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基于BSA-Seq的家蚕NC99R抗BmNPV分子标记鉴定
1
作者 唐亮 蒋满贵 +5 位作者 唐名艳 黄深惠 陈小青 董桂清 王平阳 潘志新 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期2406-2414,共9页
【目的】以BSA-Seq测序分析确定抗家蚕血液型脓病品种桂蚕N2抗性亲本NC99R的抗性SNP标记及抗性基因,为NC99R抗性基因鉴定打下基础,也为家蚕抗血液型脓病分子标记辅助育种提供标记资源。【方法】以抗病品种NC99R、感病品种芙蓉为亲本制... 【目的】以BSA-Seq测序分析确定抗家蚕血液型脓病品种桂蚕N2抗性亲本NC99R的抗性SNP标记及抗性基因,为NC99R抗性基因鉴定打下基础,也为家蚕抗血液型脓病分子标记辅助育种提供标记资源。【方法】以抗病品种NC99R、感病品种芙蓉为亲本制备杂交F1、F2代及BC1遗传群体,通过添食核型多角体病毒(BmNPV)分析其遗传规律;在NC99R近等位基因系NC99R-NIL和芙蓉制备杂交的F2代群体中,设病毒浓度差异达4000倍的高浓度和低浓度添食组,在高浓度添食组挑选未发病个体用于构建极端抗性素材DNA混合池,在低浓度添食组挑选具有典型发病症状个体构建极端易感素材DNA混合池,利用二代测序技术完成抗性DNA混合池、易感DNA混合池及2个亲本基因组测序,并通过群体分离分析法(BSA)定位抗性连锁关联区域。【结果】NC99R对BmNPV表现出稳定的高抗性,基因组中携带有抗BmNPV基因,且由显著的抗性主效基因或紧密连锁基因共同调控。对极端抗性DNA混合池、极端易感DNA混合池及其亲本DNA进行全基因组测序分析,共获得19276670个SNP位点和4789615个InDel位点;基于ΔSNPindex的LOESS回归拟合分析,定位到2个与血液型脓病抗性关联的区域,分别为Chr.25:150-11069kb和Chr.27:8700-11009kb。同时将ΔSNP-index设定为≥0.8时,鉴定到3865个与抗性显著相关的SNP标记,其中,在25号染色体关联区域筛选出78个SNP标记,在27号染色体关联区域筛选出2694个SNP标记;再经氨基酸水平非同义突变筛查,定位到25号染色体Zinc carboxypeptidase基因和27号染色体Facilitated trehalose transporter Tret1基因。【结论】利用BSA-Seq在抗家蚕血液型脓病品种NC99R中发现与抗性相关的SNP标记资源有3865个,且初步鉴定到2个与抗BmNPV的相关基因(25号染色体Zinc carboxypeptidase基因和27号染色体Facilitated trehalose transporter Tret1基因),为家蚕抗血液型脓病分子标记辅助育种提供了标� 展开更多
关键词 家蚕 NC99R 核型多角体病毒(bmnpv) 抗性分子标记 BSA-Seq
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家蚕核型多角体病毒基因polh的诱变分析
2
作者 曹阳华 肖巧学 +3 位作者 黄亚东 葛慈斌 黄自然 刘良式 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2000年第11期972-981,1036,共10页
曾报道经化学诱变剂ＭＭＣ、９－ＡＡ和ＥＭＳ诱变的家蚕核型多角体病毒（ＢｍＮＰＶ）多角体 形态出现异常，继代分离的诱变 ＢｍＮＰＶ基因组对 ＥｃｏＲＩ、 ＢｇｌⅡ和 ＢａｍＨＩ的酶切谱发生变 化。研究进一步揭示，诱变ＢｍＮＰ... 曾报道经化学诱变剂ＭＭＣ、９－ＡＡ和ＥＭＳ诱变的家蚕核型多角体病毒（ＢｍＮＰＶ）多角体 形态出现异常，继代分离的诱变 ＢｍＮＰＶ基因组对 ＥｃｏＲＩ、 ＢｇｌⅡ和 ＢａｍＨＩ的酶切谱发生变 化。研究进一步揭示，诱变ＢｍＮＰＶ的多角体外层蛋白晶格排列呈现紊乱；多角体蛋白的 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳港与对照组比较有显著差异；对多角体蛋白基因ｐｏｌｈ的测序结果显示，３组诱 变ＢｍＮＰＶ的ｐｏｌｈ基因发生了多处碱基（氨基酸）替代的点突变，进而从分子水平上证实了诱 变剂对ＢｍＮＰＶ的致突变作用。诱变的ＢｍＮＰＶ ｐｏｌｈ基因点突变是否与多角体形态异常有 关，尚无法确认。 展开更多
关键词 家蚕 核型多角体病毒 诱变 polh基因 多角体形态
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家蚕核型多角体病毒egt基因的结构和功能分析 被引量：5
3
作者 季平 何家禄 +1 位作者 吕鸿声 吴祥甫 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期54-58,共5页
以苜宿银纹夜蛾核型多角体病毒 (AcMNPV)的egt基因作探针 ,从家蚕核型多角体病毒镇江株 (BmNPVZJ- 8)基因组中克隆了egt基因及其旁侧序列 ,作了该片段的酶切图谱 ;测定了BmNPVZJ - 8egt基因序列。与AcMNPV的egt基因相比同源性为 95 % ;... 以苜宿银纹夜蛾核型多角体病毒 (AcMNPV)的egt基因作探针 ,从家蚕核型多角体病毒镇江株 (BmNPVZJ- 8)基因组中克隆了egt基因及其旁侧序列 ,作了该片段的酶切图谱 ;测定了BmNPVZJ - 8egt基因序列。与AcMNPV的egt基因相比同源性为 95 % ;基因大小都为 15 18bp。利用egt基因旁侧序列构建了转移载体pUDegt,以绿色荧光蛋白基因 (EGFP)作报告基因取代egt基因 ,构建了由EGFP取代egt基因的重组病毒BmDegt。将含egt基因的BmNPV和不含egt基因的重组病毒BmDegt分别注射感染四龄家蚕幼虫 ,发现BmDegt感染的家蚕个体生长速度缓慢 ,家蚕个体小 。 展开更多
关键词 家蚕核型多角体病毒 EGT 缺失病毒 杀虫效率
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广西地区家蚕品种资源对BmNPV抵抗性的初步调查 被引量：9
4
作者 陆瑞好 石美宁 +2 位作者 闭立辉 顾家栋 黄君霆 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期117-120,共4页
以广西地区现有的84个家蚕品种品系为材料,于2龄起蚕经口接种BmNPV,调查不同品种品系对BmN-PV经口感染的抵抗性。结果表明:不同蚕品种间对BmNPV经口感染的抵抗性存在显著差异,供试品种中7532(B)的发病率最低,为21.46%;Z6、中黄4、9497... 以广西地区现有的84个家蚕品种品系为材料,于2龄起蚕经口接种BmNPV,调查不同品种品系对BmN-PV经口感染的抵抗性。结果表明:不同蚕品种间对BmNPV经口感染的抵抗性存在显著差异,供试品种中7532(B)的发病率最低,为21.46%;Z6、中黄4、9497等品种的发病率高达100%;发病率55%以下的品种中绝大多数为日系品种;同一品种不同品系间的抵抗性也有一定的差异。研究结果可为进一步选育抗性品种提供依据。 展开更多
关键词 家蚕品种 家蚕核型多角体病毒 抵抗性
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融合gp67信号肽的慈菇蛋白酶抑制剂基因在蚕体内表达 被引量：3
5
作者 季平 肖庆利 +2 位作者 何家禄 吕鸿声 吴祥甫 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期310-314,共5页
用ＡｃＭＮＰＶ的ｇｐ６７信号肽与慈菇蛋白酶抑制剂基因（ＡＰＩ２）融合，并整合到昆虫病毒表达载体ＢｍＢａｃＰＡＫ６中，受多角体蛋白基因启动子控制。慈菇蛋白酶抑制剂在蚕体内成功地得到了高效表达。比较了ｇｐ６７信号肽和慈... 用ＡｃＭＮＰＶ的ｇｐ６７信号肽与慈菇蛋白酶抑制剂基因（ＡＰＩ２）融合，并整合到昆虫病毒表达载体ＢｍＢａｃＰＡＫ６中，受多角体蛋白基因启动子控制。慈菇蛋白酶抑制剂在蚕体内成功地得到了高效表达。比较了ｇｐ６７信号肽和慈菇蛋白酶抑制剂信号肽在昆虫表达系统中对表达产物的影响，发现表达产物都能分泌到血淋巴中，表达量很相似，但这两种信号肽在表达过程中都没有被切除，且不同信号肽对表达产物的生物活性有很大影响。 展开更多
关键词 家蚕 核型多角体病毒 蛋白酶抑制剂 信号肽
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家蚕核型多角体病毒的PCR检测及其部分序列分析 被引量：6
6
作者 刘吉平 王永宾 +1 位作者 魏建影 辛锦兰 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期664-669,共6页
为研究应用PCR技术进行家蚕核型多角体病毒广东株的敏感性检验以及探讨不同地理株系的基因水平的相互关系,本文通过对家蚕核型多角体病毒BmNPV广东株的人工繁殖与纯化,引用了一对根据多角体蛋白基因设计的引物phy35/phy36,对BmNPV的基... 为研究应用PCR技术进行家蚕核型多角体病毒广东株的敏感性检验以及探讨不同地理株系的基因水平的相互关系,本文通过对家蚕核型多角体病毒BmNPV广东株的人工繁殖与纯化,引用了一对根据多角体蛋白基因设计的引物phy35/phy36,对BmNPV的基因组模板DNA进行了PCR扩增,并对其产物进行测序分析。结果显示,PCR技术均可扩增检测出3×108个/mL至3×102个/mL不同浓度的BmNPV模板DNA,特异目标片段大小约为680bp,且扩增带的亮度随着病毒液浓度的降低而减弱,说明应用引物phy35/phy36进行PCR方法可以有效地应用于检测BmNPV病毒感染的家蚕。同时,测序获得了BmNPV广东株多角体蛋白polyhedrin基因674bp大小的片段,GC含量为46.4%。经过BLAST比对分析,与BmNPV泰国株的相似性为99%,暗示家蚕BmNPV广东株与泰国株的BmNPV(登录号AY779044)亲缘关系非常相近,两者可能属于BmNPV的不同地理株系。通过系统发育树的进一步分析发现,家蚕核型多角体病毒广东株polyhedrin基因部分序列与家蚕NPV分离株S9多角体蛋白基因(DQ231336)关系很近。 展开更多
关键词 家蚕 bmnpv基因组 polyhedrin基因 PCR
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抗家蚕核多角体病毒(BmNPV)即刻早期蛋白基因的三联核酶的设计和性质 被引量：3
7
作者 张晓岚 陈农安 +1 位作者 祁国荣 陆长德 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第4期374-380,共7页
以ＢｍＮＰＶＩＥ基因为靶序列，通过计算机设计了３个切割靶序列不同位点的锤头状核酶（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ）（Ｒ４７、Ｒ２０８和Ｒ６８７）。为了提高核酶的切割效率，把３个核酶串联在一起形成三联的核酶（Ｒ４２６）。为使单个核酶... 以ＢｍＮＰＶＩＥ基因为靶序列，通过计算机设计了３个切割靶序列不同位点的锤头状核酶（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ）（Ｒ４７、Ｒ２０８和Ｒ６８７）。为了提高核酶的切割效率，把３个核酶串联在一起形成三联的核酶（Ｒ４２６）。为使单个核酶之间不相互干扰，改变了茎区Ⅱ的碱基序列。核酸二级结构计算机模拟显示，这种改变非常成功。为了减少长的侧翼序列对Ｒ４２６的影响，将Ｒ４２６基因光隆到ｐＲＧ５２３质粒的ｃｉｓ－核酶之间，限制性内切酶线性化后，用Ｔ７ＲＮＡ聚合酶进行体外转录，得到具有短的侧翼序列的Ｒ４２６分子。转录和切割实验表明，Ｒ４２６两侧的ｃｉｓ－核酶的切割效率非常高，释放出的Ｒ４２６能够特异地切割转录和合成的靶序列。说明我们设计的三种核酶的“催化中心”能使３个单价核酶不相互干扰，各自独立发挥切割作用，也不影响其两端的ｃｉｓ－核酶的切割活性。这与实验设计的预期结果完全一致。 展开更多
关键词 家蚕 核多角体病毒 三联核酶 即刻早期蛋白 基因
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家蚕BmVNCP基因表达与BmNPV感染增殖相关性的鉴定分析 被引量：1
8
作者 邵露璐 何小柏 +6 位作者 高娟 宋秋云 张业顺 方瑷 武康晖 王学杨 张国政 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期293-301,共9页
为解析家蚕AN品系高抗BmNPV的分子机制,采用家蚕抗性品系AN与易感品种C108杂交及多代回交,结合累代BmNPV攻毒选择,构建了高抗BmNPV的近等基因系C108_AN;在5龄起蚕经口添食BmNPV多角体1×10^(8) mL^(-1)悬浊液浸渍桑叶对C108及C108_A... 为解析家蚕AN品系高抗BmNPV的分子机制,采用家蚕抗性品系AN与易感品种C108杂交及多代回交,结合累代BmNPV攻毒选择,构建了高抗BmNPV的近等基因系C108_AN;在5龄起蚕经口添食BmNPV多角体1×10^(8) mL^(-1)悬浊液浸渍桑叶对C108及C108_AN攻毒,对感染后12、24、36、48、60 h的中肠组织进行转录组测序发现,C108_AN样本中检出BmNPV基因个数与表达量均大幅减少,病毒虽然能够侵染但不能完成复制;转录组中编码230 aa的家蚕病毒核衣壳蛋白基因(命名为BmVNCP)在C108_AN样本中显著高表达,表明与BmNPV抗性可能具有关联性。在BmN细胞中过表达BmVNCP基因可以抑制BmNPV的增殖,在BmN细胞中进行靶向BmVNCP的CRISPR/Cas9基因编辑,未能观察到BmNPV增殖和vp39基因表达的稳定增加;BmN细胞内过表达BmVNCP基因可以明显提高宿主IMD信号通路中Dredd基因的表达水平,对FADD基因转录水平无影响,PGRP-LB和PGRP-LF基因表达量极低以致qRT-PCR无法检出。综合分析上述结果认为,家蚕细胞或组织中BmVNCP基因高水平表达不能够阻止BmNPV侵染,但能够降低BmNPV侵染后病毒基因的表达以及病毒增殖,BmVNCP基因产物可能是通过IMD信号通路触发免疫机制。 展开更多
关键词 家蚕 家蚕核型多角体病毒 家蚕病毒核衣壳蛋白基因 基因过表达 病毒感染 病毒增殖
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异源包装家蚕核型多角体病毒的特性研究
9
作者 季平 沈卫德 +2 位作者 于继彬 陈息林 何家禄 《苏州丝绸工学院学报》 2000年第4期29-35,共7页
利用PCR方法分离AcMNPV多角体蛋白基因及其启动子的特异片段 ,将该基因片段正确克隆到转移载体pBacPAK(API 4)中 ,得到重组转移载体pBacOAc(API4)。将它与已缺失多角体蛋白基因的BmNPV(即 :CrBK)基因组DNA共转染BmN细胞 ,将AcMNPV多角... 利用PCR方法分离AcMNPV多角体蛋白基因及其启动子的特异片段 ,将该基因片段正确克隆到转移载体pBacPAK(API 4)中 ,得到重组转移载体pBacOAc(API4)。将它与已缺失多角体蛋白基因的BmNPV(即 :CrBK)基因组DNA共转染BmN细胞 ,将AcMNPV多角体蛋白基因及慈菇蛋白酶抑制剂基因定向克隆到CrBK基因组中 ,得重组病毒BmNPV(OAc -API4)。发现该重组病毒能被AcMNPV多角体蛋白所识别 ,并形成多角体包埋型病毒 ;CrBK粒子能被正确包装 ,同时也能表达慈菇蛋白酶抑制剂。比较了该重组病毒在家蚕细胞及家蚕幼虫中的增殖情况 ,发现它的芽生型病毒能正常感染家蚕细胞和经皮下注射的家蚕幼虫 ,然而其包埋型病毒不能经口感染家蚕幼虫。表明NPV的经口感染与多角体蛋白的种类有关。 展开更多
关键词 家蚕 核型多角体病毒 病毒粒子 PCR检测 杀虫剂
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