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A型肉毒抗毒素ELISA方法的建立及验证
1
作者 张玲玲 段丽娟 +5 位作者 刘建光 李育合 谢小荣 苏慧 梁凌宇 高建军 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期525-530,共6页
目的:建立定量检测A型肉毒抗毒素效价的酶联免疫吸附法(ELISA法),并进行验证。方法:以A型肉毒类毒素为包被抗原包被酶标板,封闭后加入稀释的血清样品,以辣根过氧化物酶标记的兔抗马IgG(IgG-HRP)作为酶标抗体,加入四甲基联苯胺显色剂(TMB... 目的:建立定量检测A型肉毒抗毒素效价的酶联免疫吸附法(ELISA法),并进行验证。方法:以A型肉毒类毒素为包被抗原包被酶标板,封闭后加入稀释的血清样品,以辣根过氧化物酶标记的兔抗马IgG(IgG-HRP)作为酶标抗体,加入四甲基联苯胺显色剂(TMB)显色10~15 min, 2 mol·L^(-1)硫酸终止反应,于酶标仪上读取A_(450 nm)值,以标准曲线样品浓度的对数(X)为横坐标,A_(450 nm)值(Y)为纵坐标绘制标准曲线,将待测血清样品A_(450 nm)值代入曲线方程即可得到血清样品浓度,乘以稀释倍数即为血清样品效价。结果:在优化的条件下,该方法具有较高的特异性,除了与A型肉毒抗毒素血清反应外,对B、C、D、E、F型肉毒抗毒素血清均无交叉反应;在线性范围50~400 mIU·mL^(-1)时线性关系良好,r>0.990 0;准确度介于80%~120%;精密度(重复性和中间精密度)RSD<20%;采用该方法测定20批A型肉毒抗毒素血清的效价范围在525~2 450 IU·mL^(-1),中和试验法检测范围在675~2 400 IU·mL^(-1),二者的相关系数r=0.906 0(P<0.001),呈显著性正相关。结论:建立的ELISA定量检测方法在实验室条件下可以取得稳定的结果,为A型肉毒抗毒素效价的测定提供了一种简便的体外检测方法。 展开更多
关键词 A型肉毒抗毒素 ELISA方法 小鼠中和试验法 定量检测 效价测定 验证
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穿心莲内酯对细菌内毒素所致脓毒症的体内外拮抗研究
2
作者 童凌斐 胡建新 《药品评价》 CAS 2022年第23期1433-1436,共4页
目的:观察穿心莲内酯的体内外抗内毒素作用。方法:首先配置80、40和20μg/mL的穿心莲内酯浓度,分别加入10 ng/mL的内毒素温孵进行中和试验,利用鲎试剂定量测定内毒素含量,计算不同浓度的穿心莲内酯对内毒素的清除率,比较其体外抗内毒素... 目的:观察穿心莲内酯的体内外抗内毒素作用。方法:首先配置80、40和20μg/mL的穿心莲内酯浓度,分别加入10 ng/mL的内毒素温孵进行中和试验,利用鲎试剂定量测定内毒素含量,计算不同浓度的穿心莲内酯对内毒素的清除率,比较其体外抗内毒素的作用。其次配置80、40和20μg/mL的穿心莲内酯浓度,分别对10 ng/mL的内毒素刺激RAW264.7细胞所表达的相关因子进行抑制实验。最后配置160、80和40μg/mL的穿心莲内酯浓度,对内毒素攻击小鼠进行保护实验。结果:体外80、40和20μg/mL的穿心莲内酯浓度分别对内毒素中和试验对应的清除率为78.3%、30.8%和20.6%,差异有统计学意义;80、40和20μg/mL的穿心莲内酯浓度对RAW264.7细胞所表达的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血清炎症因子白介素-6(IL-6)水平均有不同程度的降低,高浓度的穿心莲内酯降低程度最高;不同浓度的穿心莲内酯组能显著降低内毒素血症小鼠TNF-α和IL-6水平。结论:不同浓度的穿心莲内酯在体内外均有不同程度的抗内毒素作用,相对地,浓度越高抗内毒素效果更好。 展开更多
关键词 穿心莲内酯 内毒素类 鲎试验 中和试验 体内外拮抗试验 脓毒症 昆明小鼠
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