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内切中性纤维素酶EGⅡ的发酵条件优化
被引量：
2
1
作者
郑海英
蔡少丽
+6 位作者
黄平
杨威
黄杨
杨鹤
张爱平
刘小琳
黄建忠
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2012年第1期12-16,共5页
对毕赤酵母基因工程菌EIM-50-eg2产内切中性纤维素酶的主要影响因子进行研究,考察氮源、pH、温度、微量元素PTM1和甲醇浓度等对工程菌产酶的影响。单因素实验和正交实验结果表明,优化后的培养基组成及培养条件:磷酸氢二铵40 g/L,甲醇15 ...
对毕赤酵母基因工程菌EIM-50-eg2产内切中性纤维素酶的主要影响因子进行研究,考察氮源、pH、温度、微量元素PTM1和甲醇浓度等对工程菌产酶的影响。单因素实验和正交实验结果表明,优化后的培养基组成及培养条件:磷酸氢二铵40 g/L,甲醇15 mL/L,硫酸镁10 g/L,磷酸二氢钾9 g/L,初始pH 6.0,培养温度28℃,PTM1添加量0.02%,甲醇诱导浓度1.5%。优化后内切葡聚糖酶活力可达4 158 U/(mL.min)是优化前1 449 U/(mL.min)的2.86倍。
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关键词
内切中性纤维素酶
毕赤酵母
优化
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职称材料
里氏木霉表达异源中性内切纤维素酶蛋白以改善最佳酶活pH
被引量：
1
2
作者
朱姚
孟凡举
+4 位作者
吕丹丹
朱亚然
赵喜华
魏东芝
王玮
《工业微生物》
CAS
CSCD
2014年第5期37-41,共5页
为了提高里氏木霉中天然纤维素酶的最佳活性pH,本实验从特异腐质霉,灰腐质霉的变种,枯草芽孢杆菌LH中分别筛选并克隆了其含有的中性纤维素酶基因,将其置于里氏木霉cbh1启动子的启动下,在里氏木霉中进行异源表达。改造株在pH 6.0下酶活提...
为了提高里氏木霉中天然纤维素酶的最佳活性pH,本实验从特异腐质霉,灰腐质霉的变种,枯草芽孢杆菌LH中分别筛选并克隆了其含有的中性纤维素酶基因,将其置于里氏木霉cbh1启动子的启动下,在里氏木霉中进行异源表达。改造株在pH 6.0下酶活提升16%,pH 7.0下活性保留75%以上,而此时原始菌酶活残留20%。本实验所得的产中性纤维素酶里氏木霉基因改造株,由于其良好的中酸性活性表现,在食品,纺织,纸浆和造纸行业应也有良好的使用潜力。
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关键词
里氏木霉
中性纤维素酶
接合转移
cbh1启动子
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职称材料
中性内切型纤维素酶在毕赤酵母中高水平表达的研究
被引量：
21
3
作者
丁少军
宋美静
+3 位作者
杨红军
邢增涛
周蕊
曹杰
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第1期71-76,共6页
中性内切型纤维素酶在纺织及造纸工业具有重要的应用,为了进一步提高从我国草菇中克隆的一种新的中性内切型纤维素酶(EG1)在Pichiapastoris中的表达水平,我们进行了提高基因拷贝数及高密度发酵等多种手段实现其高水平表达的研究。在前...
中性内切型纤维素酶在纺织及造纸工业具有重要的应用,为了进一步提高从我国草菇中克隆的一种新的中性内切型纤维素酶(EG1)在Pichiapastoris中的表达水平,我们进行了提高基因拷贝数及高密度发酵等多种手段实现其高水平表达的研究。在前期研究的基础上,利用对已整合eg1的重组子再转化的方法,从含有2000μgLZeocin的YPDSZ平板上筛选到高抗Zeocin转化子,在摇瓶培养条件下,该转化子表达量比原来提高了3.8倍,在pH4～8条件下均有稳定表达,接种量(OD600=5.0)表达水平最好,提高甲醇的诱导浓度对表达有显著的促进作用。用3.2L发酵罐进行了高密度发酵,甲醇诱导95.5h后达到最高值,比摇瓶培养再提高了6.4倍,因此利用高抗Zeocin转化子及高密度发酵的手段,使EG1的表达水平提高了34倍,蛋白表达量达8.80mgmL,EG1酶活达到543.36IUmL,实现了中性内切纤维素酶的高水平表达,本研究将大大促进建立我国纺织用纤维素酶大规模高效生产技术。
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关键词
中性内切型纤维素酶
毕赤酵母
高水平表达
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职称材料
编码草菇中性内切葡聚糖酶Ⅰ的基因克隆与表达研究
被引量：
2
4
作者
王超凯
李剑芳
+3 位作者
司晨妍
王瑾
孙军亭
邬敏辰
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第7期7-11,16,共6页
采用RT-PCR法,以草菇Volvariella.volvacea V23总RNA为模板,克隆了包括自身信号肽在内的中性内切葡聚糖酶Ⅰ基因(egⅠ)的cDNA序列。测序结果表明,它全长1167 bp,编码389个氨基酸,推测第1～23位氨基酸为信号肽,第24～389位氨基酸为成熟肽...
采用RT-PCR法,以草菇Volvariella.volvacea V23总RNA为模板,克隆了包括自身信号肽在内的中性内切葡聚糖酶Ⅰ基因(egⅠ)的cDNA序列。测序结果表明,它全长1167 bp,编码389个氨基酸,推测第1～23位氨基酸为信号肽,第24～389位氨基酸为成熟肽,属于糖苷水解酶第5家族。PCR扩增成熟肽编码基因并将其插入到分泌型表达载体pPIC9K中,重组载体经SalⅠ线性化后电转化毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,筛选得到了1株高产中性内切葡聚糖酶Ⅰ的工程菌株P.pastoris-EGⅠ1。SDS-PAGE检测表明,重组中性内切葡聚糖酶Ⅰ分子质量约为42 ku。在甲醇诱导96h时,酶活达到3 698 U/mL。
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关键词
中性内切葡聚糖酶Ⅰ
草菇
毕赤酵母
分泌表达
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职称材料
题名
内切中性纤维素酶EGⅡ的发酵条件优化
被引量：
2
1
作者
郑海英
蔡少丽
黄平
杨威
黄杨
杨鹤
张爱平
刘小琳
黄建忠
机构
福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心生命科学学院福建省现代发酵技术工程研究中心
出处
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2012年第1期12-16,共5页
基金
福建省发改委产业化关键技术项目(闽发改投资[2009]958号)
文摘
对毕赤酵母基因工程菌EIM-50-eg2产内切中性纤维素酶的主要影响因子进行研究,考察氮源、pH、温度、微量元素PTM1和甲醇浓度等对工程菌产酶的影响。单因素实验和正交实验结果表明,优化后的培养基组成及培养条件:磷酸氢二铵40 g/L,甲醇15 mL/L,硫酸镁10 g/L,磷酸二氢钾9 g/L,初始pH 6.0,培养温度28℃,PTM1添加量0.02%,甲醇诱导浓度1.5%。优化后内切葡聚糖酶活力可达4 158 U/(mL.min)是优化前1 449 U/(mL.min)的2.86倍。
关键词
内切中性纤维素酶
毕赤酵母
优化
Keywords
neutral
endoglucanase
Pichia
pastoris
optimization
分类号
Q93 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
里氏木霉表达异源中性内切纤维素酶蛋白以改善最佳酶活pH
被引量：
1
2
作者
朱姚
孟凡举
吕丹丹
朱亚然
赵喜华
魏东芝
王玮
机构
华东理工大学鲁华所
出处
《工业微生物》
CAS
CSCD
2014年第5期37-41,共5页
基金
国家重点基础研究发展计划(973)
项目编号2012CB721103
+1 种基金
国家高技术发展计划(863)
项目编号2012AA101806
文摘
为了提高里氏木霉中天然纤维素酶的最佳活性pH,本实验从特异腐质霉,灰腐质霉的变种,枯草芽孢杆菌LH中分别筛选并克隆了其含有的中性纤维素酶基因,将其置于里氏木霉cbh1启动子的启动下,在里氏木霉中进行异源表达。改造株在pH 6.0下酶活提升16%,pH 7.0下活性保留75%以上,而此时原始菌酶活残留20%。本实验所得的产中性纤维素酶里氏木霉基因改造株,由于其良好的中酸性活性表现,在食品,纺织,纸浆和造纸行业应也有良好的使用潜力。
关键词
里氏木霉
中性纤维素酶
接合转移
cbh1启动子
Keywords
Trichoderma
reesei
neutral
endoglucanase
Agrobacterium-mediated
transformation
cbhl
promoter
分类号
Q936 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
中性内切型纤维素酶在毕赤酵母中高水平表达的研究
被引量：
21
3
作者
丁少军
宋美静
杨红军
邢增涛
周蕊
曹杰
机构
南京林业大学生物工程系
上海农业科学院食用菌研究所
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第1期71-76,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.30271058)
校高层次留学回国人才引进基金项目~~
文摘
中性内切型纤维素酶在纺织及造纸工业具有重要的应用,为了进一步提高从我国草菇中克隆的一种新的中性内切型纤维素酶(EG1)在Pichiapastoris中的表达水平,我们进行了提高基因拷贝数及高密度发酵等多种手段实现其高水平表达的研究。在前期研究的基础上,利用对已整合eg1的重组子再转化的方法,从含有2000μgLZeocin的YPDSZ平板上筛选到高抗Zeocin转化子,在摇瓶培养条件下,该转化子表达量比原来提高了3.8倍,在pH4～8条件下均有稳定表达,接种量(OD600=5.0)表达水平最好,提高甲醇的诱导浓度对表达有显著的促进作用。用3.2L发酵罐进行了高密度发酵,甲醇诱导95.5h后达到最高值,比摇瓶培养再提高了6.4倍,因此利用高抗Zeocin转化子及高密度发酵的手段,使EG1的表达水平提高了34倍,蛋白表达量达8.80mgmL,EG1酶活达到543.36IUmL,实现了中性内切纤维素酶的高水平表达,本研究将大大促进建立我国纺织用纤维素酶大规模高效生产技术。
关键词
中性内切型纤维素酶
毕赤酵母
高水平表达
Keywords
neutral
endoglucanase
1,
Pichia
pastoris,
high-level
production
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
编码草菇中性内切葡聚糖酶Ⅰ的基因克隆与表达研究
被引量：
2
4
作者
王超凯
李剑芳
司晨妍
王瑾
孙军亭
邬敏辰
机构
江南大学食品学院
江南大学生物工程学院
江南大学医药学院
出处
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第7期7-11,16,共6页
基金
国家自然科学基金(No．20776061)
文摘
采用RT-PCR法,以草菇Volvariella.volvacea V23总RNA为模板,克隆了包括自身信号肽在内的中性内切葡聚糖酶Ⅰ基因(egⅠ)的cDNA序列。测序结果表明,它全长1167 bp,编码389个氨基酸,推测第1～23位氨基酸为信号肽,第24～389位氨基酸为成熟肽,属于糖苷水解酶第5家族。PCR扩增成熟肽编码基因并将其插入到分泌型表达载体pPIC9K中,重组载体经SalⅠ线性化后电转化毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,筛选得到了1株高产中性内切葡聚糖酶Ⅰ的工程菌株P.pastoris-EGⅠ1。SDS-PAGE检测表明,重组中性内切葡聚糖酶Ⅰ分子质量约为42 ku。在甲醇诱导96h时,酶活达到3 698 U/mL。
关键词
中性内切葡聚糖酶Ⅰ
草菇
毕赤酵母
分泌表达
Keywords
neutral
endoglucanase
Ⅰ
,
Volvariella
volvacea,
Pichia
pastoris,
secretive
expression
分类号
Q943.2 [生物学—植物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
内切中性纤维素酶EGⅡ的发酵条件优化
郑海英
蔡少丽
黄平
杨威
黄杨
杨鹤
张爱平
刘小琳
黄建忠
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2012
2
下载PDF
职称材料
2
里氏木霉表达异源中性内切纤维素酶蛋白以改善最佳酶活pH
朱姚
孟凡举
吕丹丹
朱亚然
赵喜华
魏东芝
王玮
《工业微生物》
CAS
CSCD
2014
1
下载PDF
职称材料
3
中性内切型纤维素酶在毕赤酵母中高水平表达的研究
丁少军
宋美静
杨红军
邢增涛
周蕊
曹杰
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
21
下载PDF
职称材料
4
编码草菇中性内切葡聚糖酶Ⅰ的基因克隆与表达研究
王超凯
李剑芳
司晨妍
王瑾
孙军亭
邬敏辰
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2008
2
下载PDF
职称材料
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