Transgeni根癌农杆菌介导的小麦转基因植株再生(英文) 被引量：29

1

作者 夏光敏 李忠谊 +2 位作者 贺晨霞 陈惠民 RichardBrettell 《植物生理学报（0257-4829)》 CSCD 1999年第1期22-28,共7页

根癌农杆菌菌株Ａｇｌ Ⅰ的Ｔｉ 质粒ｐＵＮＮ－２ 带有Ｕｂｉ１ 启动子驱动的ｎｐｔ Ⅱ基因。７ 种基因型小麦幼胚或胚性愈伤组织用于农杆菌介导的转化实验。经过不同浓度巴龙霉素的筛选，３ 种基因型小麦产生抗性愈伤组织并再生植株... 根癌农杆菌菌株Ａｇｌ Ⅰ的Ｔｉ 质粒ｐＵＮＮ－２ 带有Ｕｂｉ１ 启动子驱动的ｎｐｔ Ⅱ基因。７ 种基因型小麦幼胚或胚性愈伤组织用于农杆菌介导的转化实验。经过不同浓度巴龙霉素的筛选，３ 种基因型小麦产生抗性愈伤组织并再生植株。再生植株经ＰＣＲ 和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交鉴定为转基因植株，转化频率（ 再生转基因植株的小麦愈伤组织数／ 用于转化实验的愈伤组织数） 为３．７％ ～５ ．９％ 。小麦基因型及转化材料的起始生理状态是影响ＴＤＮＡ转移的重要因素。 展开更多

关键词 小麦 根癌农杆菌 介导法 nptⅱ基因 转基因植株

全文增补中

转基因花卉的DNA提取与多重PCR分析 被引量：29

2

作者 邵碧英 陈文炳 +3 位作者 李寿崧 李世成 叶文飚 陈亮 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期674-678,共5页

分别以CTAB法、DNA提取试剂盒提取菊花、矮牵牛、非洲菊 3种花卉的基因组DNA ,凝胶电泳结果表明试剂盒提取的效果较好 .设计合成了 3对引物 ,分别扩增花椰菜花叶病毒 (Cauliflowermosaicvirus,CaMV) 35S启动子、根癌农杆菌胭脂碱合成酶... 分别以CTAB法、DNA提取试剂盒提取菊花、矮牵牛、非洲菊 3种花卉的基因组DNA ,凝胶电泳结果表明试剂盒提取的效果较好 .设计合成了 3对引物 ,分别扩增花椰菜花叶病毒 (Cauliflowermosaicvirus,CaMV) 35S启动子、根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因 (nos)终止子、大肠杆菌K12菌株新霉素磷酸转移酶II(nptⅡ )基因 .普通PCR检测结果表明 ,3种花卉 6个样品中仅矮牵牛的 1个样品含有这 3种转基因成分 ,酶切鉴定结果验证了PCR产物为非假阳性 .尝试以多重PCR同时检测转基因矮牵牛与对照阳性质粒中的 2个或 3个转基因成分 。 展开更多

关键词 转基因花卉 DNA提取 多重PCR分析 35S启动子 nos终止子 nptⅱ基因 转基因检测方法

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Gus基因在转基因棉花细胞中的表达及其与NPTⅡ基因、Bt基因表达的相关性 被引量：6

3

作者 孟钊红 焦改丽 +1 位作者 张换样 李燕娥 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2001年第4期243-246,共4页

通过农杆菌介导法将含有 Gus基因、NPT 基因、Bt基因的 Ti质粒转入棉花细胞中 ,用Gus组织化学检测法检测转化愈伤组织、再生棉株 R0 、R1和 R2 代植株组织细胞中的 Gus基因表达的水平 ,并用 NPT 活性速测法和室内生物测虫法检测三个外... 通过农杆菌介导法将含有 Gus基因、NPT 基因、Bt基因的 Ti质粒转入棉花细胞中 ,用Gus组织化学检测法检测转化愈伤组织、再生棉株 R0 、R1和 R2 代植株组织细胞中的 Gus基因表达的水平 ,并用 NPT 活性速测法和室内生物测虫法检测三个外源基因在 R0 、R1和 R2 代植物植株组织中的表达情况 ,分析三者存在及表达的相互关系。结果表明 ,Gus基因在转化愈伤组织细胞有丝分裂增殖过程中能稳定遗传给后代细胞。转化棉株 R0 、R1和 R2 代 Gus活性、NPT 活性、抗虫性三者有一定的相关性但不完全是共表达的 。 展开更多

关键词 转基因棉花 农杆菌介导 GUS基因 基因表达 nptⅱ基因 BT基因 相关性 协同性

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利用标记基因检测转Bt基因棉种子纯度的研究 被引量：4

4

作者 李长福 吴振廷 +2 位作者 王学林 孟海 林华峰 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期23-26,共4页

根据转Bt基因棉"国抗1号"转入的外源基因中整合有GUS基因和NPT 基因,建立了3种种子纯度检测方法:GUS组织化学染色法、NPT 培养基法和NPT 叶片涂抹法,准确率都达到98%以上;在检测转Bt基因棉原始群系"20-1"时与生物... 根据转Bt基因棉"国抗1号"转入的外源基因中整合有GUS基因和NPT 基因,建立了3种种子纯度检测方法:GUS组织化学染色法、NPT 培养基法和NPT 叶片涂抹法,准确率都达到98%以上;在检测转Bt基因棉原始群系"20-1"时与生物测定比较准确率也在98%以上,因此这3种方法可用于转Bt基因棉大规模制种过程中和推广过程中良种纯度的检测,相应方法同样适用于基因组中整合有GUS基因和(或)NPT 基因的其它转Bt基因棉的品种。 展开更多

关键词 转BT基因棉 标记基因 GUS基因 nptⅱ基因 种子纯度 检测方法

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根癌农杆菌介导的‘魏可’葡萄遗传转化体系的优化 被引量：8

5

作者 余智莹 张平 +3 位作者 徐志胜 孙兴民 章镇 陶建敏 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期343-349,F0004,共8页

以‘魏可’葡萄离体叶片为外植体,利用植物表达载体上含有卡那霉素抗性基因(nptⅡ)的根癌农杆菌LBA4404(pCAMBIA2301)对影响‘魏可’葡萄遗传转化效率的因素进行系统研究。结果表明,最佳农杆菌介导‘魏可’葡萄遗传转化体系为农杆菌侵染... 以‘魏可’葡萄离体叶片为外植体,利用植物表达载体上含有卡那霉素抗性基因(nptⅡ)的根癌农杆菌LBA4404(pCAMBIA2301)对影响‘魏可’葡萄遗传转化效率的因素进行系统研究。结果表明,最佳农杆菌介导‘魏可’葡萄遗传转化体系为农杆菌侵染4 min,共培养3 d,卡那霉素质量浓度5 mg·L-1,羧苄青霉素质量浓度200 mg·L-1。采用此体系对‘魏可’葡萄进行转化,共获得9株抗性苗。利用GUS组织化学染色、PCR扩增的方法检测,结果表明,有4株通过了PCR检测,1株通过了RT-PCR检测,初步证明nptⅡ基因已经整合进入‘魏可’葡萄基因组中。将PCR产物回收,经测序验证nptⅡ基因完全整合进入‘魏可’葡萄基因组中。对CK及经PCR检测呈阳性的株系进行卡那霉素抗性鉴定,发现PCR呈阳性的株系均比CK抗Kan的能力明显增强。 展开更多

关键词 '魏可’葡萄 农杆菌介导法 nptⅱ基因 转化体系 分子检测 卡那霉素抗性鉴定

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NPTⅡ基因和GUS基因在小麦遗传转化中的应用 被引量：4

6

作者 张文蔚 成卓敏 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期48-50,共3页

对小麦遗传转化上常用的选择标记基因NPTⅡ的选择剂及GUS基因在幼胚愈伤组织中的转移进行了研究。结果表明用G418作为选择剂,浓度为20-30 mg／L较为合适。幼胚愈伤组织与农杆菌共培养3 d后,即可检测到GUS基因的瞬时表达。农杆菌LBA4404... 对小麦遗传转化上常用的选择标记基因NPTⅡ的选择剂及GUS基因在幼胚愈伤组织中的转移进行了研究。结果表明用G418作为选择剂,浓度为20-30 mg／L较为合适。幼胚愈伤组织与农杆菌共培养3 d后,即可检测到GUS基因的瞬时表达。农杆菌LBA4404由500 mg／L羧卞青霉素抑制;EHA105、AGLI由500 mg／L头孢霉素抑制。而不能用卡那霉素。 展开更多

关键词 nptⅱ基因 GUS基因 小麦 遗传转化 幼胚愈伤组织 农杆菌介导

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转基因抗虫棉Bt基因与nptⅡ基因的遗传与表达 被引量：1

7

作者 闫喜中 张锐 +3 位作者 孟志刚 孙国清 周涛 郭三堆 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2008年第6期161-163,共3页

采用花粉管通道法将含有Bt杀虫基因的pG4AB质粒导入受体棉花中23中,通过卡那霉素筛选,Bt免疫检测条检测,PCR扩增对转基因抗虫棉的各个自交世代进行跟踪研究。结果表明,具有卡那霉素抗性的单株能扩增出Bt基因,而且均有Bt杀虫蛋白表达。B... 采用花粉管通道法将含有Bt杀虫基因的pG4AB质粒导入受体棉花中23中,通过卡那霉素筛选,Bt免疫检测条检测,PCR扩增对转基因抗虫棉的各个自交世代进行跟踪研究。结果表明,具有卡那霉素抗性的单株能扩增出Bt基因,而且均有Bt杀虫蛋白表达。Bt基因与npt Ⅱ基因均整合进了棉花基因组中,相互之间紧密连锁遗传,均稳定表达,因此报告基因npt Ⅱ可用于研究Bt基因的遗传情况。 展开更多

关键词 BT基因 nptⅱ基因 遗传 表达

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外源基因在苹果植株中稳定性研究 被引量：3

8

作者 周瑞金 杜国强 师校欣 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期97-101,共5页

以常规离体继代培养的转豇豆胰蛋白酶抑制剂(Cowpea trypsin inhibitor,CpTI)基因苹果(Malusdomestica Borkh.)(包括皇家嘎拉、王林、乔纳金和富士等60个株系)组培苗为试材,应用卡那霉素筛选、PCR扩增及RT-PCR扩增对其外源基因的稳定性... 以常规离体继代培养的转豇豆胰蛋白酶抑制剂(Cowpea trypsin inhibitor,CpTI)基因苹果(Malusdomestica Borkh.)(包括皇家嘎拉、王林、乔纳金和富士等60个株系)组培苗为试材,应用卡那霉素筛选、PCR扩增及RT-PCR扩增对其外源基因的稳定性进行研究。结果表明,在60个常规继代培养6～8年的转CpTI基因苹果转化株系中均可检测出CpTI特异基因片断;除2个转化株系在50 mg.L-1卡那霉素浓度下出现花叶现象,表现缺乏卡那霉素抗性外,其他株系在含相同浓度卡那霉素的培养基中生长正常。RT-PCR检测结果表明,转入的外源CpTI基因在43个株系中得到了较高水平的表达,在15个株系中表达强度低,2个株系未检测到特异表达条带。 展开更多

关键词 苹果 nptⅱ基因 豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 继代培养 稳定性

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根癌农杆菌介导深红虫草菌株C033转化体系的建立 被引量：3

9

作者 郭维 王磊 +2 位作者 吴宏清 白玲 章卫民 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期149-154,共6页

利用根癌农杆菌EHA105介导,建立了深红虫草(Cordyceps cardinalis)菌株C033的遗传转化体系。遗传霉素(G418)的抗性筛选,gus基因活性检测和PCR分析结果表明,nptⅡ抗性筛选标记基因已经整合到转化子基因组DNA中,并能够稳定遗传;同时对影... 利用根癌农杆菌EHA105介导,建立了深红虫草(Cordyceps cardinalis)菌株C033的遗传转化体系。遗传霉素(G418)的抗性筛选,gus基因活性检测和PCR分析结果表明,nptⅡ抗性筛选标记基因已经整合到转化子基因组DNA中,并能够稳定遗传;同时对影响该菌株的转化因素包括孢子浓度、农杆菌OD值、乙酰丁香酮(AS)的浓度及共培养时间进行分析,在优化条件下的转化效率为100个转化子/105个孢子。 展开更多

关键词 深红虫草 根癌农杆菌 转化体系 nptⅱ基因 GUS基因

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抗虫基因在湘杂棉22号F_1与F_2代中的表达及遗传稳定性研究 被引量：2

10

作者 曾潜 张学文 +3 位作者 彭珍子 黄丽华 陈浩东 戴恺 《湖南农业科学》 2011年第7期5-7,10,共4页

以转基因抗虫棉湘杂棉22号为研究材料,利用PCR和ELISA检测方法,分析了Cry1Ac基因与NptⅡ基因在F1与F2代材料中的表达及遗传稳定性情况。结果显示,外来抗虫基因在F1代中稳定存在,且稳定表达。F2代检测样本中5%的个体出现基因沉默,表达个... 以转基因抗虫棉湘杂棉22号为研究材料,利用PCR和ELISA检测方法,分析了Cry1Ac基因与NptⅡ基因在F1与F2代材料中的表达及遗传稳定性情况。结果显示,外来抗虫基因在F1代中稳定存在,且稳定表达。F2代检测样本中5%的个体出现基因沉默,表达个体中的表达量存在差异。Cry1Ac基因与NptⅡ基因呈现紧密连锁关系,检测样本中仍有2.4%的个体发生了分离。该结果结合其丰产性可为定株选择稳定转基因抗虫育种材料提供依据。 展开更多

关键词 转基因抗虫棉 湘杂棉22号 CRY1AC基因 nptⅱ基因 ELISA检测 遗传稳定性

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电激法将外源基因导入三种植物的组织细胞

11

作者 李宝健 石和平 柯遐义 《中山大学学报论丛》 1989年第4期73-78,共6页

用自制的电容放电式电激系统,将质粒pLGVneo2103上的NPTⅡ基因直接导入到烟草叶片组织细胞和玉米、大豆的愈伤组织细胞中。经过一定时间的卡那霉素选择后,在转化而来的烟草叶片愈伤组织上得到了绿色小苗。经NPTⅡ检测表明,在转化后的玉... 用自制的电容放电式电激系统,将质粒pLGVneo2103上的NPTⅡ基因直接导入到烟草叶片组织细胞和玉米、大豆的愈伤组织细胞中。经过一定时间的卡那霉素选择后,在转化而来的烟草叶片愈伤组织上得到了绿色小苗。经NPTⅡ检测表明,在转化后的玉米和大豆愈伤组织细胞中,外源基因有较明显的表达。这种直接将外源基因导入完整的植物细胞的技术,可以避免因原生质体培养而引起的一系列问题,且在转化受体方面不存在农杆菌Ti质粒介导法所有的物种限制,可以期望,它将在植物基因工程,特别是农作物的基因转化方面得到越来越广泛的应用。 展开更多

关键词 电激法 愈伤组织 pLGV NEO 2103 nptⅱ基因

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禾谷类作物T-DNA插入突变体库专用载体pBA9N的构建

12

作者 丁博 白子彧 +3 位作者 王俊斌 李明 蒲鹏 谢晓东 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2014年第7期10-13,共4页

为进行小麦等禾谷类作物的突变体库构建,以pBRACT806载体为基本骨架,通过Gateway克隆技术,将选择标记基因NptⅡ,置于玉米ubiquitin启动子的控制之下,构建了pBA9N载体。该载体适于在单子叶植物中进行遗传转化,且小仅有6 478bp,易于操作;... 为进行小麦等禾谷类作物的突变体库构建,以pBRACT806载体为基本骨架,通过Gateway克隆技术,将选择标记基因NptⅡ,置于玉米ubiquitin启动子的控制之下,构建了pBA9N载体。该载体适于在单子叶植物中进行遗传转化,且小仅有6 478bp,易于操作;此载体与psoup载体共转化,保证了T-DNA片段高效整合到植物基因组中。应用该载体构建突变体群体,可稳定持续高效表达NptⅡ抗性标记基因,易于检测。 展开更多

关键词 禾谷类作物 pBA9N T-DNA 突变体库 ubiquitin启动子 nptⅱ基因

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nptⅡ基因在芥菜型油菜中的遗传规律

13

作者 董五辈 李学宝 +1 位作者 金 波 陈光荣 《河南科学》 1996年第S1期41-45,共5页

研究了转基因油菜Ｒ０、Ｒ１、Ｒ２代的Ｋｍ抗性。试验结果表明：芥菜型油菜Ｒ０的１，５，６，７，８，１０号无性系可抗Ｋｍ５０ｍｇ／Ｌ，其余的均抗Ｋｍ３５ｍｇ／Ｌ。Ｒ１种子在Ｋｍ２０ｍｇ／Ｌ的生根培养基上进行生根抗性试验，... 研究了转基因油菜Ｒ０、Ｒ１、Ｒ２代的Ｋｍ抗性。试验结果表明：芥菜型油菜Ｒ０的１，５，６，７，８，１０号无性系可抗Ｋｍ５０ｍｇ／Ｌ，其余的均抗Ｋｍ３５ｍｇ／Ｌ。Ｒ１种子在Ｋｍ２０ｍｇ／Ｌ的生根培养基上进行生根抗性试验，生根与不生根的比例经适合性检验（ｘ２检验）有１０个无性系符合孟德尔单基因分离的遗传规律，只有两个无性系不符合这一规律，出现了较高的抗性苗比例（３４：２；４０：６）。Ｒ２代共做了７个单株的种子抗性试验，其中６个单株的种子出现３：１的分离比，一个单株没有发生分离，种子全部可抗Ｋｍ。 展开更多

关键词 芥菜型油菜 nptⅱ基因 遗传规律

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利用花粉管通道途径获得转基因小麦 被引量：9

14

作者 刘志方 陈穗云 +2 位作者 夏光敏 陈永喆 陈惠民 《山东大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期84-89,共6页

将带有NPT Ⅱ基因的质粒PGV用花粉管通道途径转化小麦烟农 1 0 3,共结实 1 0 2 5粒 ,其中有 71 8粒种子可以萌发出幼苗 ,在这 71 8株幼苗中 ,经卡那霉素筛选 ,得到 75棵绿色抗性植株 ,提取这些抗性植株的叶片总DNA ,作NPT Ⅱ基因的PCR扩... 将带有NPT Ⅱ基因的质粒PGV用花粉管通道途径转化小麦烟农 1 0 3,共结实 1 0 2 5粒 ,其中有 71 8粒种子可以萌发出幼苗 ,在这 71 8株幼苗中 ,经卡那霉素筛选 ,得到 75棵绿色抗性植株 ,提取这些抗性植株的叶片总DNA ,作NPT Ⅱ基因的PCR扩增 ,有 37株为阳性 ,转化率为 5.1 6% ,对其中 9个PCR阳性植株的Southern杂交检测结果表明它们均为转基因植株 . 展开更多

关键词 小麦 npt-ⅱ基因 花粉管途径 转基因小麦植株

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带npt-Ⅱ基因转基因水稻快速检测技术的建立 被引量：14

15

作者 王紫萱 易自力 +4 位作者 王志成 蒋建雄 覃静萍 张昊 谭炎宁 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期499-507,共9页

以转溶菌酶基因水稻纯系材料中花9号(ZH9(R))及其受体品种中花9号(ZH9(CK))为材料,以ZH9(R)中携带的npt-Ⅱ基因作为辅助筛选标记,利用抗生素对其进行处理,建立了一套快速检测带npt-Ⅱ基因转基因水稻的技术体系。使用不同浓度的卡那霉素(... 以转溶菌酶基因水稻纯系材料中花9号(ZH9(R))及其受体品种中花9号(ZH9(CK))为材料,以ZH9(R)中携带的npt-Ⅱ基因作为辅助筛选标记,利用抗生素对其进行处理,建立了一套快速检测带npt-Ⅱ基因转基因水稻的技术体系。使用不同浓度的卡那霉素(Kanamycin,Kan)和G418溶液将ZH9(R)和ZH9(CK)成株离体叶片于室内室温下置于培养皿中浸泡处理,通过观察叶片变化,确定G418为检测带npt-Ⅱ基因转基因水稻的最佳抗生素,将G418(溶液)80mg/L浓度(处理4天)作为检测该类转基因水稻成株离体叶片的临界浓度。进一步用G418对ZH9(R)和ZH9(CK)种子、幼胚和幼苗进行了不同处理。确定:(1)G418(溶液)300mg/L浓度(处理7天)作为检测该类转基因水稻种子的临界浓度;(2)G418(1/2MS+0.5mg/L6-BA+1.5%蔗糖培养基)200mg/L浓度(处理10天)作为检测该类转基因水稻幼胚的临界浓度;(3)G418(1/2MS+0.5mg/L6-BA+1.5%蔗糖培养基)150mg/L浓度(处理12天)作为检测该类转基因水稻幼苗的临界浓度,并且通过PCR方法证实了上述结论。将这些结论应用于ZH9(R)转育后代叶片、种子、幼胚和幼苗群体的检测,检测效果都非常明显。这为带npt-Ⅱ基因转基因水稻建立了一套简便、直观且准确的检测方法。 展开更多

关键词 转基因水稻 npt-ⅱ基因 G418 快速检测

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根癌农杆菌介导的葡萄遗传转化体系的优化 被引量：9

16

作者 董志刚 马小河 +5 位作者 王国平 赵旗峰 李晓梅 谭伟 王敏 唐晓萍 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1169-1174,共6页

以梅鹿辄葡萄离体叶片为转化材料,对根癌农杆菌介导的遗传转化过程中涉及的几个主要影响因素：抗菌素羧苄青霉素（Carb）的浓度、乙酰丁香酮（AS）的浓度、农杆菌菌液的浓度及卡那霉素筛选压进行优化。结果表明,抗菌素羧苄青霉素在浓度3... 以梅鹿辄葡萄离体叶片为转化材料,对根癌农杆菌介导的遗传转化过程中涉及的几个主要影响因素：抗菌素羧苄青霉素（Carb）的浓度、乙酰丁香酮（AS）的浓度、农杆菌菌液的浓度及卡那霉素筛选压进行优化。结果表明,抗菌素羧苄青霉素在浓度300mg·L^-1下即可有效去除农杆菌,且对胚性愈伤组织的分化的影响不大;乙酰丁香酮（AS）的最适浓度为50μm·L^-1;农杆菌菌液的浓度控制在OD6000.5～0.7时转化率最高;卡那霉素的筛选浓度控制在100mg·L^-1。利用优化的农杆菌介导法进行转化,对再生苗进行PCR检测,结果显示,外源基因已导入了葡萄基因组中。本研究优化了农杆菌介导的葡萄遗传转化影响因素,并获得了转基因植株。 展开更多

关键词 葡萄 根癌农杆菌 遗传转化 npt-ⅱ基因

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转溶菌酶基因水稻稻米毒理及致畸作用试验 被引量：3

17

作者 姚春馨 许明辉 +3 位作者 李进斌 谭学林 田文忠 唐祚舜 《西南农业学报》 CSCD 2006年第B09期103-110,共8页

通过小鼠急性毒性试验、大鼠长期毒性试验、小鼠微核试验和精子致畸试验对转溶菌酶基因水稻稻米的毒性及致畸作用进行了初步的评价。转基因大米淀粉灌胃小鼠，剂量相当于成人每日食用2250g，连续7d观察，动物全部存活，表现正常，未见... 通过小鼠急性毒性试验、大鼠长期毒性试验、小鼠微核试验和精子致畸试验对转溶菌酶基因水稻稻米的毒性及致畸作用进行了初步的评价。转基因大米淀粉灌胃小鼠，剂量相当于成人每日食用2250g，连续7d观察，动物全部存活，表现正常，未见动物出现中毒反应，小鼠灌胃转基因大米的最大耐受量MTD≥37．5g／kg。转基因大米粉分别以15g／kg／d和7．5g／kg／d2个剂量，相当于成人日食用量900g和450g，连续94d灌胃大鼠，灌胃期间动物的行为活动、外观体征、饮食、粪便、体重均无异常。5项血液学检查和13项生化指标检测及处死1／2的动物尸体解剖观察、脏器系数及脏器病理学检查，结果均属正常，与空白对照无显著差异；剩余1／2的动物留存观察2周，各项观察指标、血液、生化及病理检测也无异常。转基因大米粉以15g／kg和7．5g／kg2个剂量分别灌胃小鼠，未发现对小鼠骨髓细胞微核和精子畸形发生率有不良影响。本试验结果提示携带溶菌酶基因、NPT-Ⅱ标记基因等外源DNA的转基因大米无明显的毒性和致畸作用。 展开更多

关键词 转基因水稻 溶菌酶基因 npt—ⅱ基因 安全性评价 毒理和致畸试验

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应用G418催芽胁迫体系鉴定携带npt-Ⅱ基因的转育水稻纯系的研究 被引量：1

18

作者 谭炎宁 蒋建雄 +4 位作者 段美娟 曾慧杰 肖亮 覃静萍 易自力 《湖南农业科学》 2009年第7期1-4,共4页

研究了G418胁迫条件下转育后代的发芽特性和长根类比率,筛选获得了高抗G418的抗性株系,并进行其npt-Ⅱ基因及目的基因的检测与遗传分析。结果表明,转育株系如BM-3、BM-10、BM-13具有高发芽率(>90%)、高生根率(>95%)、低死亡率(<... 研究了G418胁迫条件下转育后代的发芽特性和长根类比率,筛选获得了高抗G418的抗性株系,并进行其npt-Ⅱ基因及目的基因的检测与遗传分析。结果表明,转育株系如BM-3、BM-10、BM-13具有高发芽率(>90%)、高生根率(>95%)、低死亡率(<10%)和高长根比率(约为90%),经PCR结果发现这些株系内各单株都含有npt-Ⅱ基因及溶菌酶基因,确为转基因纯合体。进一步证实了G418胁迫催芽技术是可行和实用的,对于npt-Ⅱ基因转育纯系的筛选有重要意义。 展开更多

关键词 G418 npt-ⅱ基因 纯合体 催芽胁迫体系

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含Gus基因的工程质粒转化马铃薯细胞

19

作者 应燕如 叶建江 +2 位作者 杨金水 葛扣麟 汪训明 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1992年第3期350-354,共5页

应用“三亲株杂交”法,将含有卡那霉素抗性基因(NPT-Ⅱ基因)和β-葡糖苷酸酶(Gus)基因的双向质粒pBI121转移到根癌农杆菌LBA4404(内含mini-Ti质粒中),得到由mini-Ti质粒和pBI121组成的双元载体系统(LBA4404/pBI121).用类似叶盘转化的茎... 应用“三亲株杂交”法,将含有卡那霉素抗性基因(NPT-Ⅱ基因)和β-葡糖苷酸酶(Gus)基因的双向质粒pBI121转移到根癌农杆菌LBA4404(内含mini-Ti质粒中),得到由mini-Ti质粒和pBI121组成的双元载体系统(LBA4404/pBI121).用类似叶盘转化的茎盘转化法,将农杆菌LBA4404*pBI121感染马铃薯无菌苗茎段.通过选择培养基筛选,获得具有K_M^R表型的愈伤组织,且能分化成芽.经Gus和NPT-Ⅱ分析,表明外源基因已在抗性愈伤组织和再生芽中表达. 展开更多

关键词 根癌土壤农杆菌 质粒 转化 马铃薯 GUS基因 npt-ⅱ基因 三亲株杂交法

原文传递

应用NPT-Ⅱ基因筛选携带溶菌酶转基因水稻花粉植株初探

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作者 许明辉 赵丰萍 +1 位作者 刘薇 杨敏 《云南农业科技》 2003年第B06期57-59,共3页

对转溶菌酶基因水稻品系D2—1—2与5个品种杂交的F1代花粉进行离体培养，用100mg／L的抗生素G418对诱导的愈伤组织进行胁迫继代培养，抗性愈伤组织分化的花粉植株中携带溶菌酶转基因的个体比例平均为77．3％，未经抗生素胁迫培养的愈伤... 对转溶菌酶基因水稻品系D2—1—2与5个品种杂交的F1代花粉进行离体培养，用100mg／L的抗生素G418对诱导的愈伤组织进行胁迫继代培养，抗性愈伤组织分化的花粉植株中携带溶菌酶转基因的个体比例平均为77．3％，未经抗生素胁迫培养的愈伤组织分化的植株携带转基因的个体比例为47．71％，携带转基因个体比例明显提高，结果表明与转基因紧密连锁的NPT—Ⅱ选择基因在花药培养育种中可再度利用来提高后代群体中携带转基因个体的比例，从而提高育种效率。 展开更多

关键词 npt-ⅱ基因 基因筛选 溶菌酶 转基因水稻 花粉 植株 花药培养

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