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基于纳米抗体-荧光素酶的黄曲霉毒素B1检测方法构建 被引量：1
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作者 陈文星 王凤华 +3 位作者 谭晓亮 晏石娟 张军 吴绍文 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第4期349-360,共12页
黄曲霉毒素B1(AFB1)是一种剧毒、致癌的食源性污染物,严重威胁食品安全和公共健康。为开发快速检测AFB1的生物发光酶联免疫分析(BLEIA)方法,系统测试了3种抗AFB1特异性纳米抗体(NB)与纳米荧光素酶(Nluc)融合蛋白(G8-Nluc、Nluc-NB26和Nl... 黄曲霉毒素B1(AFB1)是一种剧毒、致癌的食源性污染物,严重威胁食品安全和公共健康。为开发快速检测AFB1的生物发光酶联免疫分析(BLEIA)方法,系统测试了3种抗AFB1特异性纳米抗体(NB)与纳米荧光素酶(Nluc)融合蛋白(G8-Nluc、Nluc-NB26和Nluc-NB28)的可溶性表达、纯化情况及酶催化活性。基于3种融合蛋白分别建立BLEIA检测体系,选择Nluc-NB26用于谷物样品的分析和验证。结果表明,Nluc-NB26的可溶性表达量最高,稳定性更好,Nluc-NB28的可溶性表达量次之,而G8-Nluc基本不可溶。不同表面活性剂对G8-Nluc的促溶解性研究表明,添加N-月桂酰肌氨酸钠可显著提高其溶解度,纯化得到的3种融合蛋白均具有良好的酶活性及抗原结合活性。基于融合蛋白的BLEIA检测结果显示,Nluc-NB28-BLEIA、G8-Nluc-BLEIA和Nluc-NB26-BLEIA体系检测AFB1的IC_(50)值分别为4.213,1.697,2.169 ng/mL,表明G8-Nluc-BLEIA体系的灵敏度最高,Nluc-NB26-BLEIA与前者接近,Nluc-NB28-BLEIA最低。综合考虑融合蛋白的可溶性表达量、稳定性及检测性能,对Nluc-NB26-BLEIA开展实际样品的分析和验证,结果表明:这一方法检测谷物中AFB1的平均回收率在91.1%~104.1%之间,与商业化酶联免疫吸附测定试剂盒结果相似,而检测的时间和试剂成本明显降低。研究结果为开发快速、高灵敏的AFB1检测技术提供参考。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素B1 纳米抗体 纳米荧光素酶 快速检测 生物发光酶联免疫分析
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纳米荧光素酶的表达、纯化及性质鉴定
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作者 侯家鹏 丁澦 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2017年第2期191-196,共6页
由荧光素酶(luciferase)催化的一大类发光反应被统称为生物发光(bioluminescence),该反应具有背景低、灵敏度高、线性范围广等特点,是高灵敏检测的发展方向之一。课题组在近期的研究中全基因合成了一种纳米荧光素酶(nano luciferase),... 由荧光素酶(luciferase)催化的一大类发光反应被统称为生物发光(bioluminescence),该反应具有背景低、灵敏度高、线性范围广等特点,是高灵敏检测的发展方向之一。课题组在近期的研究中全基因合成了一种纳米荧光素酶(nano luciferase),研究清楚了其理化性质的基础上,将其作为一种新型的生物发光检测工具。将荧光素酶基因克隆至原核高表达载体上,通过自动诱导系统进行了表达。通过Ni-NTA亲和层析纯化和分子筛将重组纳米荧光素酶进行纯化,其产量可稳定达到每升菌25.3 mg,纯度超过98%;通过酶活实验鉴定了纳米荧光素酶的活性,在1.0×10^(-4)~1.0×10^(-7)mg/m L的范围内,该酶均具有良好的线性反应,其线性检测下限低至1.0×10^(-7)mg/m L(约5pmol)。纳米荧光素酶具有灵敏度高、数据重复性好、操作简便、稳定性高、易于保存等多重优点,可利用其作为基础平台,开发具有应用前景的超灵敏新型生物发光探针。 展开更多
关键词 纳米荧光蛋白 原核表达 纯化
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