目的制备兔抗GⅡ.17型诺如病毒(GⅡ.17norovirus,GⅡ.17 NoV)病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)多克隆抗体(兔抗GⅡ.17 NoV VLPs多克隆抗体),用其建立组织血型抗原(histo-blood group antigen,HBGA)-GⅡ.17 NoV VLPs阻断试验,并对...目的制备兔抗GⅡ.17型诺如病毒(GⅡ.17norovirus,GⅡ.17 NoV)病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)多克隆抗体(兔抗GⅡ.17 NoV VLPs多克隆抗体),用其建立组织血型抗原(histo-blood group antigen,HBGA)-GⅡ.17 NoV VLPs阻断试验,并对其进行初步应用。方法制备并纯化GⅡ.17 NoV VLPs,采用SDS-PAGE、电镜观察和粒径检测方法对其进行鉴定。将其免疫家兔制备兔抗GⅡ.17 NoV VLPs多克隆抗体,经Western blot对其进行鉴定,并用ELISA检测其效价及特异性。筛选与GⅡ.17 NoV VLPs结合力强的唾液HBGA受体类型,优化GⅡ.17NoV VLPs质量浓度及多克隆抗体稀释度,用兔抗GⅡ.17 NoV VLPs多克隆抗体建立HBGA-GⅡ.17 NoV VLPs阻断试验,并进行特异性验证及初步应用。结果 GⅡ.17 NoV VLPs经检测纯度为95%,且颗粒形态完整,粒径均一。制备的多克隆抗体在Western blot可见特异性条带,效价可达1∶25 600 000,并对其他基因型(GⅠ.2、GⅠ.7、GⅡ.3、GⅡ.4、GⅡ.7)VLPs的交叉反应较弱。GⅡ.17 NoV VLPs和A、B、O和AB 4种血型的唾液HBGA均能结合,差异无统计学意义(P>0.05);以GⅡ.17 NoV VLPs质量浓度为0.25μg/m L,多克隆抗体的稀释度为1∶160 000建立了HBGA-GⅡ.17 NoV VLPs阻断试验,并应用该方法对不同剂量GⅡ.17 NoV VLPs免疫的小鼠血清进行了半数阻断滴度检测。结论成功制备了高效价兔抗GⅡ.17 NoV VLPs多克隆抗体,建立了HBGA-GⅡ.17NoV VLPs阻断试验,且该方法特异性良好,可用于GⅡ.17 NoV VLPs免疫效果的评价。展开更多
文摘目的了解青岛市GⅡ.15型诺如病毒的分子流行病学特征。方法收集2016年1月至2018年12月青岛市疑似诺如病毒腹泻患者的粪便标本1412份,采用实时定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)进行诺如病毒检测,反转录PCR扩增诺如病毒可读框1和2结合区基因片段和VP1基因全长,进行序列测定、系统进化分析和同源建模。结果共7株GⅡ.15型诺如病毒株被检出,散发性病例4例和聚集性疫情1起,其VP1基因高度同源,与早期毒株J23/US/1999相比变异不大。青岛市GⅡ.15型毒株之间的氨基酸差异主要有位点第300位天冬酰胺和天冬氨酸的转换及第302位脯氨酸和丝氨酸的转换。同源建模推测,GⅡ.15型毒株VP1蛋白质由S区和P区(P1区包括第224位至276位和第431位至555位;P2区包括第277位至430位)组成。S区包含8个反平行β-夹心和2个α-螺旋;P1区包含1个α-螺旋和7个β-折叠片;P2区中6个反平行β-折叠形成桶状结构。P2区具有精氨酸-甘氨酸-缬氨酸模体(第289至291位)和第313位谷氨酰胺、第349位天冬酰胺、第389位谷氨酰胺3个特异性位点。天冬酰胺-甘氨酸-精氨酸模体位于精氨酸-甘氨酸-缬氨酸模体上游22个氨基酸处(第265至267位)。与人组织性血型抗原(histo-blood group antigens,HBGA)结合界面的主要特征位点分为位点Ⅰ(丝氨酸-苏氨酸-精氨酸-丙氨酸-组氨酸,第357至361位)、位点Ⅱ(第388位天冬氨酸)和位点Ⅲ(甘氨酸-甘氨酸,第454至455位),可能与GⅡ.4型VA387毒株和HBGA结合模式类似。结论GⅡ.15型诺如病毒虽然变异不大,但仍具有成为流行株的风险,需要对其加强监控和进一步研究。
文摘目的制备兔抗GⅡ.17型诺如病毒(GⅡ.17norovirus,GⅡ.17 NoV)病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)多克隆抗体(兔抗GⅡ.17 NoV VLPs多克隆抗体),用其建立组织血型抗原(histo-blood group antigen,HBGA)-GⅡ.17 NoV VLPs阻断试验,并对其进行初步应用。方法制备并纯化GⅡ.17 NoV VLPs,采用SDS-PAGE、电镜观察和粒径检测方法对其进行鉴定。将其免疫家兔制备兔抗GⅡ.17 NoV VLPs多克隆抗体,经Western blot对其进行鉴定,并用ELISA检测其效价及特异性。筛选与GⅡ.17 NoV VLPs结合力强的唾液HBGA受体类型,优化GⅡ.17NoV VLPs质量浓度及多克隆抗体稀释度,用兔抗GⅡ.17 NoV VLPs多克隆抗体建立HBGA-GⅡ.17 NoV VLPs阻断试验,并进行特异性验证及初步应用。结果 GⅡ.17 NoV VLPs经检测纯度为95%,且颗粒形态完整,粒径均一。制备的多克隆抗体在Western blot可见特异性条带,效价可达1∶25 600 000,并对其他基因型(GⅠ.2、GⅠ.7、GⅡ.3、GⅡ.4、GⅡ.7)VLPs的交叉反应较弱。GⅡ.17 NoV VLPs和A、B、O和AB 4种血型的唾液HBGA均能结合,差异无统计学意义(P>0.05);以GⅡ.17 NoV VLPs质量浓度为0.25μg/m L,多克隆抗体的稀释度为1∶160 000建立了HBGA-GⅡ.17 NoV VLPs阻断试验,并应用该方法对不同剂量GⅡ.17 NoV VLPs免疫的小鼠血清进行了半数阻断滴度检测。结论成功制备了高效价兔抗GⅡ.17 NoV VLPs多克隆抗体,建立了HBGA-GⅡ.17NoV VLPs阻断试验,且该方法特异性良好,可用于GⅡ.17 NoV VLPs免疫效果的评价。
