期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到8篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
弓形虫表面主要抗原1(SAG1)蛋白的原核表达与鉴定
1
作者 代琴 骆璐 +5 位作者 董春霞 凌洪权 吴胜昔 曾政 秦萍 韦广苗 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第12期69-73,128,共6页
为了实现弓形虫主要表面抗原1(surface antigen 1,SAG1)蛋白在原核表达系统中的高效表达,试验根据GenBank中弓形虫SAG1基因序列(登录号为S76248.1)及大肠杆菌密码子偏好性对目的基因序列进行优化设计,以pET-32a(+)为表达载体构建重组表... 为了实现弓形虫主要表面抗原1(surface antigen 1,SAG1)蛋白在原核表达系统中的高效表达,试验根据GenBank中弓形虫SAG1基因序列(登录号为S76248.1)及大肠杆菌密码子偏好性对目的基因序列进行优化设计,以pET-32a(+)为表达载体构建重组表达质粒pET32a(+)-SAG1,并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)对重组菌进行诱导,表达重组蛋白,通过优化诱导条件实现对重组蛋白的大量表达,使用NGC^(TM)层析纯化系统纯化重组蛋白,并分别以抗His标签单克隆抗体和犬弓形虫阳性血清作为一抗、羊抗鼠IgG-HRP和HRP-兔抗犬作为二抗对重组蛋白进行Western-blot鉴定。结果表明:重组表达质粒pET32a(+)-SAG1经双酶切分别在5 900 bp和1 020 bp处出现1条载体条带和1条目的基因条带,与预期结果相符;重组蛋白大小为55 ku且以包涵体的形式成功表达,当诱导条件为25℃、0.4 mmol/L IPTG诱导8 h时重组蛋白的表达量最高;纯化后的重组蛋白条带单一,纯度较高,3个样品质量浓度分别为0.409 5,0.368 5,0.451 9 mg/mL;表达的重组蛋白与抗His标签单克隆抗体和犬弓形虫阳性血清均能特异性结合。说明在大肠杆菌中成功表达了弓形虫SAG1重组蛋白,纯化后的重组蛋白纯度和质量浓度较高,且具有良好的反应原性。 展开更多
关键词 弓形虫 SAG1 原核表达 镍柱纯化 蛋白免疫印迹
原文传递
髓鞘调控因子的镍金属螯合纯化及影响因素研究
2
作者 鄢树枫 孙传龙 陈作宜 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS 北大核心 2024年第1期67-74,共8页
为研究髓鞘调控因子(myelin-gene regulatory factor,MYRF)的镍金属螯合层析纯化方法及其影响因素,以导入MYRF基因的BL21大肠埃希菌为宿主菌,设置不同浓度梯度的咪唑和EDTA洗脱进行镍金属螯合层析柱纯化,通过蛋白质浓度测定、考马斯亮... 为研究髓鞘调控因子(myelin-gene regulatory factor,MYRF)的镍金属螯合层析纯化方法及其影响因素,以导入MYRF基因的BL21大肠埃希菌为宿主菌,设置不同浓度梯度的咪唑和EDTA洗脱进行镍金属螯合层析柱纯化,通过蛋白质浓度测定、考马斯亮蓝染色和SDS-PAGE分析等方法分析差异,进一步研究蛋白质上清液与镍填料结合时间对MYRF蛋白纯化的影响。结果表明:咪唑洗脱获得的蛋白质浓度与洗脱液浓度呈正比,0.2 mol·L^(-1)的咪唑洗脱液可获得纯度较高的MYRF蛋白;而低浓度(0.05 mol·L^(-1))EDTA洗脱液虽可快速获得高浓度MYRF蛋白,但杂蛋白含量也较高;同时,MYRF蛋白浓度与结合时间呈正相关。综上,MYRF蛋白镍金属螯合层析受洗脱液种类、填料结合时间等多种因素影响,研究结果为MYRF蛋白纯化策略的选择和优化提供参考依据。 展开更多
关键词 镍柱 咪唑 EDTA 蛋白质纯化 结合时间
下载PDF
脱-γ-羧基凝血酶原蛋白的原核表达与鉴定
3
作者 龚吕鸿 徐丽 +5 位作者 刘雅楠 吴胜昔 许东 秦萍 韦广苗 曾鹏 《重庆理工大学学报（自然科学）》 CAS 北大核心 2023年第5期331-336,共6页
为实现脱-γ-羧基凝血酶原(des-γ-carboxy-prothrombin,DCP)在原核系统中高效表达,参考GenBank中发布的DCP基因CDS序列(LX095963),在保证DCP蛋白氨基酸序列正确的基础上,优化该基因的密码子;化学合成CDS序列基因,并将其融合至pET28a(+... 为实现脱-γ-羧基凝血酶原(des-γ-carboxy-prothrombin,DCP)在原核系统中高效表达,参考GenBank中发布的DCP基因CDS序列(LX095963),在保证DCP蛋白氨基酸序列正确的基础上,优化该基因的密码子;化学合成CDS序列基因,并将其融合至pET28a(+)质粒中,构建pET28a(+)/DCP重组质粒;将该质粒转化至感受态BL21(DE3)中进行诱导表达,利用Ni柱纯化DCP蛋白,进行DCP重组蛋白纯度检测、浓度测定及蛋白印迹分析。结果表明:重组质粒在1875 bp处的双酶切条带,经测序后与已优化的基因序列完全切合。重组菌的DCP蛋白表达最高时,诱导条件为25℃、IPTG终浓度为0.8 mmol/L、时间6 h;经Ni柱纯化后的DCP重组蛋白纯度较高,浓度达1.04 mg/mL;在72 kD处有明显的蛋白条带,切合预期。在大肠杆菌系统中成功表达出DCP蛋白,为后续DCP检测方法研究提供试剂参考。 展开更多
关键词 脱-Γ-羧基凝血酶原 Ni柱纯化 原核表达 蛋白免疫印迹
下载PDF
狂犬病病毒核衣壳蛋白的原核表达与鉴定
4
作者 谷志鹏 向梦玲 +5 位作者 凌洪权 骆璐 吴胜昔 董春霞 冉皑 郭宇 《重庆理工大学学报（自然科学）》 CAS 北大核心 2023年第2期344-349,共6页
为实现狂犬病病毒核衣壳蛋白在原核系统中高效表达,参考GenBank中发布的RV N基因序列(登录号为1489853),在不改变RV N蛋白氨基酸序列的情况下,对该基因的密码子进行优化,化学合成N基因,并将其克隆至原核表达载体pET28a(+)中,构建重组质... 为实现狂犬病病毒核衣壳蛋白在原核系统中高效表达,参考GenBank中发布的RV N基因序列(登录号为1489853),在不改变RV N蛋白氨基酸序列的情况下,对该基因的密码子进行优化,化学合成N基因,并将其克隆至原核表达载体pET28a(+)中,构建重组质粒pET28a(+)/RV N,将该质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,利用His-tag镍柱进行重组RV N蛋白的纯化,对纯化后的RV N蛋白进行SDS-PAGE鉴定及Western blot分析。结果表明:重组质粒双酶切后在1359 bp处有目的条带,经测序后与其所对应的已知基因序列完全相符,当重组菌在IPTG浓度0.1mmol/L、30℃诱导6 h,RV N蛋白表达量最高;经过镍柱纯化获得了RV N重组蛋白;BCA法测得重组RV N蛋白浓度达1.783 mg/mL;在51KD处可见明显的蛋白印迹,与预期目的条带相符;使用该方法成功在大肠杆菌系统高效表达了RV N蛋白,为后续狂犬病的检测与新型疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 N蛋白 原核表达 镍柱纯化 蛋白免疫印迹
下载PDF
禽流感病毒HA蛋白的原核表达与鉴定 被引量：3
5
作者 李令臣 侯力嘉 +6 位作者 吴胜昔 李俊萱 鲁友铭 徐缘 李志 曾政 梁望旺 《重庆理工大学学报（自然科学）》 CAS 北大核心 2019年第5期137-141,共5页
为了实现禽流感病毒血凝素(HA)蛋白在原核系统中高效表达,根据GenBank发表的HA(ID=DQ023145.1)基因序列,在不改变HA蛋白氨基酸序列的情况下,根据大肠杆菌密码子偏好性优化基因序列,化学合成HA全基因。将其克隆到pET28a(+)载体中,构建重... 为了实现禽流感病毒血凝素(HA)蛋白在原核系统中高效表达,根据GenBank发表的HA(ID=DQ023145.1)基因序列,在不改变HA蛋白氨基酸序列的情况下,根据大肠杆菌密码子偏好性优化基因序列,化学合成HA全基因。将其克隆到pET28a(+)载体中,构建重组质粒pET28a(+)-HA,转化至BL21工程菌进行诱导表达,利用His-tag镍柱纯化HA重组蛋白,并对纯化后的重组蛋白进行SDS-PAGE分析及Western-blot鉴定。结果表明:当重组菌株pET28a(+)-HA/BL21(DE3)诱导条件为30℃、IPTG浓度为1mmol/L诱导8h时,HA蛋白表达量最高;SDS-PAGE电泳显示经镍柱纯化后HA蛋白纯度较高,Westernblot实验发现在预期的70kD处有明显的蛋白印迹条带,说明已成功实现了在大肠杆菌中高效表达禽流感病毒HA蛋白,为后续开展禽流感检测方法及疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒 血凝素蛋白 原核表达 镍柱纯化 蛋白免疫印迹
下载PDF
甲胎蛋白AFP的原核表达、纯化及鉴定 被引量：3
6
作者 王桂玲 冉皑 +3 位作者 吴胜昔 谷志鹏 黄蕾 龚吕鸿 《重庆理工大学学报（自然科学）》 CAS 北大核心 2021年第10期250-256,共7页
为实现甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)在原核系统中高效表达,在GenBank上查找AFP全基因序列(GenBank登录号:NM_001134.2),分析AFP基因序列及大肠杆菌密码子偏好性优化,化学合成AFP全基因。以pET28a(+)作为原核表达载体并转化至BL21(D... 为实现甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)在原核系统中高效表达,在GenBank上查找AFP全基因序列(GenBank登录号:NM_001134.2),分析AFP基因序列及大肠杆菌密码子偏好性优化,化学合成AFP全基因。以pET28a(+)作为原核表达载体并转化至BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达。利用镍柱纯化AFP重组蛋白,并对纯化的AFP重组蛋白进行SDS-PAGE纯度分析、BCA蛋白浓度测定、Western-blot特异性鉴定。结果表明:AFP重组质粒经过Nde I、Xhol I双酶切鉴定,在1875 bp处出现特异性条带,与预期相符合;当诱导条件为30℃,0.1 mM的IPTG,诱导8 h,AFP重组蛋白可大量表达;BCA法测得AFP重组蛋白浓度达0.9239 mg/mL;纯化后的AFP重组蛋白与市售的AFP单抗进行Western blot鉴定,结果显示在75 kD处有明显的蛋白印迹,pET28a(+)/BL21(DE3)空白组无条带,表明AFP重组蛋白可在大肠杆菌中高效表达,且经Ni柱纯化后具有良好的特异性。研究实现了AFP重组蛋白在大肠杆菌中高效表达,为后续AFP的检测、以AFP为分子靶点的抗癌药物筛选奠定了基础。 展开更多
关键词 肝癌 甲胎蛋白 原核表达 镍柱纯化 蛋白免疫印迹
下载PDF
LbCpf1基因的原核表达、纯化与体外切割检测
7
作者 吕一凡 李更东 +3 位作者 薛楠 吕国梁 时邵辉 王春生 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期41-48,共8页
目的:为获得具有体外切割活性的LbCpf1蛋白。方法:将毛螺菌科细菌ND2006(Lachnospiraceae bacterium ND2006)的LbCpf1基因编码区连接至pHis*6(IV),构建原核表达质粒CRISPR-LbCpf1-6*His。将该重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导... 目的:为获得具有体外切割活性的LbCpf1蛋白。方法:将毛螺菌科细菌ND2006(Lachnospiraceae bacterium ND2006)的LbCpf1基因编码区连接至pHis*6(IV),构建原核表达质粒CRISPR-LbCpf1-6*His。将该重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导目的蛋白表达,经镍柱亲和层析纯化、透析除盐和凝胶电泳检测等步骤获得重组蛋白,进行体外切割试验鉴定重组蛋白切割活性。结果:双酶切鉴定和测序结果表明成功构建重组质粒CRISPR-LbCpf1-6*His,经转化后获得含有重组质粒CRISPR-LbCpf1-6*His的BL21(DE3)蛋白表达菌株。将菌株接种于37℃,160 r/min,IPTG终浓度为0.5 mmol/L的条件下诱导5 h,最终镍柱纯化除盐后的LbCpf1蛋白终浓度可达400 ng/μl,在体外适宜条件下,该重组蛋白可与成熟的crRNA结合切断标靶DNA。结论:获得的高纯度LbCpf1蛋白具有体外切割活性,可用于后续基因编辑研究。 展开更多
关键词 LbCpf1蛋白 原核表达 镍柱纯化 体外切割检测
原文传递
麻痹性贝类毒素受体蛋白Saxiphilin的克隆与表达
8
作者 曹玲 吕敬章 +6 位作者 丁晶 葛丽雅 刘慧玲 张恒 杨凯 汤慕瑾 岳振峰 《食品安全质量检测学报》 CAS 2014年第6期1739-1745,共7页
目的麻痹性贝类毒素受体蛋白Saxiphilin可特异性结合麻痹性贝类毒素,本文采用杆状病毒表达载体系统对Saxiphilin进行体外表达研究。方法从牛蛙肝脏克隆得到ssziphilin基因(N端含有自身分泌信号肽),利用特异引物使其C端带上组氨酸标签。... 目的麻痹性贝类毒素受体蛋白Saxiphilin可特异性结合麻痹性贝类毒素,本文采用杆状病毒表达载体系统对Saxiphilin进行体外表达研究。方法从牛蛙肝脏克隆得到ssziphilin基因(N端含有自身分泌信号肽),利用特异引物使其C端带上组氨酸标签。结果使用杆状病毒表达载体系统构建带有目的基因的重组病毒,用病毒感染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞Sf9以表达Saxiphilin,通过优化细胞培养基中胎牛血清含量及感染时间,确定使用无血清培养基培养,重组病毒感染Sf9细胞72 h时,培养基中可溶性目的蛋白表达量最大。结论通过镍柱纯化得到Saxiphilin蛋白,以期将此蛋白进一步用于麻痹性贝类毒素的检测。 展开更多
关键词 麻痹性贝类毒素受体蛋白 杆状病毒表达载体系统 镍柱亲和纯化
下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部