来源于Bacillus subtilis的中性植酸酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量：41

1

作者 姚斌 袁铁铮 +4 位作者 王元火 操时树 王亚茹 史秀云 范云六 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期11-15,共5页

通过PCR的方法从Bacillussubtilis基因组中克隆了中性植酸酶基因nphy ,DNA全序列分析表明其结构基因全长 115 2个核苷酸 (编码 383个氨基酸 ) ,5′端有一编码 2 6个氨基酸的信号肽序列。去除信号肽编码序列的nphy克隆到大肠杆菌IPTG诱... 通过PCR的方法从Bacillussubtilis基因组中克隆了中性植酸酶基因nphy ,DNA全序列分析表明其结构基因全长 115 2个核苷酸 (编码 383个氨基酸 ) ,5′端有一编码 2 6个氨基酸的信号肽序列。去除信号肽编码序列的nphy克隆到大肠杆菌IPTG诱导表达载体pTYB40上 ,在大肠杆菌中得到了高效表达 ,表达量达到大肠杆菌可溶性蛋白的 40 %以上 ,表达产物具有生物学活性 ,证实了克隆到的中性植酸酶的编码基因有正常的生物学功能。 展开更多

关键词 中性植酸酶 基因克隆 高效表达 大肠杆菌

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枯草芽孢杆菌中性植酸酶的纯化和酶学性质 被引量：39

2

作者 王亚茹 姚斌 +4 位作者 曾虹 史秀云 操时树 袁铁铮 范云六 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期198-203,共6页

从土壤中分离到了产中性植酸酶的枯草芽孢杆菌菌株并对所产植酸酶进行了分离纯化。此中性植酸酶的反应最适 pH为 7 5,最适温度为 55℃ ,在 37℃下以植酸钠为底物的Km值为 0 1 9mmol/L ,植酸酶活性依赖Ca2 +的存在。酶蛋白的分子量大小... 从土壤中分离到了产中性植酸酶的枯草芽孢杆菌菌株并对所产植酸酶进行了分离纯化。此中性植酸酶的反应最适 pH为 7 5,最适温度为 55℃ ,在 37℃下以植酸钠为底物的Km值为 0 1 9mmol/L ,植酸酶活性依赖Ca2 +的存在。酶蛋白的分子量大小约为 45kD ,纯酶蛋白N端序列为Lys His Lys Leu Ser Asp Pro Tyr His Phe Thr。 展开更多

关键词 枯草芽孢杆菌 中性植酸酶 酶学性质 纯化

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中性植酸酶在豆粕型饲料中替代磷酸二氢钙对花鲈生长及磷代谢的影响 被引量：26

3

作者 罗琳 吴秀峰 +3 位作者 薛敏 曹海宁 柏文东 姚斌 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期33-39,共7页

本文旨在研究豆粕型饲料中用中性植酸酶替代不同水平的磷酸二氢钙,对花鲈(Lateolabrax japonicus)生长和磷代谢及利用的影响。以(2.52±0.01)g的花鲈为试验对象,用中性植酸酶分别替代试验用的豆粕型饲料中60%(PE6)、80%(PE8)和100%(... 本文旨在研究豆粕型饲料中用中性植酸酶替代不同水平的磷酸二氢钙,对花鲈(Lateolabrax japonicus)生长和磷代谢及利用的影响。以(2.52±0.01)g的花鲈为试验对象,用中性植酸酶分别替代试验用的豆粕型饲料中60%(PE6)、80%(PE8)和100%(PET)的磷酸二氢钙,每个替代水平饲料中分别设置1000FTU/kg(PE610,PE810,PET10)和1500FTU/kg(PE615,PE815,PET15)2个梯度。8周的养殖试验结果显示,在豆粕型饲料中用中性植酸酶替代磷酸二氢钙后,对各试验组花鲈的生长、鱼体成分和蛋白质消化率均无显著影响(P>0.05);但PE615和PE815组的干物质消化率显著高于对照组(P<0.05),PE815组的脂肪消化率显著高于PE610、PET10和PET15组(P<0.05),而PE615和PE815的总磷消化率显著高于对照组、PE610组和PET15组的(P<0.05)。各试验组的总磷摄入量、表观磷的摄入量、粪磷和非粪磷的排出量均随试验料中磷酸二氢钙添加量的减少而显著降低(P<0.05),而除PE610和PE815以外的各试验组的总磷储积率却显著高于对照组(P<0.05)。根据本试验的结果,在含有30.5%豆粕的花鲈饲料中添加一定量的中性植酸酶同时减少磷酸二氢钙的添加量后,仍能显著提高饲料中磷的消化和利用(P<0.05)。中性植酸酶的添加量以1000FTU/kg饲料为宜,其作用相当于12g/kg的磷酸二氢钙。 展开更多

关键词 花鲈(Lateolabrax japronicus) 中性植酸酶 磷酸二氢钙

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无鱼粉低磷饲料中添加中性蛋白酶和植酸酶对建鲤生长及营养物质利用的影响 被引量：8

4

作者 张晓清 李小勤 +3 位作者 陈佳楠 徐怀兵 石泽 冷向军 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期1291-1300,共10页

在无鱼粉低磷饲料中添加中性蛋白酶、中性植酸酶,考察对建鲤(Cyprinus carpio var.Jian)生长、营养物质消化率和沉积率、血浆生化指标及肠道组织学的影响。配制含鱼粉5%和磷酸二氢钙1.5%的正对照饲料、无鱼粉饲料、无鱼粉低磷饲料(磷酸... 在无鱼粉低磷饲料中添加中性蛋白酶、中性植酸酶,考察对建鲤(Cyprinus carpio var.Jian)生长、营养物质消化率和沉积率、血浆生化指标及肠道组织学的影响。配制含鱼粉5%和磷酸二氢钙1.5%的正对照饲料、无鱼粉饲料、无鱼粉低磷饲料(磷酸二氢钙1.0%)和在无鱼粉饲料中添加175 mg/kg蛋白酶,在无鱼粉低磷饲料中添加175 mg/kg蛋白酶+300 mg/kg植酸酶的5组等蛋白饲料,饲喂初始体重为(52.5±2.0)g的建鲤10周。结果表明:对照组具有最高增重率和最低饲料系数(P<0.05),无鱼粉饲料和无鱼粉低磷饲料组的增重率、蛋白质和磷沉积率、蛋白质和钙消化率均显著下降(P<0.05);在无鱼粉饲料中添加蛋白酶后,提高了建鲤增重率13.1%(P<0.05),达到和对照组基本一致的水平;显著提高了蛋白质、钙消化率和肠绒毛高度,降低了饲料系数(P<0.05);在无鱼粉低磷饲料中添加蛋白酶和植酸酶后,显著提高了脂肪、蛋白质、磷沉积率和蛋白质、钙、磷消化率(P<0.05),增加了前肠绒毛长度和隐窝深度(P<0.05),提高了血浆磷浓度(P<0.05)。以上结果表明,在全植物性蛋白饲料中添加蛋白酶,在全植物蛋白的低磷饲料中同时添加蛋白酶和植酸酶可以促进建鲤生长,提高对营养物质的消化率和沉积率,促进肠道生长发育。 展开更多

关键词 中性蛋白酶 中性植酸酶 建鲤 生长

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植酸酶phyC基因表达载体的构建及其在E.coli中的表达 被引量：4

5

作者 邹立扣 王红宁 +1 位作者 吴琦 赵海霞 《生物技术》 CAS CSCD 2004年第3期11-14,共4页

以phyC -PUC18-T为模板 ,扩增出枯草芽孢杆菌中性植酸酶phyC基因 ,克隆至T载体中 ,经酶切鉴定及序列测定后重组入谷胱甘肽S -转移酶融合表达载体pGEX - 4T - 1中 ,转化大肠杆菌JM10 9,重组质粒在宿主JM10 9中有较好的稳定性 ,在无选择... 以phyC -PUC18-T为模板 ,扩增出枯草芽孢杆菌中性植酸酶phyC基因 ,克隆至T载体中 ,经酶切鉴定及序列测定后重组入谷胱甘肽S -转移酶融合表达载体pGEX - 4T - 1中 ,转化大肠杆菌JM10 9,重组质粒在宿主JM10 9中有较好的稳定性 ,在无选择压力条件下传代 4 5次基本保持稳定 ,0 1mMIPTG诱导后酶活测定结果表明 ,表达产物具有生物学活性。SDS -PAGE电泳结果显示出明显的特异性表达条带 ,相对分子量 (Mr)为 6 9kD ,30℃诱导 3h后 ,表达的目的蛋白量占菌体总蛋白的 4 7 4 %。 展开更多

关键词 枯草芽孢杆菌 phyC基因 中性植酸酶 表达载体 E.COLI

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紫外-氯化锂复合诱变选育中性植酸酶高产菌株 被引量：7

6

作者 王陶 李文 +1 位作者 尹龙 刘洋 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第13期217-220,共4页

以放射型根瘤杆菌为出发菌株,对其进行紫外-氯化锂(LiCl)复合诱变筛选,得到一株产中性植酸酶酶活力较高的菌株。当培养温度为30℃、pH值为7.0、接种量为10%时,经96h培养后,该菌株产中性植酸酶活力最高达到18.49U/mL,比原始菌株提高47.6... 以放射型根瘤杆菌为出发菌株,对其进行紫外-氯化锂(LiCl)复合诱变筛选,得到一株产中性植酸酶酶活力较高的菌株。当培养温度为30℃、pH值为7.0、接种量为10%时,经96h培养后,该菌株产中性植酸酶活力最高达到18.49U/mL,比原始菌株提高47.68%,且发酵周期缩短12h,该菌株具有良好的遗传稳定性。 展开更多

关键词 中性植酸酶 紫外-LiCl复合诱变 酶活力 稳定性

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中性植酸酶替代磷酸二氢钙对黑鲷生长和磷利用的影响 被引量：6

7

作者 徐树德 王树启 +4 位作者 游翠红 张敏智 张婷 杜红方 史宝军 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期522-530,共9页

以鱼粉、豆粕、菜粕等为蛋白原料设计配方,磷酸二氢钙的添加量分别为1.5%、1.0%、0.5%和0(对应的饲料组为P1.5、PP1.0、PP0.5和PP0组),其中PP1.0、PP0.5和PP0组中均添加200 mg/kg的中性植酸酶,开展为期8周的黑鲷(Acanthopagrus schlegel... 以鱼粉、豆粕、菜粕等为蛋白原料设计配方,磷酸二氢钙的添加量分别为1.5%、1.0%、0.5%和0(对应的饲料组为P1.5、PP1.0、PP0.5和PP0组),其中PP1.0、PP0.5和PP0组中均添加200 mg/kg的中性植酸酶,开展为期8周的黑鲷(Acanthopagrus schlegelii)养殖实验,以探讨中性植酸酶替代磷酸二氢钙对黑鲷生长和磷利用的影响。结果显示,黑鲷摄食实验饲料8周后,各组间成活率无显著差异(P>0.05);摄食饲料PP1.0、PP0.5和对照组(P1.5组)实验鱼的增重率无显著差异(P>0.05),但均显著高于PP0处理组,饲料系数则显著低于PP0处理组(P<0.05)。摄食不同饲料的黑鲷全鱼中蛋白质、脂肪、灰分及钙磷含量在不同组间均无显著差异(P>0.05)。添加植酸酶的各组鱼磷的表观消化率均显著高于对照组(P<0.05)。随着磷酸二氢钙添加量的降低,黑鲷对干物质和蛋白质的表观消化率呈升高的趋势,当饲料中磷酸二氢钙的添加量降到0时,黑鲷对干物质和蛋白质的表观消化率显著高于对照组(P<0.05)。以上结果说明,在本研究配方下,黑鲷正常生长对饲料有效磷的需求量≥0.51%;磷酸二氢钙可部分被植酸酶替代,当黑鲷饲料中含有20%鱼粉、32%豆粕和12%菜粕,且植酸酶添加量为200 mg/kg时,与饲料中添加1%的磷酸二氢钙相当;在不影响黑鲷生长的前提下,植酸酶部分替代磷酸二氢钙不仅可降低无机磷的添加,同时可提高饲料中磷的利用率,降低磷排放。 展开更多

关键词 黑鲷 中性植酸酶 磷酸二氢钙 生长 磷利用率

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不同磷酸二氢钙含量饲料中添加中性植酸酶对异育银鲫生长及营养物质表观消化率、沉积率和血浆生化指标的影响 被引量：6

8

作者 张晓清 徐树德 +1 位作者 李小勤 冷向军 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期1598-1608,共11页

本试验研究了在不同磷酸二氢钙含量饲料中添加中性植酸酶对异育银鲫生长及营养物质表观消化率、沉积率和血浆生化指标的影响。配制磷酸二氢钙含量为1.5%的正对照饲料和磷酸二氢钙含量分别为1.0%、0.5%的负对照饲料,在含1.0%磷酸二氢钙... 本试验研究了在不同磷酸二氢钙含量饲料中添加中性植酸酶对异育银鲫生长及营养物质表观消化率、沉积率和血浆生化指标的影响。配制磷酸二氢钙含量为1.5%的正对照饲料和磷酸二氢钙含量分别为1.0%、0.5%的负对照饲料,在含1.0%磷酸二氢钙饲料中分别添加400、800 IU/kg中性植酸酶,在含0.5%磷酸二氢钙饲料中添加400 IU/kg中性植酸酶,共配制成6种试验饲料,饲喂初始体重为(39.0±3.0)g的异育银鲫10周。每种饲料设3个重复,每个重复放养15尾鱼。结果显示:在不添加中性植酸酶的情况下,随磷酸二氢钙添加量增加,鱼体增重率,干物质、磷表观消化率,蛋白质、灰分沉积率,全鱼磷含量均显著增加(P<0.05),血浆碱性磷酸酶(ALP)活性显著降低(P<0.05);在含1.0%磷酸二氢钙饲料中添加800 IU/kg中性植酸酶显著提高了增重率(P<0.05),同时显著提高了蛋白质、灰分和磷沉积率,干物质和磷表观消化率,全鱼磷含量,椎骨钙含量及血浆甘油三酯(TG)含量(P<0.05),显著降低了血浆ALP活性(P<0.05);在含0.5%、1.0%磷酸二氢钙饲料中添加400 IU/kg中性植酸酶均显著提高了磷表观消化率和磷沉积率(P<0.05);在不同磷酸二氢钙含量饲料中添加中性植酸酶对血浆总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、钙、磷含量无显著影响(P>0.05)。以上结果表明,在磷酸二氢钙含量为1.0%的饲料中添加800 IU/kg中性植酸酶可促进异育银鲫的生长,提高干物质和磷的表观消化率,800 IU/kg中性植酸酶在底物充足条件下可代替0.5%磷酸二氢钙的添加。 展开更多

关键词 中性植酸酶 异育银鲫 磷表观消化率 生长

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Bacillusa myloliquefaciens中性植酸酶基因的原核表达及蛋白纯化和性质 被引量：6

9

作者 陈艳 孙建义 +2 位作者 赵学新 付石军 翁晓燕 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期60-64,72,共6页

淀粉液化芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens 是一种嗜热细菌,其产生的中性植酸酶具有很好的应用前景.通过TD PCR技术将Bacillus amyloliquefaciens 编码的中性植酸酶基因克隆至原核表达载体pET 30a(+)上,在大肠杆菌 BL21(DE3)中得到... 淀粉液化芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens 是一种嗜热细菌,其产生的中性植酸酶具有很好的应用前景.通过TD PCR技术将Bacillus amyloliquefaciens 编码的中性植酸酶基因克隆至原核表达载体pET 30a(+)上,在大肠杆菌 BL21(DE3)中得到了高效表达,表达量占大肠杆菌可溶性蛋白的33.5%.采用金属Ni2+亲和层析对基因表达产物进行纯化,表达产物具有正常的生物学功能. 展开更多

关键词 Bacillus 原核表达 植酸酶基因 蛋白纯化 中性植酸酶 性质 基因表达产物 大肠杆菌 PCR技术 NI^2+ 可溶性蛋白 生物学功能 芽孢杆菌 淀粉液化 嗜热细菌 基因克隆 高效表达 亲和层析 表达量

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中性植酸酶产生菌的激光复合诱变筛选 被引量：5

10

作者 彭益强 张燕 +2 位作者 庄月娥 方柏山 张文珍 《激光生物学报》 CAS CSCD 2006年第2期195-197,共3页

采用激光复合诱变方式筛选产中性植酸酶的大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草杆菌(Bacillus subtilis),混合波长λ=1.06+0.53μm,辐照时间1 m in,辐照功率15 W;酶的细胞定位实验表明,所产中性植酸酶是胞外酶;酶学特性测定表明,大肠杆菌... 采用激光复合诱变方式筛选产中性植酸酶的大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草杆菌(Bacillus subtilis),混合波长λ=1.06+0.53μm,辐照时间1 m in,辐照功率15 W;酶的细胞定位实验表明,所产中性植酸酶是胞外酶;酶学特性测定表明,大肠杆菌所产植酸酶酶反应最适pH为7.4,最适温度为37℃,枯草杆菌所产植酸酶反应最适pH为7.4,最适温度为37℃;酶学性质分析表明,大肠杆菌所产植酸酶具有一定的pH适性和一定的温度耐受性。 展开更多

关键词 中性植酸酶 激光诱变 筛选

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中性植酸酶对异育银鲫鱼种生长的影响及其在肠道中酶活分布状况 被引量：4

11

作者 仇明 王爱民 +4 位作者 吕林兰 封功能 杨文平 於叶兵 许伟 《粮食与饲料工业》 CAS 北大核心 2010年第2期38-41,共4页

探讨中性植酸酶对异育银鲫鱼种生产性能、消化道指数的影响及其酶活在肠道中分布状况。对照组饲喂基础日粮,Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组在基础日粮中分别添加500、1 000和1 500 U/kg的中性植酸酶,饲喂60 d。结果表明:Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组平均增重率比对照组... 探讨中性植酸酶对异育银鲫鱼种生产性能、消化道指数的影响及其酶活在肠道中分布状况。对照组饲喂基础日粮,Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组在基础日粮中分别添加500、1 000和1 500 U/kg的中性植酸酶,饲喂60 d。结果表明:Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组平均增重率比对照组分别提高1.69、8.76和1.64个百分点,饵料系数分别降低4.21%、6.90%和2.30%;其中Ⅲ组平均增重率最高,饵料系数最低。Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组肝体比显著高于对照组,Ⅲ组最大,比对照组提高11.26%。中性植酸酶酶活性大小在肠道中的分布依次为:中肠、前肠、后肠;与对照组相比,Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组各段肠道中性植酸酶活性都增加显著。配合饲料中添加1 000 U/kg中性植酸酶能在异育银鲫肠道中较好地发挥酶活作用。 展开更多

关键词 异育银鲫鱼种 中性植酸酶 生产性能 肝体比 饵料

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芽孢杆菌中性植酸酶基因的原核表达及酶学性质分析 被引量：3

12

作者 李镇刚 赵爱春 +3 位作者 王茜龄 金筱耘 李军 余茂德 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期122-129,共8页

植酸酶作为饲料添加剂能够有效提高动物对饲料中磷的利用率及减少粪便中磷排放对环境的污染,并降低植酸的抗营养作用。为了获得性能稳定的高活性植酸酶,采用PCR扩增芽孢杆菌(Bacillus sp.)中性植酸酶基因phyC(GenBank登录号:FJ986327)... 植酸酶作为饲料添加剂能够有效提高动物对饲料中磷的利用率及减少粪便中磷排放对环境的污染,并降低植酸的抗营养作用。为了获得性能稳定的高活性植酸酶,采用PCR扩增芽孢杆菌(Bacillus sp.)中性植酸酶基因phyC(GenBank登录号:FJ986327)的成熟肽编码序列,将其克隆进原核表达载体pET-28a(+),并转化E.coli BL21(DE3)进行表达。在37℃条件下以0.5 mmol/L IPTG诱导4 h能够获得大量包涵体蛋白,在25℃条件下以0.5 mmol/L IPTG诱导6 h有利于可溶性蛋白的获得。利用Ni-NTA亲和层析柱纯化重组植酸酶产物,获得的中性植酸酶的部分酶学特性为:耐热性较好,最适反应温度55℃,在70℃处理10 min可保持20%以上的酶活性;耐酸、碱能力较强,最适pH 6.0～7.0,pH 5.5～9.0时能保持80%以上的酶活性,pH 5.0～10.0时处理60 min仍能保持70%以上的酶活性,在pH 2.0～4.0时能保持40%以上的酶活性。利用构建的切除芽孢杆菌中性植酸酶基因phyC信号肽编码序列的原核表达载体及优化的诱导表达条件,能够在大肠杆菌中高量表达性能稳定的芽孢杆菌中性植酸酶。 展开更多

关键词 芽孢杆菌 中性植酸酶 成熟肽编码序列 原核表达 酶学性质

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新型中性植酸酶在大肠杆菌中的高效表达、纯化及酶学性质 被引量：3

13

作者 路国伟 许伟 +1 位作者 邵荣 云志 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第21期153-156,共4页

运用基因工程技术,将克隆到的淀粉液化芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens DSM 1061新型中性植酸酶基因(GenBank登录号为HM747163)构建到表达载体pET22b(+)上,并在E.coli BL21(DE3)中进行高效表达。电泳结果表明该酶分子质量约为42kD,... 运用基因工程技术,将克隆到的淀粉液化芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens DSM 1061新型中性植酸酶基因(GenBank登录号为HM747163)构建到表达载体pET22b(+)上,并在E.coli BL21(DE3)中进行高效表达。电泳结果表明该酶分子质量约为42kD,目的蛋白占大肠杆菌可溶性蛋白30%左右。利用Ni-NTA琼脂糖凝胶进行亲和纯化,酶学性质研究表明,其最适温度为60℃,最适pH值为7.0,最大酶比活力为15U/mg。60℃时以植酸钠为底物的Km值为0.30mmol/L。 展开更多

关键词 淀粉液化芽孢杆菌 高效表达 中性植酸酶 酶学性质

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中性植酸酶产生菌的筛选、鉴定及酶学性质 被引量：3

14

作者 王陶 李文 袁佩佩 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第1期120-124,共5页

从土壤中分离到一株高产中性植酸酶的菌株,酶活力达12.52U/mL。对其进行形态、生理、生化、分子生物学鉴定,初步鉴定为放射型根瘤杆菌(Agrobacterium radiobacter)。酶学性质研究结果表明:该酶的最适反应温度为45℃;最适反应pH值为7.0;6... 从土壤中分离到一株高产中性植酸酶的菌株,酶活力达12.52U/mL。对其进行形态、生理、生化、分子生物学鉴定,初步鉴定为放射型根瘤杆菌(Agrobacterium radiobacter)。酶学性质研究结果表明:该酶的最适反应温度为45℃;最适反应pH值为7.0;65℃处理60min酶活力保持80%左右,有一定耐热性;在pH5.5～8.0之间,稳定性较好;Ba2+对酶活力有一定的激活作用,Fe2+、Mg2+、Zn2+和Cu2+对酶活力均有一定程度的抑制作用,其中Fe2+的抑制作用最强。 展开更多

关键词 中性植酸酶 筛选 鉴定 酶学性质

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中性植酸酶在水产中的应用 被引量：3

15

作者 付石军 孙建义 《中国饲料》 北大核心 2005年第2期25-27,共3页

本文综述了芽孢杆菌植酸酶的酶学性质、催化机制以及中性植酸酶在淡水鲤科鱼类饲料中的应用效果,并对其研究前景作了展望。

关键词 芽孢杆菌 中性植酸酶 酶学性质 催化机制 水产养殖 饲料添加剂

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产中性植酸酶菌株的筛选及产酶条件的优化 被引量：3

16

作者 王文君 黄梅娜 +3 位作者 夏延国 马敏 徐海峰 朱启忠 《中国酿造》 CAS 北大核心 2011年第7期89-93,共5页

对菌BA8的产酶条件进行了单因素和正交试验,探讨了碳源、氮源、磷源等培养基成分和温度、接种量、装液量等培养条件对产酶的影响。结果表明,每1000mL液体培养基最佳组成为可溶性淀粉40g、胰蛋白胨10g、亚硝酸钠8.6g、硝酸铵5.0g、磷酸... 对菌BA8的产酶条件进行了单因素和正交试验,探讨了碳源、氮源、磷源等培养基成分和温度、接种量、装液量等培养条件对产酶的影响。结果表明,每1000mL液体培养基最佳组成为可溶性淀粉40g、胰蛋白胨10g、亚硝酸钠8.6g、硝酸铵5.0g、磷酸氢二钾0.10g、氯化钾0.10g、氯化镁0.10g、氯化锰0.09g。摇瓶培养的最佳条件为初始pH值6.0,发酵温度30℃,装液量100mL,接种量7%。优化后酶活可达到241.1U/mL,比未优化前提高了2.21倍。 展开更多

关键词 中性植酸酶 细菌 筛选 产酶条件

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基于定点突变改善中性植酸酶催化特性及结构-效应分析 被引量：2

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作者 王祖鹏 许伟 +1 位作者 邵荣 韦萍 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第19期118-123,共6页

对前期设计的来源于淀粉液化芽孢杆菌DSM 1061的3种中性植酸酶突变体(D148E/H149R、Q67E/N68R、D191E)的稳定性及催化效率等进行研究,并对影响其性质的结构因素进行分析。结果表明:与野生酶相比,在85℃条件下,突变体D191E半衰期延长了4.... 对前期设计的来源于淀粉液化芽孢杆菌DSM 1061的3种中性植酸酶突变体(D148E/H149R、Q67E/N68R、D191E)的稳定性及催化效率等进行研究,并对影响其性质的结构因素进行分析。结果表明:与野生酶相比,在85℃条件下,突变体D191E半衰期延长了4.3 min,但催化效率下降为野生酶的48.9%;突变体D148E/H149R催化效率为野生酶的229%,半衰期与野生酶基本一致;突变体Q67E/N68R催化效率为野生酶的93%,半衰期延长了0.7 min。圆二色光谱分析结果显示,D148E/H149R催化效率提高最为显著,α-螺旋含量由野生酶中11.79%降至2.90%,无规卷曲含量增加;Q67E/N68R性质与野生酶接近,其二级结构变化最小;D191E催化效率降低,α-螺旋含量增加至24.59%。对野生酶和突变酶的同源模型分析发现,残基D191具有较大的B因子值,不利于酶的热稳定性,各突变残基周围的氢键有所变化。同源模型的分析也将为植酸酶的进一步改良提供理论依据。 展开更多

关键词 中性植酸酶 定点突变 催化效率 圆二色光谱

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中性植酸酶结构与功能关系研究进展 被引量：1

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作者 许伟 邵荣 +2 位作者 余晓红 仇明 封功能 《盐城工学院学报（自然科学版）》 CAS 2010年第4期9-12,共4页

中性植酸酶是一种新型、绿色环保的饲料用酶。从中性植酸酶的微生物来源、酶学性质、序列结构特点及分子改造研究等方面进行综述,以期为改善中性植酸酶的热稳定性及催化活性提供参考。

关键词 中性植酸酶 结构 功能

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解淀粉芽杆菌中性植酸酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达 被引量：2

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作者 张建云 谷立坤 +1 位作者 崔树军 武秀琴 《中国酿造》 CAS 北大核心 2010年第5期116-119,共4页

采用PCR法从解淀粉芽孢杆菌BA11中克隆到一个中性植酸酶phyc基因,将该基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K上并电转化至宿主细胞GS115后进行诱导表达。SDS-PAGE试验表明,该重组中性植酸酶在毕赤酵母宿主细胞中实现了高效分泌性表达。植酸... 采用PCR法从解淀粉芽孢杆菌BA11中克隆到一个中性植酸酶phyc基因,将该基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K上并电转化至宿主细胞GS115后进行诱导表达。SDS-PAGE试验表明,该重组中性植酸酶在毕赤酵母宿主细胞中实现了高效分泌性表达。植酸酶活性测定结果显示阳性克隆子在诱导72h酶活性达到最高值,活性为2330U/L。 展开更多

关键词 中性植酸酶 毕赤酵母 解淀粉芽孢杆菌 异源表达

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解淀粉芽孢杆菌中性植酸酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达 被引量：1

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作者 张建云 崔树军 +1 位作者 谷立坤 武秀琴 《河南科技大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2010年第2期69-72,共4页

采用PCR法从解淀粉芽孢杆菌BA11中克隆到一个中性植酸酶phyc基因,将该基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K上并电转化至宿主细胞GS115后进行诱导表达。SDS-PAGE试验表明:该重组中性植酸酶在毕赤酵母宿主细胞中实现了高效分泌性表达。植酸... 采用PCR法从解淀粉芽孢杆菌BA11中克隆到一个中性植酸酶phyc基因,将该基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K上并电转化至宿主细胞GS115后进行诱导表达。SDS-PAGE试验表明:该重组中性植酸酶在毕赤酵母宿主细胞中实现了高效分泌性表达。植酸酶活性测定结果显示阳性克隆子在诱导72h酶活性达到最高值,活性为2330U/L。 展开更多

关键词 中性植酸酶 毕赤酵母 解淀粉芽孢杆菌 异源表达

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