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猪NF-κB p65/p50亚基的原核表达及其对猪繁殖与呼吸综合征病毒增殖的影响 被引量：4
1
作者 王潇娣 朱玲 +2 位作者 蔡雨函 黄仆 徐志文 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期621-631,共11页
为了研究经原核表达的猪细胞核转录因子NF-κB p65/p50融合蛋白对猪繁殖与呼吸综合病毒(PRRSV)体外增殖影响,本文采用RT-PCR技术扩增出编码成熟p50区和p65开放阅读框(ORF),将其克隆至pET21a(+)中,转化至Rosetta感受态细胞,经异丙基-β-D... 为了研究经原核表达的猪细胞核转录因子NF-κB p65/p50融合蛋白对猪繁殖与呼吸综合病毒(PRRSV)体外增殖影响,本文采用RT-PCR技术扩增出编码成熟p50区和p65开放阅读框(ORF),将其克隆至pET21a(+)中,转化至Rosetta感受态细胞,经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)和蛋白免疫印迹法(Western-blot)对表达产物进行鉴定;纯化复性后添加到DMEM细胞维持液中,观察p65/p50对Marc145细胞毒性,确定最佳使用浓度;探讨最佳浓度的p65/p50对PRRSV体外感染增殖活力的影响,通过实时荧光定量PCR方法研究PRRSV感染时相,绘制PRRSV增殖曲线。成功构建了大量以包涵体形式表达Mr均约为70kD的p65/p50融合蛋白的p65/p50-pET21a(+)原核表达载体;Western-blot显示p50和p65重组蛋白可分别与兔抗人p50多克隆血清、兔抗人p65纯化抗体反应。确定p65/p50最佳添加浓度为0.4μg/mL。通过实时荧光定量PCR技术研究PRRSV感染时相,结果表明NF-κB p65/p50可促进PRRSV感染Marc-145CPE出现及病毒早期增殖;但CPE出现后,病毒增殖受到抑制,病毒滴度水平显著降低(P<0.05)。该结果为进一步研究PRRS的发病机理及治疗策略提供了新思路。 展开更多
关键词 核转录因子-κb 猪繁殖与呼吸综合征病毒 病毒复制
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猪核转录因子C-Rel亚基的克隆及PRV体外感染PK-15细胞对C-Rel转录时相的影响 被引量：3
2
作者 付梦瑾 朱玲 +3 位作者 周远成 杨文宇 李新琼 徐志文 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1877-1882,共6页
核转录因子κB是普遍存在于真核细胞中的转录调节因子,其信号通路在细菌、病毒感染宿主致病过程中起关键作用,直接调控宿主先天性免疫反应及细胞增殖、分化和凋亡,它的异常活化可能是PRV感染导致免疫抑制的重要原因。为进一步了解NF-κB... 核转录因子κB是普遍存在于真核细胞中的转录调节因子,其信号通路在细菌、病毒感染宿主致病过程中起关键作用,直接调控宿主先天性免疫反应及细胞增殖、分化和凋亡,它的异常活化可能是PRV感染导致免疫抑制的重要原因。为进一步了解NF-κB C-Rel亚基序列特征及PRV对C-Rel mRNA转录时相的影响,本试验采用RT-PCR从猪外周血淋巴细胞中扩增NF-κB C-Rel ORF,获得阳性质粒后测序,进行相关生物信息学分析;运用实时荧光定量PCR技术对PRV感染PK-15细胞后不同时期C-Rel mRNA的转录水平进行定量分析。序列分析结果表明:所扩增猪C-Rel亚基ORF长1 773bp,编码590aa;猪C-Rel核苷酸序列与不同动物的C-Rel核苷酸序列相似性较高;大部分位于细胞核内(76.0%),无信号肽及跨膜区。荧光定量结果表明:与对照组相比,感染后0~4h,C-Rel转录水平下调,2和4h差异显著(P<0.05);4~12h,快速上调,12h达到转录高峰(P<0.01);12h后逐渐下降,24~120h,维持在较低水平,其中36h差异极显著(P<0.01),48、72和120h差异显著(P<0.05)。本研究推断PRV感染早期较弱的先天性免疫应答可能与C-Rel活化水平低下有关。 展开更多
关键词 核转录因子-κappab C-REL 序列分析 转录时相
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NF-κB、Bcl-2与酒精性肝病 被引量：1
3
作者 张曦 王沁 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2011年第7期598-601,共4页
酒精性肝病(ALD)是由于长期过度饮酒而引发的一系列肝脏损害疾病。现研究表明肝细胞的凋亡对该病的发生、发展起着十分重要的作用。其中核因子κB(NF-κB)、B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)与ALD关系密切。ALD患者肝细胞内活化的NF-κB,通过... 酒精性肝病(ALD)是由于长期过度饮酒而引发的一系列肝脏损害疾病。现研究表明肝细胞的凋亡对该病的发生、发展起着十分重要的作用。其中核因子κB(NF-κB)、B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)与ALD关系密切。ALD患者肝细胞内活化的NF-κB,通过刺激大量炎性细胞因子释放,引发肝组织炎症、纤维化、坏死和凋亡,同时通过调控凋亡蛋白酶(Caspase)、Bcl-2、死亡受体等基因来干预肝细胞凋亡;被激活的Bcl-2,除本身具有抗凋亡功能外,还与NF-κB以复合物的形式发挥抗凋亡作用,同时与同家族促凋亡蛋白Bax以二聚体的形式依比例对肝细胞凋亡发挥抑制或促进作用。肝细胞凋亡和抗凋亡的动态失衡将成为酒精性肝病发病的重要途径之一。 展开更多
关键词 nf-κb bCL-2 酒精性肝病 细胞凋亡
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