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鹅和番鸭细小病毒全基因克隆与序列分析 被引量：39
1
作者 张云 耿宏伟 +5 位作者 郭东春 胡奇林 相文华 刘明 杨涛 林巍 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期415-419,共5页
本研究采用PCR技术扩增了鹅和番鸭全长细小病毒基因;其中鹅和番鸭细小病毒非结构蛋白基因(NS)全长为1884bp,编码627个氨基酸;结构基因(VP)全长为2199bp,编码732个氨基酸;序列分析表明:鹅和番鸭细小病毒NS之间的核苷酸和氨基酸同源性分别... 本研究采用PCR技术扩增了鹅和番鸭全长细小病毒基因;其中鹅和番鸭细小病毒非结构蛋白基因(NS)全长为1884bp,编码627个氨基酸;结构基因(VP)全长为2199bp,编码732个氨基酸;序列分析表明:鹅和番鸭细小病毒NS之间的核苷酸和氨基酸同源性分别为80.9%～82.9%和89.5%～91.2%,而相应的鹅细小病毒之间的同源性为93.7%～99.8%和96.8%～99.7%,番鸭细小病毒之间的同源性为98.8%～99.8%和98.6%～99.5%;在核苷酸和氨基酸水平上,鹅和番鸭细小病毒VP1之间的同源性分别为79.7%～88.7%和85.5%～93.3%,而相应的鹅细小病毒之间的同源性为88.8%～99.6%和91.5%～99.2%,番鸭细小病毒之间的同源性为98.1%～99.6%和97.1%～98.8%;番鸭和鹅细小病毒NS和vp1基因的系统进化树分析表明:番鸭和鹅呼细小病毒来自共同的祖先,但随着宿主的不同而演化为不同的分支。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 番鸭细小病毒 ns基因 VP1基因 序列分析
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鹅细小病毒分离株HG5/82的分子特征分析 被引量：20
2
作者 孔宪刚 李桂霞 +1 位作者 刘胜旺 冉多良 《中国病毒学》 CAS CSCD 2005年第1期28-32,共5页
本研究应用PCR技术扩增得到GPV中国分离株HG5/82的非结构基因与结构基因,片段大小分别约为1.9kb、2.2kb的片段。将该片段分别进行克隆及序列测定,并与 GPV 国内外部分已发表的毒株及番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)的对应... 本研究应用PCR技术扩增得到GPV中国分离株HG5/82的非结构基因与结构基因,片段大小分别约为1.9kb、2.2kb的片段。将该片段分别进行克隆及序列测定,并与 GPV 国内外部分已发表的毒株及番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)的对应序列比较。结果表明:HG5/82 株非结构蛋白(Non structure, NS)基因长为1884bp,编码627个氨基酸。HG5/82株结构蛋白基因长为2199bp,编码732个氨基酸。序列分析结果表明,我国地方分离株与国内外鹅细小病毒相比,ns基因、vp基因均表现出较高的同源性,并且具有共同的分子特征。为进一步研究GPV的基因功能、遗传变化规律及病毒分子致病机理提供了一定的分子基础。结构基因 VP3 间变异较小,这是目前GPV只有一个血清型的分子基础,为基因工程苗的研制提供了可行性。HG5/82 与番鸭细小病毒相应序列比较发现,与细小病毒其它成员相比两者具有较近的亲源关系,但这种同源性明显低于鹅细小病毒之间的同源性。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 ns基因 VP基因 分子特征
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番鸭呼肠孤病毒非结构基因的克隆和序列分析 被引量：13
3
作者 张云 欧阳岁东 +3 位作者 刘明 胡奇林 郎景华 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期139-143,共5页
参考GenBank禽呼肠孤病毒 (AvianReovirus,ARV)和番鸭呼肠孤病毒 (MuscovyDuckReovirus,MDRV)非结构基因 (NS)序列设计合成一对引物 ,对番鸭呼肠孤病毒S14和C4株NS基因进行RT_PCR扩增 ,克隆到pMD18_T载体中 ,并对克隆产物进行酶切鉴定... 参考GenBank禽呼肠孤病毒 (AvianReovirus,ARV)和番鸭呼肠孤病毒 (MuscovyDuckReovirus,MDRV)非结构基因 (NS)序列设计合成一对引物 ,对番鸭呼肠孤病毒S14和C4株NS基因进行RT_PCR扩增 ,克隆到pMD18_T载体中 ,并对克隆产物进行酶切鉴定和测序 ;番鸭呼肠孤病毒NS基因由 12 91bp核苷酸组成 ,与禽呼肠孤病毒NS基因相比 ,在非编码区第 115 5位少一个碱基 ,本文第一次证实 12 91bp是番鸭呼肠孤病毒NS基因特有的长度 ;番鸭呼肠孤病毒S14和C4株NS基因的 5’末端和 3’末端分别为 5‘GCTTTTT和TCATC_3’ ,是禽类呼肠孤病毒基因末端特有的碱基序列 ,S14和C4株NS基因的的有效阅读框 (2 4～ 112 7bp)编码 36 7个氨基酸组成的蛋白 ,分子量约为 4 0kDa ;番鸭呼肠孤病毒S14和C4株NS蛋白等电点分别是 7.3和 7.0 ,GC含量分别为 5 4 .2 6 %和 5 3.71% ,番鸭呼肠孤病毒S14和C4株NS基因间核苷酸同源性为 99.3% ,仅有 4个氨基酸差异 ,S14和C4与法国番鸭呼肠孤病毒 890 2 6株NS基因核苷酸同源性分别为 87.8%和 87.9% ,与鸡关节炎病毒S1133NS基因同源性分别为 79.0 %和 79.3% ;进化树分析表明本研究中的两株番鸭呼肠孤病毒非结构基因 (NS)与番鸭呼肠孤病毒的亲缘关系比禽呼肠孤病毒近的多 ,建议番鸭呼肠孤病毒应归属为正呼肠孤? 展开更多
关键词 番鸭呼肠孤病毒 ns基因 克隆 序列分析
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H9N2亚型猪流感病毒山东分离株的分离鉴定及其HA、NP、NS基因序列分析 被引量：15
4
作者 许传田 赵宏坤 范伟兴 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期528-530,共3页
从山东地区疑似流感发病猪分离到 10株流感病毒 ,经国家流感中心鉴定均为 A型流感病毒 H9N2亚型。将其中 1株 Sw/ SD/ 1/ 2 0 0 3(H9N2 )的血凝素基因 (HA)、核蛋白基因 (NP)和非结构蛋白基因 (NS)进行克隆与测序 ,与Gen Bank收录的其... 从山东地区疑似流感发病猪分离到 10株流感病毒 ,经国家流感中心鉴定均为 A型流感病毒 H9N2亚型。将其中 1株 Sw/ SD/ 1/ 2 0 0 3(H9N2 )的血凝素基因 (HA)、核蛋白基因 (NP)和非结构蛋白基因 (NS)进行克隆与测序 ,与Gen Bank收录的其他猪流感和禽流感 H9N2亚型的相关基因进行比较 ,推测 Sw/ SD/ 1/ 2 0 0 3(H9N2 )可能源于禽流感病毒 H9N2亚型和 H5 N1亚型的重组病毒 ;Sw/ SD/ 1/ 2 0 0 3的 HA氨基酸裂解位点与其他 H9N2亚型不同 ,Sw/ SD/1/ 2 0 0 3的 HA氨基酸裂解位点是 R- S- L- R- G,而其他猪流感和禽流感 H9N2亚型都是 R- S- S- R- G。 展开更多
关键词 H9N2亚型 猪 流感病毒 山东分离株 分离鉴定 HA NP ns基因 序列分析
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鸭源H9N2亚型流感病毒NS基因的克隆及表达 被引量：11
5
作者 赵思婷 王贵华 +2 位作者 张瑞华 金梅林 陈焕春 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2004年第5期23-26,共4页
根据GenBank中收录的H9N2亚型流感病毒的NS基因序列设计合成了 1对引物NSU/NSL ,利用RT PCR扩增出了H9N2株NS基因 ;将该基因片段克隆到 pMD 18 T载体上 ,并对所得到的重组质粒进行酶切分析及序列测定。结果 ,获得了NS基因片段的阳性重组... 根据GenBank中收录的H9N2亚型流感病毒的NS基因序列设计合成了 1对引物NSU/NSL ,利用RT PCR扩增出了H9N2株NS基因 ;将该基因片段克隆到 pMD 18 T载体上 ,并对所得到的重组质粒进行酶切分析及序列测定。结果 ,获得了NS基因片段的阳性重组子 ,扩增的NS基因包含NS1基因完整的阅读框架和部分NS2基因 ,其序列与GenBank中收录的其他分离株NS基因比较 ,同源性达 96 %～ 99%。再将克隆的NS基因插入到原核表达载体 pET 2 8a后 ,转化E .coliBL2 1(DE3)感受态细胞 ,在IPTG诱导下获得了预期的蛋白表达 ,所表达蛋白质的分子质量约为 30ku。 展开更多
关键词 鸭 H9N2亚型 流感病毒 ns基因 克隆 表达 质粒
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H5N1亚型禽流感病毒NS第263~277位核苷酸缺失提高病毒对鸡的致病力 被引量：11
6
作者 龙进学 薛峰 +2 位作者 彭宜 顾敏 刘秀梵 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期301-305,共5页
为研究2000年以来绝大多数H5N1亚型禽流感病毒分离株在非结构基因的第263—277位发生15个碱基缺失现象的生物学意义，构建H5N1A／D／SD／04株HA、NA、NS的全基因表达／转录载体，以及NS的删除突变载体（m248），A/D/YZ/04株的NS基因表... 为研究2000年以来绝大多数H5N1亚型禽流感病毒分离株在非结构基因的第263—277位发生15个碱基缺失现象的生物学意义，构建H5N1A／D／SD／04株HA、NA、NS的全基因表达／转录载体，以及NS的删除突变载体（m248），A/D/YZ/04株的NS基因表达／转录载体（848）和其补加15个核苷酸的NS突变载体（m848）。构建的载体分别与编码WSN（H1N1）内部基因载体进行组合转染，拯救获得4个具不同NS的重组的H5N1亚型流感病毒：RWSN-848和RWSN—m248在263-277位缺失15个碱基。RWSN-m848和RWSN-248则在相同位置不发生缺失。4个重组病毒的平均鸡胚繁殖效价（HA）、鸡胚的平均死亡时间（MDT）和鸡胚半数感染量（EID50）均无显著差异；但RWSN-848和RWSN-m248对6周龄SPF鸡的致病力明显高于RWSN—m848和RWSN-248。结果说明H5N1的NS基因在263～277位核苷酸发生缺失后，不影响重组H5N1在鸡胚中的繁殖性能，但提高了病毒对鸡的致病力。 展开更多
关键词 H5N1亚型禽流感病毒 病毒拯救 突变 非结构基因ns 病毒蚀斑形成单位
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H5N1亚型高致病性禽流感病毒NS基因的克隆及序列分析 被引量：10
7
作者 杨涛 刘明 +1 位作者 张云 杜绍范 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第1期5-9,共5页
采用RT PCR技术对4株H5N1亚型高致病性禽流感病毒的NS基因进行了扩增,将获得的PCR产物分别与T载体连接,获得了4个毒株的NS基因阳性克隆。序列分析结果显示,分离毒株间的核苷酸同源率为90.2%～98.7%,氨基酸同源率为82.6%～97.8%。与其他... 采用RT PCR技术对4株H5N1亚型高致病性禽流感病毒的NS基因进行了扩增,将获得的PCR产物分别与T载体连接,获得了4个毒株的NS基因阳性克隆。序列分析结果显示,分离毒株间的核苷酸同源率为90.2%～98.7%,氨基酸同源率为82.6%～97.8%。与其他毒株比较A Goose HLJ P46 2003(H5N1)和A Goose HLJ G2 2003(H5N1)株NS基因在第264～278位处发生了15个核苷酸缺失;A Goose Jilin W2 2004(H5N1)株NS1基因蛋白编码区的第652位碱基发生T C突变,成为终止密码子,造成NS1蛋白的C末端有13个氨基酸缺失。证实不同基因型的H5N1亚型禽流感病毒在我国家禽中同时存在;H9与H5亚型流感病毒基因间存在着广泛的遗传交换。 展开更多
关键词 禽流感病毒 ns1基因 克隆 序列分析
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丙型肝炎病毒非结构区NS3基因在大肠埃希菌中的可诱导性表达 被引量：12
8
作者 成军 钟彦伟 +3 位作者 刘妍 董菁 杨继珍 杨守纯 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期85-87,共3页
目的　构建丙型肝炎病毒 (HCV)NS3基因的原核细胞表达载体 ,实现在大肠埃希菌中的可诱导性表达。方法　应用聚合酶链反应 (PCR)技术 ,以美国HCV H株全长cDNA质粒为模板 ,扩增获得NS3基因片段 ,克隆到原核表达载体pET 30C(+)中 ,构建原... 目的　构建丙型肝炎病毒 (HCV)NS3基因的原核细胞表达载体 ,实现在大肠埃希菌中的可诱导性表达。方法　应用聚合酶链反应 (PCR)技术 ,以美国HCV H株全长cDNA质粒为模板 ,扩增获得NS3基因片段 ,克隆到原核表达载体pET 30C(+)中 ,构建原核表达载体pET NS3,转化BL2 1(DE3)宿主菌 ,以IPTG诱导 ,获得NS3蛋白的可诱导性表达 ,以HCVNS3的单链可变区抗体 (ScFv)证实表达的NS3蛋白的特异性。结果　以HCVNS3基因序列特异性引物 ,PCR扩增获得 1893bp的NS3DNA片段 ,插入pET 30C(+)表达载体。转化BL 2 1(DE3)受体菌 ,经培养、IPTG诱导 ,获得了重组HCVNS3蛋白的表达 ,以HCVNS3的ScFv证实了表达的重组蛋白HCVNS3的特异性。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 ns3 基因表达 聚合酶链反应 大肠埃希菌
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H9N2亚型禽流感病毒非结构蛋白(NS1)基因的克隆与表达 被引量：8
9
作者 刘金华 吴清民 +1 位作者 史为民 郭玉璞 《中国病毒学》 CSCD 2003年第5期503-505,共3页
由于H9N2亚型禽流感对我国的养鸡业已造成了很大的损失,因而在我国许多养鸡场不得不使用H9N2亚型禽流感灭活苗[1],但由于灭活苗的使用,而增加了H9N2亚型禽流感的监测难度.因此,建立一种能区别自然感染鸡和疫苗免疫鸡的鉴别诊断方法已被... 由于H9N2亚型禽流感对我国的养鸡业已造成了很大的损失,因而在我国许多养鸡场不得不使用H9N2亚型禽流感灭活苗[1],但由于灭活苗的使用,而增加了H9N2亚型禽流感的监测难度.因此,建立一种能区别自然感染鸡和疫苗免疫鸡的鉴别诊断方法已被提到日程上来. 展开更多
关键词 禽流感病毒 非结构蛋白 基因克隆 基因表达
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猪瘟病毒NS3基因克隆、原核表达及间接ELISA方法初步建立 被引量：11
10
作者 蒋大良 余兴龙 +6 位作者 李润成 葛猛 罗维 颜爱 李杰 刘春红 涂长春 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期78-84,共7页
采用PCR方法从携带猪瘟病毒兔化弱毒(Hog cholera lapinized virus,HCLV)全长基因组cDNA的质粒pPOHCLV中扩增到长度为2000bp左右NS3基因序列,并将其克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建成重组原核表达载体pETNS3。将pETNS3在大肠杆菌Rose... 采用PCR方法从携带猪瘟病毒兔化弱毒(Hog cholera lapinized virus,HCLV)全长基因组cDNA的质粒pPOHCLV中扩增到长度为2000bp左右NS3基因序列,并将其克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建成重组原核表达载体pETNS3。将pETNS3在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行优化表达,SDS-PAGE分析重组蛋白NS3主要以包涵体形式表达,分子大小约95kD。Western Blotting分析表明重组蛋白NS3具有免疫原性。采用Ni+亲和层析方法纯化得到重组蛋白NS3(90%)。以纯化的重组蛋白NS3为抗原初步建立了检测CSFVNS3抗体的间接ELISA方法,检测221份不同猪群和年龄猪的血清样品。检测结果与IDEXX公司CSFV-Ab检测试剂盒检测结果进行对比,阳性符合率为83.33%,阴性符合率为89.38%,总符合率为86.43%。30份存在差异的血清样品用间接免疫荧光法(Indirect immunofluorescence assay,IFA)进行检测,结果显示IFA检测结果与NS3间接ELISA和IDEXX公司CSFV-Ab检测试剂盒符合率分别为56.67%和43.33%。 展开更多
关键词 CSF V ns3 基因克隆 原核表达 蛋白纯化 免疫印迹 间接ELISA IFA
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H9N2禽流感病毒分离株NS基因同源性分析 被引量：10
11
作者 王传彬 孙明 +3 位作者 赵铁柱 田克恭 王宏伟 汪明 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期177-180,共4页
经RT＿PCR扩增了三株国内H9N2亚型禽流感病毒(ATV)分离株的非结构(NS)蛋白基因,并把扩增的基因片段克隆到pGEM＿T载体中测序,获得了NS1和NS2蛋白的完整编码序列。经与GenBank中发表的核苷酸序列比较表明,这三株病毒的NS基因之间的同源性... 经RT＿PCR扩增了三株国内H9N2亚型禽流感病毒(ATV)分离株的非结构(NS)蛋白基因,并把扩增的基因片段克隆到pGEM＿T载体中测序,获得了NS1和NS2蛋白的完整编码序列。经与GenBank中发表的核苷酸序列比较表明,这三株病毒的NS基因之间的同源性为96%～98%;与1994年以来香港、韩国H9N2亚型分离株NS基因的同源性均在90%以上;其NS1蛋白的C＿末端都缺失13个氨基酸,不同于香港分离株;在AIVNS基因系统发育进化树中,三者都处于等位基因A类的亚洲禽—猪群分枝。 展开更多
关键词 禽流感病毒 ns基因 同源性分析
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RNA干扰Nucleostemin基因对人食管癌Eca-109细胞株增殖影响的实验研究 被引量：5
12
作者 郑学芝 刘桂莲 +4 位作者 李丽 孙卫 念红 胡静 蔡子微 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期103-105,共3页
目的筛选NS基因特异性siRNA阳性细胞克隆,研究NS基因特异性RNA干扰对Eca-109细胞株体外增殖能力的影响。方法用脂质体法将NS特异性siRNA表达载体转染Eca-109细胞,Zeocin抗生素压力筛选后用PCR方法鉴定阳性克隆;MTT法检测各组细胞的生长... 目的筛选NS基因特异性siRNA阳性细胞克隆,研究NS基因特异性RNA干扰对Eca-109细胞株体外增殖能力的影响。方法用脂质体法将NS特异性siRNA表达载体转染Eca-109细胞,Zeocin抗生素压力筛选后用PCR方法鉴定阳性克隆;MTT法检测各组细胞的生长增殖情况,RT-PCR方法检测NS基因表达量的变化情况。结果与对照组比较,silencer组肿瘤细胞趋于分化,细胞增殖抑制率超过80%(P<0.01),差异具有显著性;NS基因表达量下降。结论NS基因特异性RNA干扰抑制人食管癌Eca-109细胞株体外增殖,使NS基因表达量下降。 展开更多
关键词 Nucleostemin(ns) RNA干扰 食管癌 基因表达 细胞增殖
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非甾体类抗炎药NS398对前列腺癌动物模型中RECK基因表达的调控 被引量：7
13
作者 徐振宇 高建平 +4 位作者 孙颖浩 张征宇 葛京平 许传亮 王林辉 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1079-1082,共4页
目的:通过检测非甾体类抗炎药NS398对前列腺癌动物模型中RECK基因表达的调控,探讨其可能的抗肿瘤机制。方法:成瘤裸鼠分为实验组和对照组,实验组裸鼠予口咽管下喂服NS398,每天剂量0.1 mg/g体重,分别喂服10 d、20 d、30 d,对照组不予喂药... 目的:通过检测非甾体类抗炎药NS398对前列腺癌动物模型中RECK基因表达的调控,探讨其可能的抗肿瘤机制。方法:成瘤裸鼠分为实验组和对照组,实验组裸鼠予口咽管下喂服NS398,每天剂量0.1 mg/g体重,分别喂服10 d、20 d、30 d,对照组不予喂药,各组均在30 d后处死裸鼠;抽提各组肿瘤组织总RNA,RT-PCR检测RECK基因与MMP-9的表达;抽提各组肿瘤组织总蛋白,应用W estern印迹法检测RECK蛋白的表达。结果:实验组肿瘤组织中RECK基因的表达量较对照组明显升高,而MMP-9的表达量明显降低,且其变化与用药时间有明显的相关性。结论:NS398对前列腺癌的发生及转移有明显的抑制作用,其具体的作用机制可能与其诱导RECK基因的表达,从而抑制MMP-9的表达有关。 展开更多
关键词 ns398 非甾体类抗炎药 前列腺癌 RECK基因 基质金属蛋白酶9
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猪细小病毒Z株NS部分基因的扩增及序列分析 被引量：1
14
作者 崔尚金 符芳 +2 位作者 宋波 李媛 韩孝成 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2003年第9期19-22,共4页
从猪细小病毒Z株提取基因组DNA ,利用PCR扩增部分基因 ,并对该扩增片段进行测序与分析。结果表明 ,扩增的NS基因长 330bp ,编码 10 9个氨基酸。氨基酸序列中含有猪细小病毒的重要保守序列 ,并有 1个潜在的糖基化位点NFSN。Z株NS基因与... 从猪细小病毒Z株提取基因组DNA ,利用PCR扩增部分基因 ,并对该扩增片段进行测序与分析。结果表明 ,扩增的NS基因长 330bp ,编码 10 9个氨基酸。氨基酸序列中含有猪细小病毒的重要保守序列 ,并有 1个潜在的糖基化位点NFSN。Z株NS基因与其他猪细小病毒Kresse、NADL2 2、NADL2 1株的核苷酸同源性分别为 99%、98%、98% ,氨基酸同源性均为 99%。 展开更多
关键词 猪细小病毒Z株 ns基因 基因扩增 序列分析 PCR 同源性 疫苗株 流行株
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禽流感病毒NS第263～277位核苷酸缺失降低其抗干扰素能力 被引量：3
15
作者 龙进学 王曲直 刘秀梵 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期34-39,共6页
2000年以来，多数H5N1亚型禽流感病毒在NS基因的263～277位发牛15个碱基的缺失。为了研究此缺失在流感病毒进化中的生物学意义，构建H5N1亚型流感病毒A／SD／04株的HA、NA、NS的全基因表达载体，以及NS基因263～277位删除的突变载体。... 2000年以来，多数H5N1亚型禽流感病毒在NS基因的263～277位发牛15个碱基的缺失。为了研究此缺失在流感病毒进化中的生物学意义，构建H5N1亚型流感病毒A／SD／04株的HA、NA、NS的全基因表达载体，以及NS基因263～277位删除的突变载体。通过反向遗传学技术，与编码WSN的其他内部基因（PB2，PB1，PA，NP和M）的表达载体进行组合转染，获得在NS基因的263～277位缺失和不缺失的2个重组H5N1亚型流感病毒（RWSN—m248和RWSN-248）。此两个重组病毒在无干扰素产生的Vero细胞上的繁殖滴度相似，在能产生干扰素的细胞MDCK和COS-1细胞上的繁殖滴度有明显差异。两个重组病毒在鸡胚中的繁殖滴，IVPI，MDT和EID50均无显著差异。说明NS基因的263～277位核苷酸的缺失不影响病毒的整体毒力，但降低了H5N1的抗干扰素能力。 展开更多
关键词 拯救 重组病毒 ns 缺失突变 病毒空班形成单位(PFU)
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5株水禽细小病毒全基因组序列分析 被引量：5
16
作者 贺亦龙 邵周伍林 +1 位作者 白小飞 张云 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1837-1843,共7页
利用PCR技术扩增鹅细小病毒(GPV)ZJ、G3和LJY毒株与番鸭细小病毒(MDPV)DK和DYL毒株全基因组。序列分析结果表明,除LJY毒株非结构基因(NS)编码626个氨基酸外,其余4株NS全长1 884bp,编码627个氨基酸;5株的结构基因(VP)全长均为2 199bp,编... 利用PCR技术扩增鹅细小病毒(GPV)ZJ、G3和LJY毒株与番鸭细小病毒(MDPV)DK和DYL毒株全基因组。序列分析结果表明,除LJY毒株非结构基因(NS)编码626个氨基酸外,其余4株NS全长1 884bp,编码627个氨基酸;5株的结构基因(VP)全长均为2 199bp,编码732个氨基酸。GPV、MDPV NS蛋白不同毒株之间相似性分别为95.9%~99.8%和96.8%~99.0%;而GPV与MDPV NS蛋白之间相似性为88.9%~90.4%。GPV、MDPV VP蛋白不同毒株之间的相似性分别为90.2%~100.0%和96.9%~99.3%,而GPV与MDPV VP蛋白之间的相似性为79.5%~81.6%,表明GPV抗原性不同于MDPV。MDPV与GPV NS蛋白均含有4个潜在的糖基化位点;在结构蛋白区域,MDPV VP含有8个潜在的糖基化位点,而GPV为6个糖基化位点,G3与LJY毒株分别缺失582—584NTT和703—705NRT潜在的糖基化位点。5株水禽细小病毒的进化分析表明,GPV、MDPV在进化上形成两个独立的分支,各个基因片段之间未发生重组。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 番鸭细小病毒 ns基因 VP基因 序列分析
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H1N2亚型猪流感病毒HA、NP、NA、M和NS基因的克隆与序列分析 被引量：3
17
作者 蒙雪琼 陈义祥 +3 位作者 刘棋 郑敏 施开创 胡杰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期221-227,共7页
对3株H1N2亚型猪流感病毒（SIV）：Sw／GX／17／05、Sw／HN／I／05和Sw／GX／13／06的血凝素（HA）、核蛋白（NP）、神经氨酸酶（NA）、基质蛋白（M）和非结构蛋白（NS）基因进行克隆和序列分析。结果显示：3株分离毒株HA、NP、NA、M和N... 对3株H1N2亚型猪流感病毒（SIV）：Sw／GX／17／05、Sw／HN／I／05和Sw／GX／13／06的血凝素（HA）、核蛋白（NP）、神经氨酸酶（NA）、基质蛋白（M）和非结构蛋白（NS）基因进行克隆和序列分析。结果显示：3株分离毒株HA、NP、NA、M和NS基因之间核苷酸同源性分别为91．3％～98．0％、98．4％～98．8％、97．4％～98．3％、98．8％～99．8％和98．1％～98．4％。遗传进化分析显示：分离毒株与美国分离的三源基因重排HIN2sIV具有较近的亲缘关系；在HA、NP、M和NS基因进化树中，3株分离毒株均位于古典H1N1亚型SIV群，在NA基因进化树中，3株分离毒株则位于人流感病毒群。HA和NA基因推导氨基酸序列分别与代表毒株古典H1N1SIVA／swine／Maryland／23239／1991（H1N1）和人H3N2流感病毒A／BuenosAires／4459／96（H3N2）比较分析显示：HA（95．4％～96．1％）和NA（96．6％～97．2％）具有较高的氨基酸同源性；糖基化位点、抗原位点和受体结合位点（HA）处氨基酸存在一定的差异，这些氨基酸差异对病毒生物学特性的影响有待于进一步研究。 展开更多
关键词 H1N2亚型SIV HA基因 NP基因 NA基因 M基因 ns基因 克隆 序列分析
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华丽龙胆花青素合成酶GsANS基因的克隆及其表达分析 被引量：2
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作者 衡蒙 孔祥莹 +2 位作者 赵海平 方颖 金雪花 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2023年第11期3498-3504,共7页
花青素合成酶(anthocyanidin synthase,ANS)是植物花青素苷生物合成途径末端的关键酶。本研究以华丽龙胆(Gentiana sino-ornata) 5个不同开放阶段(H1~H5)花冠及根、茎、叶为试材,采用RT-PCR技术从花冠H2阶段分离出了华丽龙胆花青素合成... 花青素合成酶(anthocyanidin synthase,ANS)是植物花青素苷生物合成途径末端的关键酶。本研究以华丽龙胆(Gentiana sino-ornata) 5个不同开放阶段(H1~H5)花冠及根、茎、叶为试材,采用RT-PCR技术从花冠H2阶段分离出了华丽龙胆花青素合成酶基因GsANS的全长序列,利用生物信息学软件分析其序列信息,通过RT-qPCR技术分析表达模式。结果显示GsANS开放阅读框为1 086 bp,编码362个氨基酸,含有PcbC结构域和2OG-FeⅡ-Oxy保守结构域。系统进化分析表明,其与三花龙胆花青素合成酶氨基酸序列相似性高达91.23%,亲缘关系最近。对不同开放阶段花冠及根、茎、叶中GsANS的表达模式进行分析,结果显示GsANS在花冠中表达量均高于根、茎、叶中的表达量,同时在花冠发育的H4阶段GsANS的相对表达量达到最高值,随后降低,推测Gs ANS基因参与华丽龙胆花冠花青素苷的合成。本研究可为解析华丽龙胆花冠中花青素苷生物合成的分子调控机理提供科学依据。 展开更多
关键词 华丽龙胆 GsAns 基因克隆 表达分析
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水貂细小病毒MEV-LT18株的分离鉴定及遗传进化分析 被引量：4
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作者 朱翔宇 鲁荣光 +7 位作者 王洋 卜研 蔡熙姮 柏玲 侯金利 李滋睿 胡博 闫喜军 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期278-284,共7页
为了解河北地区水貂肠炎病毒(mink enteritis virus,MEV)的生物学特性,阐明其基因组与遗传进化等特征,采集疑似感染MEV致死貂的肠道组织,PCR鉴定为MEV阳性后,接种F81细胞进行病毒分离鉴定,通过电镜形态学观察、理化特性试验、血清学及... 为了解河北地区水貂肠炎病毒(mink enteritis virus,MEV)的生物学特性,阐明其基因组与遗传进化等特征,采集疑似感染MEV致死貂的肠道组织,PCR鉴定为MEV阳性后,接种F81细胞进行病毒分离鉴定,通过电镜形态学观察、理化特性试验、血清学及分子生物学等试验方法进行验证。结果表明,成功鉴定并分离出1株MEV,命名为MEV-LT18株;电镜观察病毒粒子形态符合细小病毒形态特征;血凝试验发现该分离株不具有血凝性。对NS基因和VP2基因进行序列比对与遗传进化树分析,与Abashiri株进行氨基酸序列对比,结果显示在NS基因上有3处氨基酸发生非同义替换,分别为aa10(Val→Ile)、aa540(Val→Ala)、aa574(Val→Ile),在VP2基因上共有4处氨基酸发生非同义替换,分别为aa232(Ile→Val)、aa236(Thr→Ser)、aa300(Ala→Val)、aa411(Ala→Glu);系统进化树结果显示MEV-LT18株的NS基因和VP2基因分别与MEV-SDNH株和MEV-HLJ株亲缘关系最近,可能处于两者进化过程的过渡阶段。本研究对该地区水貂细小病毒的进化特征提供了一定的参考价值。 展开更多
关键词 水貂细小病毒 ns基因 VP2基因 进化分析
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多重RT-PCR同步快速检测A型和B型流感病毒 被引量：4
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作者 程小雯 房师松 +2 位作者 庾蕾 张再清 吕星 《中国热带医学》 CAS 2004年第5期692-694,共3页
目的　建立特异、敏感、快速、同步检测含漱液中A、B型流感病毒的分子生物学检测方法。　方法　以流感病毒A型保守的M基因和流感病毒B型的NS基因为模板分别设计的两对引物 ,用MRT -PCR同时扩增A型M基因和B型NS基因的片断 ,得到相对应的... 目的　建立特异、敏感、快速、同步检测含漱液中A、B型流感病毒的分子生物学检测方法。　方法　以流感病毒A型保守的M基因和流感病毒B型的NS基因为模板分别设计的两对引物 ,用MRT -PCR同时扩增A型M基因和B型NS基因的片断 ,得到相对应的病毒片段 ,根据扩增出的片段的位置和大小来判断含漱液中A、B型流感病毒分型。　结果　用MRT -PCR从 19株A型流感病毒毒株和 11株B型流感病毒毒株分别特异地扩增出M基因 5 0 1bp的片段和NS基因 13 6bp的片段 ,灵敏度可达 1 6× 10 -5TCID5 0 ;对 2份黑天鹅的咽拭子和肺组织标本均检出A型流感病毒M基因 5 0 1bp的片段。　结论　多重逆转录聚合酶链反应能特异、敏感快速的检测A、B型流感病毒。 展开更多
关键词 B型流感 M基因 扩增 A型流感病毒 含漱液 RT—PCR 快速检测 ns基因 黑天鹅 毒株
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