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酶法合成核苷类抗病毒药物 被引量:23
1
作者 邱蔚然 丁庆豹 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第10期474-479,共6页
综述了近几年酶法合成核苷类抗病毒药物的研究进展,主要包括核苷磷酸化酶、N-脱氧核糖转移酶的应用,以及应用一些酶进行糖或碱基的修饰等方面。
关键词 核苷磷酸化酶 抗病毒药 合成 酶法
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核苷类药物的酶法合成 被引量:18
2
作者 张绍谭 倪孟祥 阮期平 《药学进展》 CAS 2005年第2期56-62,共7页
综述了酶法合成核苷类药物的最新研究进展 ,内容包括酶法合成核苷类药物的优点 ,利用含核苷磷酸化酶的菌体一步合成核苷类药物或药物前体 ,利用中间体进行转化制备和通过基因工程菌转化制备 ,并指出工业化应用过程中几个需要解决的关键... 综述了酶法合成核苷类药物的最新研究进展 ,内容包括酶法合成核苷类药物的优点 ,利用含核苷磷酸化酶的菌体一步合成核苷类药物或药物前体 ,利用中间体进行转化制备和通过基因工程菌转化制备 ,并指出工业化应用过程中几个需要解决的关键步骤。 展开更多
关键词 核苷类药物 酶法合成 核苷磷酸化酶 微生物转化
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核苷类药物酶法合成研究进展 被引量:14
3
作者 樊华伟 傅绍军 +1 位作者 邵志宇 朱利民 《生物技术通讯》 CAS 2005年第6期690-692,共3页
由于核苷类似物具有很高的抗病毒活性,因为而已成为医药工作者研究的重点。运用酶法合成核苷类似物,已经显示了巨大的优势。本文综述了酶法合成核苷类似物的产生菌种和酶系,以及它们的催化机理,并罗列了已经用于生产或较有使用价值的菌种。
关键词 酶催化 抗病毒药物 核苷磷酸化酶 N-脱氧转移酶
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核苷磷酸化酶的产酶条件优化的研究 被引量:9
4
作者 闫蓬勃 邱蔚然 丁庆豹 《药物生物技术》 CAS CSCD 2001年第2期83-85,共3页
以鸟苷和 5 氟尿嘧啶为底物 ,乙酰短杆菌菌体为酶源酶法合成 5 氟尿苷。采用酵母浸膏培养基(酵母浸膏 4.0 % ,葡萄糖 0 .4% ,NaCl 0 .3 % ,pH7.0 ) ,较高的溶氧量 ,同时添加 0 .6 %的豆油 ,培养 12h ,产酶量可提高 30 %。
关键词 乙酰短杆菌 核苷磷酸化酶 5-氟尿苷 产酶条件
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应用乙酰短杆菌酶法合成2’-脱氧腺苷 被引量:9
5
作者 洪云海 丁庆豹 +1 位作者 欧伶 邱蔚然 《工业微生物》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期30-33,共4页
胸苷和腺嘌呤在乙酰短杆菌作用下转化成胸腺嘧啶和目标产物2’-脱氧腺苷。50mL的三角瓶装液10mL,40mmol/L的底物,50mmol/L的磷酸盐缓冲液(pH7)进行反应,5%游离乙酰短杆菌在55℃下,经1h转化率就可达到65.6%。
关键词 核苷磷酸化酶 乙酰短杆菌 2’-脱氧腺苷 酶法合成
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抗真菌药萘替芬的合成 被引量:8
6
作者 左淑芳 杨凤艳 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期8-9,共2页
抗真菌药萘替芬的合成SYNTHESISOFANTIMYCOTICAGENTNAFTIFINE左淑芳*杨凤艳(河北省药物研究所,石家庄050061)ZUOShu-Fang*,YANGFeng-Yan(HebeiPhar... 抗真菌药萘替芬的合成SYNTHESISOFANTIMYCOTICAGENTNAFTIFINE左淑芳*杨凤艳(河北省药物研究所,石家庄050061)ZUOShu-Fang*,YANGFeng-Yan(HebeiPharmaceuticalInstitu... 展开更多
关键词 萘替芬 抗真菌药 合成
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应用大肠杆菌的核苷磷酸化酶合成胸苷 被引量:10
7
作者 沈荣坤 邱蔚然 孙南翔 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1996年第6期701-706,共6页
通过大肠杆菌(E.coli)核苷磷酸化酶的转脱氧核糖基作用,从胸腺嘧啶和2'-脱氧核苷合成胸苷。优化了以dU为底物合成胸苷的反应条件。以30mmol/L dU为底物其合成胸苷的转化率可达55.3%;以dA、dC、dU... 通过大肠杆菌(E.coli)核苷磷酸化酶的转脱氧核糖基作用,从胸腺嘧啶和2'-脱氧核苷合成胸苷。优化了以dU为底物合成胸苷的反应条件。以30mmol/L dU为底物其合成胸苷的转化率可达55.3%;以dA、dC、dU、dG的混合物为底物转化率为52.6%;以DNA降解后的2'-脱氧核苷混合液作底物,反应液中胸苷浓度从9.2mmol/L提高到17.9mmol/L。 展开更多
关键词 胸苷 胸腺嘧啶核苷 大肠杆菌 核苷磷酸化酶 酶法
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产气肠杆菌突变株EAM-Z1的培养和核苷磷酸化酶活力的研究 被引量:5
8
作者 周长林 阮期平 +1 位作者 居姝 吴梧桐 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期181-183,共3页
目的 :大规模培养具有高活力核苷磷酸化酶的产气肠杆菌突变株 (E .aerogenesEAM Z1) ,利用静息细胞酶法合成抗肿瘤核苷药物中间体 5 氟尿苷 (FUR)。方法 :补料分批培养产气肠杆菌 ,发酵过程流加葡萄糖、控制发酵液的pH和pO2 ,摇瓶培养... 目的 :大规模培养具有高活力核苷磷酸化酶的产气肠杆菌突变株 (E .aerogenesEAM Z1) ,利用静息细胞酶法合成抗肿瘤核苷药物中间体 5 氟尿苷 (FUR)。方法 :补料分批培养产气肠杆菌 ,发酵过程流加葡萄糖、控制发酵液的pH和pO2 ,摇瓶培养基中加入底物胞苷诱导核苷磷酸化酶 ,通过酶法合成FUR时菌体对底物尿苷的转化率来研究菌体的核苷磷酸化酶活力。结果 :葡萄糖既可满足产气肠杆菌碳源的需要 ,又能维持培养液的pH ,培养 2 4h发酵液菌体湿重为 19 1g/L ,以尿苷 (UR)和 5 氟尿嘧啶 (FU)为底物 ,产气肠杆菌游离湿菌体对UR的酶转化率为 5 6 7% ;摇瓶培养基中加入 3 0g/L胞苷诱导核苷磷酸化酶 ,静息细胞的酶转化率提高了10 2 % ;酶反应间隙流加底物UR浓度达 30mmol/L时 ,产物FUR的浓度最高 ,进一步增加底物浓度则抑制产物的合成。结论 :通过大规模培养可获得产高活力核苷磷酸化酶的产气肠杆菌 ,其静息细胞可用于抗肿瘤核苷药物中间体FUR的制备。 展开更多
关键词 产气肠杆菌 培养 核苷磷酸化酶 微生物转化
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埃希菌全细胞转化阿糖尿苷合成阿糖腺苷 被引量:7
9
作者 刘国生 邢善涛 +2 位作者 王建琨 王秀强 赵更峰 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期416-419,共4页
利用选择培养基从土壤中筛选到具有高核苷磷酸化酶活性的AEM0812菌株,通过16Sr DNA鉴定,初步确定为埃希菌(Escherichia sp.)。该菌株的最适生长温度与产酶温度均为37℃,最适产酶pH为7.5~8.0,通气培养最佳产酶的发酵时间为8~9h。利用... 利用选择培养基从土壤中筛选到具有高核苷磷酸化酶活性的AEM0812菌株,通过16Sr DNA鉴定,初步确定为埃希菌(Escherichia sp.)。该菌株的最适生长温度与产酶温度均为37℃,最适产酶pH为7.5~8.0,通气培养最佳产酶的发酵时间为8~9h。利用该菌全细胞建立了以阿糖尿苷为底物酶促合成阿糖腺苷的反应体系,成功得到阿糖腺苷。优化反应条件,并进行了100L放大试验,结果阿糖尿苷转化率为78.17%,反应液中阿糖腺苷浓度为9.38g/L。 展开更多
关键词 阿糖腺苷 阿糖尿苷 生物合成 核苷磷酸化酶 埃希菌
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核苷合成技术的研究进展 被引量:5
10
作者 徐渊 王鸿 +3 位作者 易喻 梅建凤 陈建澍 应国清 《化工生产与技术》 CAS 2009年第2期32-34,39,共4页
介绍了核苷的类别、用途。叙述了核苷合成技术进展,重点为酶法生物合成法;评述了各种方法的优缺点。认为微生物酶(细胞)合成核苷的前景乐观,该法反应简单、污染小、成本低。但合成核苷时要注意保持菌体的高活力和稳定性,并解决合成产物... 介绍了核苷的类别、用途。叙述了核苷合成技术进展,重点为酶法生物合成法;评述了各种方法的优缺点。认为微生物酶(细胞)合成核苷的前景乐观,该法反应简单、污染小、成本低。但合成核苷时要注意保持菌体的高活力和稳定性,并解决合成产物的分离纯化问题。 展开更多
关键词 核苷 合成 酶法 核苷磷酸化酶 N-核糖转移酶
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化学-酶法合成胸苷的研究 被引量:5
11
作者 梅建凤 罗丽琴 +2 位作者 王鸿 钱捷 应国清 《浙江工业大学学报》 CAS 2014年第2期172-177,共6页
核苷及其衍生物在抗肿瘤、抗病毒方面具有广泛应用,如何高效绿色合成核苷一直是研究的重点.现以1-氯-2-脱氧-3’,5’-二-O-对氯苯甲酰基-D-核糖(化合物Ⅰ)为起始原料,采用结晶诱导不对称转化技术合成中间体2-脱氧-α-D-核糖-1-磷酸二环... 核苷及其衍生物在抗肿瘤、抗病毒方面具有广泛应用,如何高效绿色合成核苷一直是研究的重点.现以1-氯-2-脱氧-3’,5’-二-O-对氯苯甲酰基-D-核糖(化合物Ⅰ)为起始原料,采用结晶诱导不对称转化技术合成中间体2-脱氧-α-D-核糖-1-磷酸二环己胺盐(化合物Ⅲ),然后以化合物Ⅲ和胸腺嘧啶作为底物,利用大肠杆菌(Escherichia coli)核苷磷酸化酶的催化作用合成胸苷.结果显示:化学法合成化合物Ⅲ获得较高的收率,可达到84.9%,纯度为94.7%;最佳生物酶催化反应条件:底物浓度为化合物Ⅲ100mmol/L,胸腺嘧啶400mmol/L;菌体量为80g/L;缓冲液pH 8,反应温度55℃,反应时间4h,转化率达到61.8%.最后,采用柱层析法分离得到胸苷,收率和纯度分别为49.7%和95.3%.该方法具有高选择、高效性及少污染的优点. 展开更多
关键词 胸苷 化学-酶法合成 结晶诱导不对称转化 核苷磷酸化酶
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酶法合成5-氟尿苷 被引量:3
12
作者 雷霆 周长林 +1 位作者 窦洁 吴梧桐 《药物生物技术》 CAS CSCD 2000年第2期102-105,共4页
采用产气肠杆菌 (Enterobacteraerogenes)CPU 785 6变异株的游离细胞 ,利用其中的嘧啶核苷磷酸化酶 (UridinePhosphorylase)通过碱基交换进行酶法合成目的物。试验以 30mmol/L尿苷 (UR) ,30mmol/L 5 氟尿嘧啶 (FU) ,30mmol/L磷酸盐缓冲... 采用产气肠杆菌 (Enterobacteraerogenes)CPU 785 6变异株的游离细胞 ,利用其中的嘧啶核苷磷酸化酶 (UridinePhosphorylase)通过碱基交换进行酶法合成目的物。试验以 30mmol/L尿苷 (UR) ,30mmol/L 5 氟尿嘧啶 (FU) ,30mmol/L磷酸盐缓冲液 (pH7 8)的混合物加入 10 %的产气肠杆菌湿菌体反应 3h ,底物UR的转化率可达 5 0 %。 展开更多
关键词 S-氟尿苷 酶活合成 嘧啶核苷磷酸化酶
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乙酰短杆菌酶法合成2′-脱氧鸟苷 被引量:3
13
作者 李喻 窦洁 +2 位作者 曹静 邱蔚然 周长林 《药物生物技术》 CAS CSCD 2011年第2期119-123,共5页
胸苷和鸟苷酸在乙酰短杆菌的核苷磷酸化酶和磷酸单酯酶作用下转化成鸟嘌呤、胸腺嘧啶、鸟苷和产物2′-脱氧鸟苷。通过考察菌体量、反应温度、反应pH值、底物浓度和磷酸盐浓度等参数,得到反应最适条件为20 mmol/L的胸苷和鸟苷酸,30 mmol/... 胸苷和鸟苷酸在乙酰短杆菌的核苷磷酸化酶和磷酸单酯酶作用下转化成鸟嘌呤、胸腺嘧啶、鸟苷和产物2′-脱氧鸟苷。通过考察菌体量、反应温度、反应pH值、底物浓度和磷酸盐浓度等参数,得到反应最适条件为20 mmol/L的胸苷和鸟苷酸,30 mmol/L的磷酸盐缓冲液(pH7.0),5%游离乙酰短杆菌在60℃下进行反应,经6 h胸苷转化率就可达到最高为56.4%。反应液通过离子交换的方法进行分离,可以得到纯度90.2%的2′-脱氧鸟苷。 展开更多
关键词 核苷磷酸化酶 乙酰短杆菌 2′-脱氧鸟苷 酶法合成
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酶法合成三氮唑核苷新工艺的研究 被引量:3
14
作者 邱蔚然 唐洁宇 +1 位作者 董志雄 唐孝宣 《上海化工》 CAS 1997年第3期1-6,共6页
本文报道经过低温、培养基条件诱导选育所得的乙酰短杆菌TQ952菌株,在8L和100L发酵罐培养以及该菌体在酶反应过程的优化试验。以100mmol/L鸟苷和三氮唑甲酰胺为底物,利用TQ952菌体的核苷磷酸化酶催化反应,其三氮唑核苷平均转化率86%,最... 本文报道经过低温、培养基条件诱导选育所得的乙酰短杆菌TQ952菌株,在8L和100L发酵罐培养以及该菌体在酶反应过程的优化试验。以100mmol/L鸟苷和三氮唑甲酰胺为底物,利用TQ952菌体的核苷磷酸化酶催化反应,其三氮唑核苷平均转化率86%,最高95%。 展开更多
关键词 氮唑核苷 核苷磷酸化酶 乙酰短杆菌
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基因工程菌发酵表达核苷磷酸化酶条件的优化 被引量:2
15
作者 黄炯威 莫世艺 +2 位作者 刘宁 梁剑锋 刘桂祯 《中国药业》 CAS 2014年第7期22-24,共3页
目的 优化苷磷酸化酶(包括嘌呤和嘧啶核苷磷酸化酶)基因工程菌的发酵表达条件。方法通过工程菌摇瓶培养,测定吸光度D值,考马斯亮蓝(Bradford)法测定蛋白,SDS—PAGE电泳和凝胶成像扫描分析表达量,优化表达条件;通过正交试验优化... 目的 优化苷磷酸化酶(包括嘌呤和嘧啶核苷磷酸化酶)基因工程菌的发酵表达条件。方法通过工程菌摇瓶培养,测定吸光度D值,考马斯亮蓝(Bradford)法测定蛋白,SDS—PAGE电泳和凝胶成像扫描分析表达量,优化表达条件;通过正交试验优化50L发酵罐发酵条件。结果摇瓶培养起始pH为7.0~7.2,于30℃培养4h,加入终浓度为0.4mmol/L的异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导8h后收获菌体,可得到较高的生物量和重组酶蛋白表达量。50L发酵罐的最佳条件为起始pH为7.0~7.2,于32oC培养4h,加入终浓度为0.4mm01/L的IPTG诱导9h后收获菌体,每升发酵液可得2g以上的酶蛋白。结论基因工程菌发酵表达核苷磷酸化酶产量较高,可工业化生产.为酶法合成核苷酸类似物的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 核苷磷酸化酶 基因工程菌 发酵 优化
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产气肠杆菌菌体内核苷磷酸化酶的诱导表达 被引量:1
16
作者 魏晓琨 刘岩岩 +2 位作者 周丽娜 丁庆豹 王昌禄 《现代生物医学进展》 CAS 2008年第2期255-258,279,共5页
目的:阿糖腺苷(Ara-A)是一种广谱抗病毒药物,临床上用于治疗多种病毒性疾病,同时也是合成阿糖腺苷单磷酸(Ara-AMP)的重要原料、本课题旨在寻找一种高效酶法生产嘌呤类阿糖核苷的方法。方法:以产气肠杆菌完整细胞为酶源,研究产气肠杆菌... 目的:阿糖腺苷(Ara-A)是一种广谱抗病毒药物,临床上用于治疗多种病毒性疾病,同时也是合成阿糖腺苷单磷酸(Ara-AMP)的重要原料、本课题旨在寻找一种高效酶法生产嘌呤类阿糖核苷的方法。方法:以产气肠杆菌完整细胞为酶源,研究产气肠杆菌菌体培养条件对核苷磷酸化酶的影响及其诱导性。结果:胸苷磷酸化酶、尿苷磷酸化酶和嘌呤核苷磷酸化酶均可被多种核苷、核苷酸甚至碱基诱导。胞苷或胞苷酸的添加量为15-20mmol/L,诱导时间在0-8小时均可。经胞苷和胞苷酸诱导的菌体可使酶反应时间缩短6倍,大大提高了反应效率。经诱导的菌体,在反应后仍保持较高的核苷磷酸化酶活力:而未经诱导的菌体,一次反应后即丧失大量的酶活力。结论:核苷磷酸化酶的活性可以通过诱导而提高,以此优化阿糖腺苷的生产。 展开更多
关键词 产气肠杆菌 核苷磷酸化酶 诱导 阿糖腺苷
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固定化核苷磷酸化酶的制备及其性质研究
17
作者 黄炯威 刘宁 +2 位作者 劳伟明 周华润 刘桂祯 《中国药业》 CAS 2015年第20期32-34,共3页
目的优化核苷磷酸化酶的固定化工艺,并对固定化酶的性质进行研究。方法通过正交试验优化核苷磷酸化酶(包括嘌呤和嘧啶核苷磷酸化酶)固定化条件,并进一步对固定化核苷磷酸化酶的最适p H、温度及其稳定性进行研究。结果固定化酶条件为p H=... 目的优化核苷磷酸化酶的固定化工艺,并对固定化酶的性质进行研究。方法通过正交试验优化核苷磷酸化酶(包括嘌呤和嘧啶核苷磷酸化酶)固定化条件,并进一步对固定化核苷磷酸化酶的最适p H、温度及其稳定性进行研究。结果固定化酶条件为p H=8.0,温度为25℃,蛋白载量为20 mg/g载体,固定化时间为6 h;固定化核苷磷酸化酶的最适p H=7.5,最适温度为40℃,固酶连续使用20批次酶活力无明显损失。结论固定化核苷磷酸化酶稳定可靠,适合应用于工业化生产。 展开更多
关键词 核苷磷酸化酶 固定化 制备
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拟南芥核苷磷酸化酶基因的组织表达及其T-DNA插入突变体鉴定
18
作者 徐文晶 程玉祥 《贵州农业科学》 CAS 2015年第1期16-19,共4页
为探明植物核苷磷酸化酶家族基因信息及生理功能,采用PCR扩增的方法,研究了模式植物拟南芥核苷磷酸化酶家族基因在不同组织中的表达,并对其核苷磷酸化酶基因T-DNA插入突变体进行鉴定。结果表明:At4g24340和At4g28940基因在根组织中大量... 为探明植物核苷磷酸化酶家族基因信息及生理功能,采用PCR扩增的方法,研究了模式植物拟南芥核苷磷酸化酶家族基因在不同组织中的表达,并对其核苷磷酸化酶基因T-DNA插入突变体进行鉴定。结果表明:At4g24340和At4g28940基因在根组织中大量转录表达,其他组织均微量检测到转录表达;At4g24350在各个组织中均有少量转录表达;经T-DNA插入结合转录表达鉴定,At4g28940和At4g24350基因为敲除突变体。 展开更多
关键词 拟南芥 核苷磷酸化酶 突变体
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酶法合成2'-脱氧-5-氟尿苷的研究
19
作者 易喻 江林林 +3 位作者 梅建凤 陈建澍 王鸿 应国清 《药物生物技术》 CAS 2015年第1期9-13,共5页
以化学合成的2-脱氧核糖-1-磷酸二环己胺盐和5-氟尿嘧啶为底物,在芽孢杆菌核苷磷酸化酶的作用下合成产物2'-脱氧-5-氟尿苷。考察了诱导剂种类及浓度对菌体核苷磷酸化酶活力的影响,同时又考察了底物比例、底物浓度、菌体量、反应温... 以化学合成的2-脱氧核糖-1-磷酸二环己胺盐和5-氟尿嘧啶为底物,在芽孢杆菌核苷磷酸化酶的作用下合成产物2'-脱氧-5-氟尿苷。考察了诱导剂种类及浓度对菌体核苷磷酸化酶活力的影响,同时又考察了底物比例、底物浓度、菌体量、反应温度、缓冲液浓度及p H值等参数,得到最佳的条件为核糖浓度35 mmol/L,5-氟尿嘧啶为105 mmol/L,磷酸钾缓冲液45 mmol/L(p H 8.0),游离芽孢杆菌12%(湿重)在55℃下反应3 h,转化率可达79.36%,产量可达6.83 g/L。采用该法合成2'-脱氧-5-氟尿苷,反应条件温和,同时能够一定程度地解决酶法合成脱氧核苷中脱氧核糖供体来源少、价格高的问题,具有一定的工业化价值。 展开更多
关键词 2’-脱氧-5-氟尿苷 核苷磷酸化酶 酶法合成 2-脱氧-α-D-核糖-1-磷酸二环己胺盐 5-氟尿
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乙酰短杆菌中核苷磷酸化酶的性质研究
20
作者 张春艳 许彦梅 +2 位作者 王玥 丁庆豹 欧伶 《现代生物医学进展》 CAS 2013年第23期4419-4423,共5页
以乙酰短杆菌完整细胞为酶源,研究不同条件下核苷磷酸化酶的性质。方法:将乙酰短杆菌湿菌体置于不同保藏温度及在不同种类缓冲溶液中考察其稳定性;在有或无核保护下核苷磷酸化酶对热的稳定性;并设计核苷的磷酸解反应或合成反应,测定核... 以乙酰短杆菌完整细胞为酶源,研究不同条件下核苷磷酸化酶的性质。方法:将乙酰短杆菌湿菌体置于不同保藏温度及在不同种类缓冲溶液中考察其稳定性;在有或无核保护下核苷磷酸化酶对热的稳定性;并设计核苷的磷酸解反应或合成反应,测定核苷磷酸化酶的活力及酶促反应的表观米氏常数。结果:乙酰短杆菌中的核苷磷酸化酶经低温保藏可以保持较长时间的稳定性;菌体在60℃处理1小时即失去核苷磷酸化酶的活力,但是添加胸腺嘧啶有明显的保护作用;菌体中核苷磷酸化酶的合成能力明显大于磷酸解能力;对尿苷和5-甲基尿苷的表观米氏常数和最大反应速率分别为16.7、11.4 mmol/L,0.0063、0.0041 mmol/L.min。结论:含核苷磷酸化酶的乙酰短杆菌完整细胞作为酶源,在低温下可以长时间保藏,反应中的碱基对核苷磷酸化酶的抗热性有益,该菌种可以作为工业上核苷磷酸化酶的来源。 展开更多
关键词 核苷磷酸化酶 乙酰短杆菌 酶学性质 5-甲基尿苷 尿苷
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