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裸露DNA疫苗pCDSj32的构建、鉴定及在小鼠骨骼肌细胞的表达 被引量：16
1
作者 谢来平 石佑恩 +2 位作者 李传明 韩家俊 屈伸 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 1997年第3期183-186,共4页
应用基因工程技术，对本室已经克隆的日本血吸虫成虫３２ｋＤａ蛋白分子的ｃＤＮＡ片段进行ＰＣＲ扩增，扩增产物亚克隆入高效真核表达载体ｐＣＤ，构建成功裸露ＤＮＡ疫苗ｐＣＤＳｊ３２。ｐＣＤＳｊ３２在ＢＡＬＢ／ｃ小鼠骨骼肌细胞... 应用基因工程技术，对本室已经克隆的日本血吸虫成虫３２ｋＤａ蛋白分子的ｃＤＮＡ片段进行ＰＣＲ扩增，扩增产物亚克隆入高效真核表达载体ｐＣＤ，构建成功裸露ＤＮＡ疫苗ｐＣＤＳｊ３２。ｐＣＤＳｊ３２在ＢＡＬＢ／ｃ小鼠骨骼肌细胞得到表达。表达产物可被小鼠抗３２ｋＤａ蛋白分子单抗识别。免疫荧光定位显示，表达产物不但存在于细胞浆，而且可结合于胞膜并被分泌至胞外。 展开更多
关键词 日本血吸虫 成虫 血吸虫病 裸露dna疫苗 免疫
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不同剂量日本血吸虫裸露DNA疫苗pCDSj32诱发小鼠保护性免疫力的初步研究 被引量：13
2
作者 谢来平 石佑恩 +2 位作者 韩家俊 宁长修 邓伟文 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 1998年第4期305-307,共3页
应用已构建的日本血吸虫裸露ＤＮＡ疫苗ｐＣＤＳｊ３２经骨骼肌免疫小鼠，获得了较好的保护性免疫效果。１００μｇ和２００μｇｐＣＤＳｊ３２免疫后，减成虫率分别为５２．４３％和３６．４７％；肝组织减卵率分别为５４．１９％和５... 应用已构建的日本血吸虫裸露ＤＮＡ疫苗ｐＣＤＳｊ３２经骨骼肌免疫小鼠，获得了较好的保护性免疫效果。１００μｇ和２００μｇｐＣＤＳｊ３２免疫后，减成虫率分别为５２．４３％和３６．４７％；肝组织减卵率分别为５４．１９％和５７．７９％；并对各组小鼠肝脏虫卵肉芽肿的面积进行了测量。结果表明，ｐＣＤＳｊ３２免疫小鼠后可减少虫荷，降低血吸虫的产卵量，抑制肝脏虫卵肉芽肿的形成。 展开更多
关键词 日本血吸虫 裸露dna疫苗 pCDSj32 保护性免疫
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铜绿假单胞菌flg E基因壳聚糖纳米DNA疫苗的免疫效果评估 被引量：1
3
作者 宫强 李雅静 +2 位作者 翟文汉 祝世纪 田佳雨 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期510-516,共7页
为评价铜绿假单胞菌flgE基因壳聚糖纳米DNA疫苗的免疫效果,本研究经PCR扩增flgE基因,将其插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建flgE基因的重组质粒pflgE,进一步以壳聚糖为佐剂制备了纳米DNA疫苗CpflgE,通过测定OD260nm值检测纳米DNA疫苗... 为评价铜绿假单胞菌flgE基因壳聚糖纳米DNA疫苗的免疫效果,本研究经PCR扩增flgE基因,将其插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建flgE基因的重组质粒pflgE,进一步以壳聚糖为佐剂制备了纳米DNA疫苗CpflgE,通过测定OD260nm值检测纳米DNA疫苗的包封率、加入DNA酶后经琼脂糖凝胶电泳检测其抗DNA酶降解的能力、37℃恒温静置1 d,3 d和5 d后经琼脂糖凝胶电泳检测稳定性。结果显示CpflgE的包封率为94.69%,可有效抵抗DNaseⅠ的降解,具有较强的稳定性。以pflgE和CpflgE免疫BALB/c小鼠,共免疫3次,同时设置灭活疫苗免疫组、铜绿假单胞菌鞭毛蛋白亚单位疫苗免疫组以及PBS对照组。免疫后不同时间经间接ELISA测定各组小鼠血清抗体水平,MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖水平,采用检测试剂盒测定各组小鼠血清中IFN-γ、IL-2和IL-4的水平。结果显示,Cpflg E诱导小鼠的血清抗体水平、脾淋巴细胞增殖水平及血清中IFN-γ、IL-2和IL-4的浓度总体上虽均低于灭活疫苗,但与鞭毛蛋白亚单位疫苗相当,且显著高于pflgE (P<0.05)。三免两周后以铜绿假单胞菌强毒株(1.35×10^(10)cfu)对各组小鼠进行攻毒试验,测定攻毒后各组小鼠的保护率,结果显示,pflgE组、CpflgE组、鞭毛蛋白疫苗组和灭活疫苗组的保护率分别为57.1%、76.2%、81%和95.2%。本研究首次证实壳聚糖作为载体和佐剂可以显著提高铜绿假单胞菌flgE基因DNA疫苗诱导的免疫应答水平,为铜绿假单胞菌新型DNA疫苗的研制提供了参考依据。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 flgE基因 裸dna疫苗 壳聚糖纳米dna疫苗 免疫效果
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日本血吸虫(中国大陆株)22.6 ku抗原编码基因的核酸疫苗pCMV/Sj22.6的构建 被引量：2
4
作者 苏川 马磊 +3 位作者 范乐明 陈淑贞 张兆松 吴观陵 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CSCD 1999年第5期349-352,共4页
目的　探索日本血吸虫 (中国大陆株 ) 2 2 .6ku抗原 ( Sj2 2 .6)编码基因用作核酸疫苗的可行性。方法　用新设计的引物以 PCR法对 Sj2 2 .6编码基因进行改造 ,然后亚克隆入真核表达载体 p CMV -β并转化入大肠杆菌 JM 10 9。结果　提取... 目的　探索日本血吸虫 (中国大陆株 ) 2 2 .6ku抗原 ( Sj2 2 .6)编码基因用作核酸疫苗的可行性。方法　用新设计的引物以 PCR法对 Sj2 2 .6编码基因进行改造 ,然后亚克隆入真核表达载体 p CMV -β并转化入大肠杆菌 JM 10 9。结果　提取重组质粒经酶切分析 ,筛选出了含有正向插入片段的阳性重组质粒。 展开更多
关键词 日本血吸虫 抗原 pCMV-β 核酸疫苗 编码
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以TF为靶点的裸DNA疫苗脾内转染对结直肠癌的免疫抑制作用 被引量：2
5
作者 邓丽 陈诚 +3 位作者 胡丹 曾广正 马景胜 饶本强 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期289-295,共7页
目的:探讨以组织因子(tissue factor,TF)为靶点的裸DNA疫苗pγ1.Ig H.SPTT重组质粒脾内单次注射对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)的免疫抑制作用。方法:采用分子生物学技术构建携带TF靶向肽SPTT和免疫球蛋白H链基因的裸DNA质粒pγ1.Ig... 目的:探讨以组织因子(tissue factor,TF)为靶点的裸DNA疫苗pγ1.Ig H.SPTT重组质粒脾内单次注射对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)的免疫抑制作用。方法:采用分子生物学技术构建携带TF靶向肽SPTT和免疫球蛋白H链基因的裸DNA质粒pγ1.Ig H.SPTT,质粒脾内单次注射后,检测外周血转基因产物SPTT-Ig H浓度,分析质粒脾内转染效率、特性及其对CRC的作用。结果:重组pγ1.Ig H.SPTT质粒脾内单次注射后第4周脾组织即有SPTT-Ig H融合基因强表达,12周强度开始下降,至16周消失;转染质粒后第2周外周血SPTT-Ig H浓度为7.2μg/L,后逐渐升高,第8周达高峰为13.11μg/L;质粒脾内注射后转录基因定向在脾组织表达,淋巴结、骨髓、肝、肾、等组织未发现目的基因转染;pγ1.Ig H.SPTT重组质粒脾内转染对结直肠癌具有抑制作用(P<0.01)。结论:以TF为靶点的裸DNA疫苗pγ1.Ig H.SPTT单次脾内注射可以激发机体对结直肠癌的保护性免疫反应,是治疗CRC的一种安全有效的免疫方法。本课题研究为裸DNA疫苗抗肿瘤免疫治疗提供了新的思路。 展开更多
关键词 组织因子 裸dna疫苗 结直肠癌
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日本血吸虫(中国大陆株)22.6kDa抗原编码基因的核酸疫苗研究 被引量：6
6
作者 苏川 马磊 +7 位作者 王荣芝 邵莉君 吴海玮 沈蕾 范乐明 陈淑贞 张兆松 吴观陵 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1999年第6期6-10,共5页
为探索日本血吸虫（中国大陆株）２２．６ｋＤａ 抗原（Ｓｊ２２．６）编码基因用作核酸疫苗的可行性，将ｐＣＭＶ／Ｓｊ２２．６基因重组质粒经肌肉注射免疫了一批ＢＡＬＢ／ｃ小鼠并进行攻击感染试验，结果表明此重组质粒能在小鼠体... 为探索日本血吸虫（中国大陆株）２２．６ｋＤａ 抗原（Ｓｊ２２．６）编码基因用作核酸疫苗的可行性，将ｐＣＭＶ／Ｓｊ２２．６基因重组质粒经肌肉注射免疫了一批ＢＡＬＢ／ｃ小鼠并进行攻击感染试验，结果表明此重组质粒能在小鼠体内持续存在、稳定表达并诱导小鼠产生特异性的抗Ｓｊ２２．６ 抗体。 展开更多
关键词 日本血吸虫 pCMV-β 核酸疫苗 编码基因 Sj22.6
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