疗显著抑制了骨肉瘤移植瘤的生长。在免疫健全鼠肿瘤模型中,去甲基化能促进自体T细胞向肿瘤组织的归巢,并提高肿瘤内CD8^+ T细胞的活性及其分泌的干扰素γ、颗粒酶B、穿孔素水平。结论去甲基化能在抑制骨肉瘤细胞生长的同时,提高骨肉瘤细胞的CTA表达,为以CTA为靶点的特异性细胞免疫输注治疗提供条件。 展开更多
关键词 骨肉瘤 细胞系 肿瘤 动物实验
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槲皮素诱导耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞系U2-OS/MTX300凋亡 被引量:4
8
作者 谢显彪 尹军强 +5 位作者 贾强 王晋 邹昌业 王姚斐 黄纲 沈靖南 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期331-335,共5页
【目的】研究槲皮素对耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞株U2-OS/MTX300的增殖抑制和诱导凋亡作用及相关机制。【方法】以不同浓度槲皮素及甲氨蝶呤处理U2-OS及U2-OS/MTX300。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法及平板克隆检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周... 【目的】研究槲皮素对耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞株U2-OS/MTX300的增殖抑制和诱导凋亡作用及相关机制。【方法】以不同浓度槲皮素及甲氨蝶呤处理U2-OS及U2-OS/MTX300。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法及平板克隆检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,Hochest33258染色及流式细胞仪检测凋亡,Westernblot法检测凋亡相关蛋白cleaved-PARP,Bax,Bak,Bcl-2及Bcl-XL表达。【结果】槲皮素可明显抑制耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞U2-OS/MTX300的增殖,72hIC50值为(22±4)μmol/L。10、25、50μmol/L可显著抑制U2-OS/MTX300克隆形成数量,且随剂量增加抑制作用明显增强。槲皮素与甲氨蝶呤之间不存在交叉耐药性。槲皮素能诱导U2-OS/MTX300细胞S期阻滞,并可诱导胞内产生典型凋亡小体,流式细胞仪可检测到明显凋亡。其作用机制是通过上调Bax,Bak及下调Bcl-2表达,促进cytochrome C释放及诱发PARP等重要胞内蛋白断裂来实现。【结论】槲皮素可显著抑制耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞系U2-OS/MTX300细胞增殖并诱导其凋亡,线粒体途径可能是其诱导凋亡的重要机制。 展开更多
关键词 槲皮素 骨肉瘤 细胞系 细胞凋亡 甲氨蝶呤
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KiSS-1基因对骨肉瘤MG63细胞增殖与黏附能力影响的研究 被引量:3
9
作者 林建华 沈荣凯 张俐 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2011年第9期667-671,共5页
目的:观察人肿瘤转移抑制基因KiSS-1对人骨肉瘤MG63细胞增殖、黏附能力的影响。方法:PSNAV2.0-KiSS-1转染骨肉瘤MG63细胞,经G418筛选稳定表达KiSS-1基因的MG63细胞,应用RealtimePCR、蛋白质印迹法检测KiSS-1基因的表达情况。CCK-8法检... 目的:观察人肿瘤转移抑制基因KiSS-1对人骨肉瘤MG63细胞增殖、黏附能力的影响。方法:PSNAV2.0-KiSS-1转染骨肉瘤MG63细胞,经G418筛选稳定表达KiSS-1基因的MG63细胞,应用RealtimePCR、蛋白质印迹法检测KiSS-1基因的表达情况。CCK-8法检测各组肿瘤细胞增殖能力的变化,并通过各组肿瘤细胞与血管内皮细胞、层粘连蛋白FN、人工基质胶Matrigel的黏附情况评估KiSS-1基因对MG63细胞黏附能力的影响。结果:PSNAV2.0-KiSS-1转染的MG63细胞稳定、能高效表达KiSS-1基因。转染KiSS-1基因的骨肉瘤MG63细胞随培养时间延长,特别是48 h后较MG63细胞组增殖能力明显减慢,F=10.05,P<0.05;转染后细胞与脐血管内皮细胞、FN、Matrigel黏附能力比较明显降低(P<0.05)。结论:KiSS-1基因能显著降低人骨肉瘤MG63细胞的增殖和黏附能力,可能在骨肉瘤的基因治疗中发挥重要作用。 展开更多
关键词 骨肉瘤/病理学 细胞系 肿瘤 基因疗法 细胞增殖
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穿心莲内酯对人骨肉瘤细胞的影响及其分子机制 被引量:2
10
作者 张希劲 陈涛 +4 位作者 周缜 沈若武 刘小强 李兆 杨希重 《精准医学杂志》 2020年第2期100-105,共6页
目的探讨穿心莲内酯(AG)对人骨肉瘤细胞的影响及其分子机制。方法分别以含有AG为0、5、10、20、50、100μmol/L(A、B、C、D、E、F组)的培养基培养人骨肉瘤细胞,倒置显微镜下计数各组细胞数,并计算各组细胞密度及细胞生存率;采用平板克... 目的探讨穿心莲内酯(AG)对人骨肉瘤细胞的影响及其分子机制。方法分别以含有AG为0、5、10、20、50、100μmol/L(A、B、C、D、E、F组)的培养基培养人骨肉瘤细胞,倒置显微镜下计数各组细胞数,并计算各组细胞密度及细胞生存率;采用平板克隆实验观察AG对人骨肉瘤HOS和U2OS细胞增殖能力的影响;Transwell小室实验观察AG对人骨肉瘤HOS和U2OS细胞侵袭和迁移能力的影响;流式细胞术观察AG对人骨肉瘤HOS和U2OS细胞周期分布的影响;Western Blot实验检测AG对鞘氨醇激酶(SphK1)以及黏着斑激酶(FAK)表达水平的影响。结果组别、时间以及组别与时间交互作用均对人骨肉瘤HOS和U2OS细胞的生存率具有明显影响(F组别=9608.52、5409.49,F时间=8312.14、352.91,F时间*组别=18.06、3.55,P<0.05);使增殖能力呈浓度依赖性降低(FHOS=97.41,FU2OS=174.13,P<0.05);侵袭和迁移能力明显减弱(t=39.06~135.96,P<0.05);组别、周期及组别与周期交互作用均对人骨肉瘤HOS和U2OS细胞的细胞周期分布具有明显影响(F组别=35.05、8.24,F周期=3211.19、192.49,F周期*组别=75.96、140.97,P<0.05);SphK1和FAK的表达水平均下调(t=15.94~95.79,P<0.05)。结论AG对人骨肉瘤细胞有杀伤作用,其可能与AG影响SphK1信号通路有关。 展开更多
关键词 穿心莲内酯 骨肉瘤 细胞系 肿瘤 细胞增殖 细胞运动 肿瘤侵润 细胞周期 鞘氨醇激酶 黏着斑蛋白酪氨酸激酶类
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骆驼蓬碱介导COX-2表达水平抑制骨肉瘤细胞增殖与凋亡的作用 被引量:3
11
作者 李钟陈 陈珀航 金建强 《中国医师杂志》 CAS 2020年第2期207-210,215,共5页
目的探讨骆驼蓬碱介导COX-2表达水平抑制骨肉瘤细胞增殖与凋亡的作用。方法体外培养人骨肉瘤细胞U2OS细胞系,随机分为对照组、研究组1、研究组2和研究组3,分别在0、5、10、20μmol/L浓度骆驼蓬碱条件下培养48 h。分别使用CCK-8法和流式... 目的探讨骆驼蓬碱介导COX-2表达水平抑制骨肉瘤细胞增殖与凋亡的作用。方法体外培养人骨肉瘤细胞U2OS细胞系,随机分为对照组、研究组1、研究组2和研究组3,分别在0、5、10、20μmol/L浓度骆驼蓬碱条件下培养48 h。分别使用CCK-8法和流式细胞术检测细胞活力和细胞凋亡情况。并分别使用Western blot和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测COX-2、增殖和凋亡相关蛋白和mRNA的表达水平。结果在不同浓度骆驼蓬碱培养24、48 h后,三个研究组的细胞活力明显低于对照组(P <0. 05),而研究组2和研究组3的细胞活力均明显低于研究组1(P <0. 05)。在不同浓度骆驼蓬碱培养12、24、48 h后,三个研究组的细胞凋亡率明显高于对照组(P <0. 05),而研究组2和研究组3均明显高于研究组1(P <0. 05)。培养48 h后,研究组2的COX-2、Cyclin D1、PCNA、Bcl-2蛋白和mRNA的水平明显低于对照组,而cleaved caspase-3和Bax表达水平明显高于对照组(P <0. 05)。结论骆驼蓬碱具有抗骨肉瘤的作用,骆驼蓬碱可通过抑制COX-2的表达调节细胞周期相关蛋白和细胞凋亡相关蛋白的表达发挥抑制骨肉瘤细胞增殖和促进其凋亡的作用。 展开更多
关键词 环氧化酶2 骆驼蓬碱 骨肉瘤 细胞系 肿瘤
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稳定表达TSLC1基因骨肉瘤MG63细胞系的建立及鉴定 被引量:3
12
作者 覃莉 林阳 +1 位作者 杨开祥 祝文涛 《骨科》 CAS 2013年第2期66-68,76,共4页
目的建立稳定表达人肺癌抑癌基因-1(TSLC1)骨肉瘤细胞系并对其进行鉴定。方法脂质体转染的方法将真核表达载体pCI-TSLC1稳定转染至MG63细胞系,经克隆化培养以及G418筛选,获得了1株稳定高表达TSLC1蛋白的细胞系。对其表达的蛋白性质进行... 目的建立稳定表达人肺癌抑癌基因-1(TSLC1)骨肉瘤细胞系并对其进行鉴定。方法脂质体转染的方法将真核表达载体pCI-TSLC1稳定转染至MG63细胞系,经克隆化培养以及G418筛选,获得了1株稳定高表达TSLC1蛋白的细胞系。对其表达的蛋白性质进行了鉴定,对其分泌动态、细胞纯度、遗传稳定性、外源基因整合等生物学特性做了鉴定。结果获得高表达TSLC1的稳定细胞系,命名为M8T。生物学性状研究结果表明该转基因细胞系纯度好,遗传性状稳定,抽提细胞RNA进RT-PCR,扩增到与预期结果大小一致的DNA片段,说明TSLC1基因成功整合到细胞基因组中。细胞系无细菌和霉菌污染。结论成功建立了稳定表达TSLC1的骨肉瘤细胞系M8T。该细胞系遗传性质稳定,为进一步研究抑癌基因TSLC1在骨肉瘤中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 基因 肿瘤抑制 骨肉瘤 转基因 细胞系
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miR-361-5p负调控靶基因FoxM1增加骨肉瘤细胞放射敏感性研究 被引量:3
13
作者 丁帅 高延征 +3 位作者 张广泉 陈书连 曹臣 李白羽 《中华放射肿瘤学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第5期378-381,共4页
目的探讨miR-361-5p对骨肉瘤细胞放射敏感性的影响及其可能的下游调控机制。方法构建放射抵抗的骨肉瘤细胞系HOS-R,利用RT-qPCR检测miR-361-5p在HOS和HOS-R细胞中的表达情况;上调或下调miR-361-5p表达、敲低FoxM1,以克隆形成实验和流式... 目的探讨miR-361-5p对骨肉瘤细胞放射敏感性的影响及其可能的下游调控机制。方法构建放射抵抗的骨肉瘤细胞系HOS-R,利用RT-qPCR检测miR-361-5p在HOS和HOS-R细胞中的表达情况;上调或下调miR-361-5p表达、敲低FoxM1,以克隆形成实验和流式细胞术检测miR-361-5p对HOS-R细胞存活率和细胞凋亡率,通过双荧光素报告基因实验和蛋白免疫印迹实验检测miR-361-5p与FoxM1的靶向关系。构建FoxM1过表达载体,采用克隆形成实验和流式细胞术检测miR-361-5p通过FoxM1对骨肉瘤细胞放射敏感性的影响。结果 RT-qPCR检测结果显示,miR-361-5p在HOS-R细胞中低表达。克隆形成实验和流式细胞术检测结果显示,过表达miR-361-5p可显著降低HOS-R细胞的生存率,增加其细胞凋亡率,与敲低FoxM1结果相反。双荧光报告基因实验证实miR-361-5p靶向负性调控FoxM1表达,FoxM1可逆转miR-361-5p对细胞HOS-R放射敏感性的促进作用。结论miR-361-5p可负调控FoxM1,并影响骨肉瘤细胞的放射敏感性。 展开更多
关键词 骨肉瘤细胞系 基因表达调控 放射敏感性
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分化抑制因子Id1对骨肉瘤细胞增殖的影响 被引量:3
14
作者 陈燕 杨光 杨祖华 《热带医学杂志》 CAS 2014年第1期71-74,共4页
目的探讨分化抑制因子Id1对骨肉瘤细胞增殖的影响及可能的途径。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测Id1表达调节后MG-63细胞增殖变化情况;采用流式细胞术检测Id1下调表达后,MG-63细胞凋亡及细胞周期变化情况;Western blotting技术检测Id... 目的探讨分化抑制因子Id1对骨肉瘤细胞增殖的影响及可能的途径。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测Id1表达调节后MG-63细胞增殖变化情况;采用流式细胞术检测Id1下调表达后,MG-63细胞凋亡及细胞周期变化情况;Western blotting技术检测Id1下调表达后对p-AKT水平的影响。结果本实验利用RNA干扰技术下调骨肉瘤细胞系Id1表达后,可以明显抑制MG-63细胞的增殖,p-AKT的水平也显示下降,流式细胞术证明下调后Id1的水平可以一定程度地调节细胞凋亡水平,而对细胞周期无明显影响,另外进一步构建了Id1的真核表达质粒,转染Id1过表达质粒后,并未见骨肉瘤细胞明显地增殖加速。结论分化抑制因子Id1可能通过影响AKT信号通路进而影响了骨肉瘤细胞的增殖。 展开更多
关键词 骨肉瘤 细胞系 MG-63 ID1 增殖
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人骨肉瘤细胞株MG-63中肿瘤干细胞的生物学特性 被引量:2
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作者 冯大鹏 黄权 +2 位作者 李焱 郑必强 肖建如 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第10期1736-1741,共6页
背景:骨肉瘤干细胞在骨肉瘤的发生、复发及对化疗药物的耐药性中发挥关键作用,而目前关于骨肉瘤干细胞体外分离培养及生物学特性研究的报道甚少。目的:从人骨肉瘤细胞株MG-63中分离出具有干细胞特征的高致瘤性细胞亚群,检测肿瘤干细胞... 背景:骨肉瘤干细胞在骨肉瘤的发生、复发及对化疗药物的耐药性中发挥关键作用,而目前关于骨肉瘤干细胞体外分离培养及生物学特性研究的报道甚少。目的:从人骨肉瘤细胞株MG-63中分离出具有干细胞特征的高致瘤性细胞亚群,检测肿瘤干细胞特异性标志物CD105的表达。方法:无血清悬浮培养法从人骨肉瘤细胞株MG-63中分离出骨肉瘤细胞球,应用流式细胞术检测细胞球中CD73、CD90、CD105的表达,免疫荧光法检测骨肉瘤细胞株及骨肉瘤细胞球中CD105的阳性率,免疫磁珠法分选出CD105+和CD105-的细胞,传代后分别接种于NOD/SCID小鼠评估其致瘤性。结果与结论:CD105在球体细胞中高表达,此类肿瘤细胞具有高侵袭性和高致瘤性,在NOD-SCID小鼠中仅需移植1000个细胞即可形成肿瘤,这些细胞具有自主生长特性,能够在无血清条件下长期培养,CD105+骨肉瘤细胞显示了干细胞的生物学特性,CD105可能成为骨肉瘤干细胞的表面标志之一。 展开更多
关键词 干细胞 肿瘤干细胞 骨肉瘤 细胞株 MG-63 CD105 省级基金 干细胞图片文章
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miR-373对骨肉瘤细胞增殖、侵袭和迁移的影响 被引量:1
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作者 谭晓谦 梅海波 +4 位作者 刘昆 唐进 伍江雁 朱光辉 叶卫华 《中国医师杂志》 CAS 2020年第1期91-95,共5页
目的检测miR-373在骨肉瘤细胞中表达情况,并探讨其对细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法体外培养人骨肉瘤细胞株SJSA-1及人骨肉瘤细胞hFOB 1.19,将SJSA-1随机分为4组,采用FuGENE®HD转染试剂转染细胞,4组细胞分别为空白对照组(CK组)... 目的检测miR-373在骨肉瘤细胞中表达情况,并探讨其对细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法体外培养人骨肉瘤细胞株SJSA-1及人骨肉瘤细胞hFOB 1.19,将SJSA-1随机分为4组,采用FuGENE®HD转染试剂转染细胞,4组细胞分别为空白对照组(CK组)、阴性对照组(NC组)、miR-373过表达质粒组(miR-373 mimic组)及miR-373抑制质粒组(miR-373 inhibitor组),转染48 h后,qRT-PCR法检测miR-373的相对表达量,CCK-8法检测细胞增殖情况,Transwell法检测细胞侵袭与迁移的情况。结果SJSA-1细胞miR-373相对表达量明显高于hFOB 1.19细胞(P<0.05);与CK组、NC组比较,miR-373 mimic组细胞miR-373相对表达量明显升高(P<0.05),miR-373 inhibitor组细胞miR-373相对表达量明显降低(P<0.05);miR-373 mimic组培养24、36、48 h的OD值均明显高于CK组、NC组(P<0.05),miR-373 inhibitor组培养24、36、48 h的OD值均明显低于CK组、NC组(P<0.05);miR-373 mimic组细胞迁移数目明显多于CK组、NC组(P<0.05),miR-373 inhibitor组细胞迁移数目明显少于CK组、NC组(P<0.05);miR-373 mimic组细胞侵袭数目明显多于CK组、NC组(P<0.05),miR-373 inhibitor组细胞侵袭数目明显少于CK组、NC组(P<0.05)。结论骨肉瘤细胞中miR-373表达上调,miR-373过表达可促进骨肉瘤细胞的增殖、侵袭和迁移,miR-373低表达可抑制骨肉瘤细胞的增殖、侵袭和迁移,有望成为临床骨肉瘤诊断和治疗的重要靶点。 展开更多
关键词 骨肉瘤 细胞系 肿瘤 miR-373 细胞增殖 细胞侵袭 细胞迁移
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同源性骨肉瘤新细胞系Zos和Zos-M的生物学比较研究 被引量:2
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作者 王晋 邹昌业 +3 位作者 沈靖南 黄纲 尹军强 张萌 《中华骨科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期71-78,共8页
目的 对来源于同一患者原发灶和跳跃转移灶的两株新建骨肉瘤细胞系-Zos和Zos-M的特性和生物学行为进行鉴定和比较研究.方法 用组织培养块法从1例骨肉瘤患者原发灶和跳跃转移灶骨肉瘤组织,分离并分别建立两株新的骨肉瘤细胞系-Zos和Zos-M... 目的 对来源于同一患者原发灶和跳跃转移灶的两株新建骨肉瘤细胞系-Zos和Zos-M的特性和生物学行为进行鉴定和比较研究.方法 用组织培养块法从1例骨肉瘤患者原发灶和跳跃转移灶骨肉瘤组织,分离并分别建立两株新的骨肉瘤细胞系-Zos和Zos-M;利用形态学观察、核型和细胞周期分析、生长曲线和倍增时间检测、成骨性标志检测和基质胶侵袭试验对两株细胞系进行体外鉴定.通过皮下、原位移植和实验性转移检测细胞系的体内成瘤和转移能力.应用MTT法检测Zos和Zos-M对传统化疗药物的敏感性;RT-PCR方法检测并比较二者转移相关基因的表达.结果 Zos和Zos-M体外连续培养100代后仍保持稳定,形态学检测、RT-PCR检测碱性磷酸酶、骨钙蛋白和骨桥蛋白等成骨系标志提示均符合骨肉瘤特征.Zos和Zos-M倍增时间分别为33.65 h和31.58 h.核型分析表现为非整倍体和多种染色体结构异常.Zos、Zos-M皮下和原位成瘤率均为100%,Zos-M实验性转移率为37.5%(3/8),Zos无实验性转移(0/8).转移相关基因表达检测表明cadherin-11在Zos-M的低表达可能与其高转移能力相关.并且Zos和Zos-M与传统骨肉瘤细胞系相比,对常用化疗药物的敏感性差.结论 人骨肉瘤细胞系Zos和Zos-M及相关动物模型的建立为治疗骨肉瘤的药物筛选提供新的模型,其具有相同的遗传背景和不同的侵袭转移能力,为骨肉瘤转移的研究提供良好的模型. 展开更多
关键词 骨肉瘤细胞系 生物学行为 RT-PCR方法 同源性 相关动物模型 形态学检测 相关基因表达检测 染色体结构异常
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RNaseH-1抑制端粒酶阴性骨肉瘤并增强放射敏感性 被引量:2
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作者 余笑言 王晴晴 +1 位作者 王渊 周云峰 《中华放射肿瘤学杂志》 CSCD 北大核心 2021年第6期625-630,共6页
目的研究核酸内切酶RNaseH-1对使用端粒的替代延长(ALT)机制来延长端粒的骨肉瘤细胞放射敏感性影响及机制。方法通过慢病毒转染构建过表达RNaseH-1的ALT骨肉瘤细胞U2OS和端粒酶阳性骨肉瘤细胞143B。对转染后的细胞使用CCK8法检测细胞增... 目的研究核酸内切酶RNaseH-1对使用端粒的替代延长(ALT)机制来延长端粒的骨肉瘤细胞放射敏感性影响及机制。方法通过慢病毒转染构建过表达RNaseH-1的ALT骨肉瘤细胞U2OS和端粒酶阳性骨肉瘤细胞143B。对转染后的细胞使用CCK8法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期。克隆形成实验检测放射敏感性,免疫荧光实验检测细胞DNA损伤(γ-H2AX灶点)情况,蛋白印迹法实验检测相关蛋白表达水平。结果过表达RNaseH-1后U2OS细胞的增殖能力显著降低,且细胞周期阻滞于G1期(均P<0.05)。U2OS细胞中RNaseH-1的过表达使ATM和Chk2的磷酸化水平显著升高、同源重组相关蛋白RAD51和BRCA1的表达显著降低,并导致细胞中DNA损伤水平显著上升、细胞放射敏感性增强(均P<0.05)。而过表达RNaseH-1不对端粒酶阳性的143B细胞产生抑制效应(P>0.05)。结论过表达RNaseH-1抑制了端粒酶阴性骨肉瘤细胞并增强了放射敏感性,其机制可能是RNaseH-1在ALT细胞中抑制同源重组修复并激活ATM信号通路。 展开更多
关键词 RNaseH-1基因 骨肉瘤细胞系 端粒的替代延长 放射敏感性
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红景天甙诱导骨肉瘤细胞系凋亡并抑制上皮细胞-间充质转化 被引量:2
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作者 谭雄 陈洁 +3 位作者 毕国善 申昕 戴先鹏 颜红霞 《基础医学与临床》 CSCD 2020年第11期1506-1511,共6页
目的探讨红景天甙(Sal)对骨肉瘤细胞系(HOS、U2OS)增殖、凋亡以及上皮细胞-间充质转化(EMT)的影响。方法体外培养骨肉瘤细胞系HOS以及U2OS细胞,用不同浓度Sal处理细胞24 h后,MTT法和流式细胞计量术分别检测细胞活性以及细胞凋亡水平;Wes... 目的探讨红景天甙(Sal)对骨肉瘤细胞系(HOS、U2OS)增殖、凋亡以及上皮细胞-间充质转化(EMT)的影响。方法体外培养骨肉瘤细胞系HOS以及U2OS细胞,用不同浓度Sal处理细胞24 h后,MTT法和流式细胞计量术分别检测细胞活性以及细胞凋亡水平;Western blot检测细胞凋亡蛋白Bcl-2/Bak以及EMT相关分子E-cadherin、N-cadherin、Slug和Snial的表达水平。随后,通过Transwell小室法以及细胞划痕实验检测Sal对细胞侵袭以及迁移的影响。PI3K/Akt抑制剂处理细胞后,Western blot检测EMT相关分子E-cadherin、N-cadherin、Slug和Snial的变化情况。结果不同浓度Sal均能显著抑制HOS及U2OS细胞的细胞活性,并增加细胞凋亡率,且细胞中Bcl-2表达降低,Bak表达增高。150μmol/L的Sal能够显著降低HOS和U2OS细胞的侵袭率以及迁移水平。Western blot结果显示,150μmol/L Sal处理后,HOS和U2OS细胞中E-cadherin表达上调,N-cadherin、Slug和Snial表达下调。PI3K/Akt抑制剂处理后,E-cadherin表达水平较Sal单独处理的细胞进一步升高,而N-cadherin、Slug和Snial表达则显著下降(P<0.05)。结论Sal能够抑制骨肉瘤细胞系细胞的增殖、侵袭以及迁移,并促进细胞凋亡。同时,还能够通过抑制PI3K/Akt信号通路抑制骨肉瘤细胞系发生EMT。 展开更多
关键词 红景天甙 骨肉瘤细胞系 凋亡 上皮细胞-间充质转化
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三氧化二砷影响人骨肉瘤细胞自噬现象的实验研究 被引量:2
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作者 梁伟民 郭卫 +1 位作者 燕太强 杨荣利 《中国骨与关节杂志》 CAS 2014年第5期356-360,共5页
目的探讨三氧化二砷(AS_O_3)对人骨肉瘤细胞(HOS,MG63)自噬现象的影响。方法用MTr法观察AS_2O_3对HOS、MG63细胞活力的作用;用透射电镜、免疫荧光染色、Western blot检测HOS、MG63细胞基础自噬以及AS_2O_3诱导细胞自噬的情况。结果透射... 目的探讨三氧化二砷(AS_O_3)对人骨肉瘤细胞(HOS,MG63)自噬现象的影响。方法用MTr法观察AS_2O_3对HOS、MG63细胞活力的作用;用透射电镜、免疫荧光染色、Western blot检测HOS、MG63细胞基础自噬以及AS_2O_3诱导细胞自噬的情况。结果透射电镜、免疫荧光染色、Western blot结果显示MG63基础自噬水平明显高于HOS(P<0.01);AS_2O_3抑制MC63细胞活力的IC_(50)值15.42μmol/L明显大于AS_2O_3抑制HOS细胞的活力的IC_(50)值1.067μmol/L,多耐药株MG63较HOS对AS_2O_3耐药;检测LC3-Ⅱ及PARP蛋白的表达水平发现,随着HOS自噬水平的增加,HOS的凋亡逐渐增加,而AS_2O_3通过促进MG63的保护性自噬延缓了凋亡的发生。结论 AS_2O_3可引起骨肉瘤细胞自噬,对不同的骨肉瘤细胞自噬的影响各不相同。对于化疗耐药的骨肉瘤细胞MG63,AS_2O_3诱导的自噬是保护性自噬,自噬延缓了凋亡的发生;而对于化疗敏感的HOS细胞,AS_2O_3诱导的自噬促进了凋亡的发生。 展开更多
关键词 自噬 骨肉瘤 细胞系 肿瘤 三氧化二砷 ARSENIC TRIOXIDE ( AS2O3 )
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