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题名突变型DNA聚合酶β真核表达载体的构建及其表达
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作者
赵四敏
陈旭东
赵国强
董子明
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机构
漯河医学高等专科学校病理生理学教研室
漯河医学高等专科学校微生物学与免疫学教研室
郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室
郑州大学基础医学院病理生理学教研室
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出处
《重庆医学》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第17期1716-1718,共3页
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基金
漯河医学高等专科学校校级科研课题项目(2009-LMC-305)
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文摘
目的构建含食管癌突变型DNA聚合酶β基因(DNA polymeraseβ,polβ)的真核表达载体pcDNA4-C-polβ,使其在polβ基因敲除的EC9706细胞中表达。方法根据食管癌突变型polβ基因序列,设计并合成一对特异性引物(引物1、引物2),通过PCR扩增获得含BamHⅠ和ApaⅠ的基因序列,将其克隆入T载体,PCR及测序鉴定无误后,将其插入真核表达载体pcD-NA4-C,从而构建了含突变型polβ基因的真核表达载体pcDNA4-C-polβ。将重组质粒以脂质体包裹的方式转染入polβ基因敲除的EC 9706细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞株。结果经过PCR筛选及DNA测序鉴定,证实真核表达载体pcDNA4-C-polβ构建成功。筛选后的EC 9706细胞经HislinkTM蛋白纯化试剂盒纯化,仅在39kD位置有一条带,证明蛋白表达及纯化成功。结论成功构建了食管癌突变型polβ基因的真核表达载体pcDNA4-C-polβ,并纯化出polβ蛋白,为进一步研究polβ的功能奠定坚实的基础。
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关键词
突变型dna聚合酶β
pcdna4-C真核表达载体
EC9706细胞
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Keywords
mutation dna polymerase β
pedna4-C eukaryotic expression vector EC9706 cell
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分类号
R735.1
[医药卫生—肿瘤]
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