神经母细胞瘤（neuroblastoma,NB）是常见的儿童恶性肿瘤,在手术、放化疗及介入等多种手段综合治疗下,总体疗效仍然极差。近年来研究发现,果蝇zeste基因增强子同源物2（enhancer of zeste homolog 2,EZH2）能抑制相关抑癌基因,明显增加...神经母细胞瘤（neuroblastoma,NB）是常见的儿童恶性肿瘤,在手术、放化疗及介入等多种手段综合治疗下,总体疗效仍然极差。近年来研究发现,果蝇zeste基因增强子同源物2（enhancer of zeste homolog 2,EZH2）能抑制相关抑癌基因,明显增加神经母细胞瘤发生、发展的风险。GSK126是一种新型的选择性EZH2抑制剂,其在实体瘤方面的药效探究目前相对较少。展开更多
目的优化LipofectamineTM2000介导外源基因转染Neuro-2a(N-2a)细胞的条件,以提高转染效率。方法将携带增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的真核表达载体pEGFP-N1在LipofectamineTM2000介导下转染N-2a细胞,...目的优化LipofectamineTM2000介导外源基因转染Neuro-2a(N-2a)细胞的条件,以提高转染效率。方法将携带增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的真核表达载体pEGFP-N1在LipofectamineTM2000介导下转染N-2a细胞,对转染时间、细胞融合度、质粒质量与脂质体体积比例及培养基pH值进行优化,荧光显微镜观察EGFP的表达,并计算转染效率。结果在细胞融合度达80%,质粒质量与脂质体体积比为1∶3的条件下转染48 h,EGFP的阳性率最高(P<0.05);培养基pH值为8.0左右时,EGFP的阳性率较高,且细胞凋亡率较低。结论优化了LipofectamineTM2000转染N-2a细胞的条件,提高了转染效率,为外源基因高效转染N-2a细胞奠定了基础。展开更多
目的构建BACE1基因干扰质粒,并研究其在neuro-2a细胞中的表达,为以其为靶点的基因治疗提供稳定转染的质粒。方法选择人、小鼠和大鼠的BACE1基因共有序列为干扰靶点,设计3组连接有GFP的干扰质粒,将构建好的质粒转染neuro-2a细胞,通过Real...目的构建BACE1基因干扰质粒,并研究其在neuro-2a细胞中的表达,为以其为靶点的基因治疗提供稳定转染的质粒。方法选择人、小鼠和大鼠的BACE1基因共有序列为干扰靶点,设计3组连接有GFP的干扰质粒,将构建好的质粒转染neuro-2a细胞,通过Real time RT-PCR及Western-blotting的方法分别在RNA及蛋白质水平上检测BACE1的表达,以分析其干扰的效率。结果经酶切及测序证实,插入的DNA片段序列与设计序列完全一致。与空质粒对照组相比,3个干扰靶点对BACE1基因的表达均有不同程度的抑制作用。其中pYr-1.1-siBACE1在mRNA水平及蛋白质水平干扰效果均最好。结论成功构建了BACE1基因的干扰质粒pYr-1.1-siBACE1,并能有效抑制neuro-2a细胞内源性BACE1基因表达,为靶向BACE1基因的治疗提供了有力的工具。展开更多
文摘神经母细胞瘤（neuroblastoma,NB）是常见的儿童恶性肿瘤,在手术、放化疗及介入等多种手段综合治疗下,总体疗效仍然极差。近年来研究发现,果蝇zeste基因增强子同源物2（enhancer of zeste homolog 2,EZH2）能抑制相关抑癌基因,明显增加神经母细胞瘤发生、发展的风险。GSK126是一种新型的选择性EZH2抑制剂,其在实体瘤方面的药效探究目前相对较少。
文摘目的优化LipofectamineTM2000介导外源基因转染Neuro-2a(N-2a)细胞的条件,以提高转染效率。方法将携带增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的真核表达载体pEGFP-N1在LipofectamineTM2000介导下转染N-2a细胞,对转染时间、细胞融合度、质粒质量与脂质体体积比例及培养基pH值进行优化,荧光显微镜观察EGFP的表达,并计算转染效率。结果在细胞融合度达80%,质粒质量与脂质体体积比为1∶3的条件下转染48 h,EGFP的阳性率最高(P<0.05);培养基pH值为8.0左右时,EGFP的阳性率较高,且细胞凋亡率较低。结论优化了LipofectamineTM2000转染N-2a细胞的条件,提高了转染效率,为外源基因高效转染N-2a细胞奠定了基础。
文摘目的构建BACE1基因干扰质粒,并研究其在neuro-2a细胞中的表达,为以其为靶点的基因治疗提供稳定转染的质粒。方法选择人、小鼠和大鼠的BACE1基因共有序列为干扰靶点,设计3组连接有GFP的干扰质粒,将构建好的质粒转染neuro-2a细胞,通过Real time RT-PCR及Western-blotting的方法分别在RNA及蛋白质水平上检测BACE1的表达,以分析其干扰的效率。结果经酶切及测序证实,插入的DNA片段序列与设计序列完全一致。与空质粒对照组相比,3个干扰靶点对BACE1基因的表达均有不同程度的抑制作用。其中pYr-1.1-siBACE1在mRNA水平及蛋白质水平干扰效果均最好。结论成功构建了BACE1基因的干扰质粒pYr-1.1-siBACE1,并能有效抑制neuro-2a细胞内源性BACE1基因表达,为靶向BACE1基因的治疗提供了有力的工具。
