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miR-195-5p通过靶向调控VEGFA的表达对宫颈癌HeLa细胞侵袭和迁移能力的影响 被引量：13
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作者 张巍 李芳 赵曼曼 《医学分子生物学杂志》 CAS 2019年第2期99-106,共8页
目的探究mieroRNA-195-5p (miR-195-5p)对宫颈癌HeLa细胞侵袭和迁移能力及宫颈癌肿瘤移植模型小鼠存活的影响。方法RT-PCR检测宫颈癌患者癌组织及癌旁组织、正常宫颈上皮细胞NC104和宫颈癌细胞株HeLa、CaSki、C33A和SiHa中miR-195-5p和... 目的探究mieroRNA-195-5p (miR-195-5p)对宫颈癌HeLa细胞侵袭和迁移能力及宫颈癌肿瘤移植模型小鼠存活的影响。方法RT-PCR检测宫颈癌患者癌组织及癌旁组织、正常宫颈上皮细胞NC104和宫颈癌细胞株HeLa、CaSki、C33A和SiHa中miR-195-5p和血管内皮生长因子A (vascular endothelialgrowth factor A, VEGFA)的 niRNA 水平。miR-195 mimic 转染细胞,RT-PCR 检测 miR-19-5p 和 VEGFA 的表达。荧光素酶报告实验验证miR-195-5p和VEGFA靶向关系。miR-195 mimic和pcDNA VEGFA ( pc-VEGFA)分别或同时转染细胞.免疫印迹检测VEGFA表达,MTT检测细胞增殖,流式检测细胞凋亡,Transwell和划痕实验分别检测细胞侵袭和迁移能力,免疫印迹检测Ki67、Bel-2 , Bax、VEGF受体1 (VEGF receptor1, VEGFR1),基质金属蛋白酶-2 (metalloproteinase-2, MMP-2)和MMP-9的表达。建立宫颈癌移植瘤裸鼠模型,记录小鼠存活情况及肿瘤体积,Tunnel检测肿瘤组织细胞凋亡情况,免疫组化检测Ki67表达,免疫印迹检测VEGFR1、MMP-2和MMP-9的表达。结果与癌旁组织比较,癌组织miR-195-5p表达水平明显降低,VEGFA表达水平明显升高;与NC104细胞比较,miR-195-5p在多类宫颈癌细胞中表达显著升高,VEGF RNA水平明显降低。miR-195 mimic能显著上调miR-195-5p表达水平,抑制VEGFA RNA表达,并且能降低VEGFA野生质粒(wild type, wt)荧光素酶活性。pc-VEGFA能显著促进VEGFA表达,miR-195 mimic能显著降低HeLa细胞生长速度和Ki67、Bcl-2表达水平,上调细胞凋亡率及Bax表达水平;pc-VEGFA 能显著减弱miR-195 mimic对细胞增殖、Ki67和Bcl-2表达的抑制作用和对细胞凋亡及Bax表达的诱导作用。同时,miR-195 mimic能减少HeLa细胞侵袭数并降低细胞迁移率,抑制VEGFR1、MMP-2和MMP-9表达,pc-VEGFA能显著减弱miR-195 mimic对细胞侵袭和迁移的抑制作用;此外,与Control组比较,miR-195 mimic组模型小鼠存活率明显升高,肿瘤生长明显被抑制,肿瘤组织细胞细胞凋亡率明显升高,VEGF 展开更多
关键词 宫颈癌 侵袭 迁移 肿瘤生长 mir-195-5p
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