目的观察泛素连接酶肌肉环指状蛋白2(muscle ring finger protein2,MuRF2)在HL-1心肌细胞自噬中的作用。方法采用慢病毒转染技术上调和下调HL-1心肌细胞中MuRF2的表达。实验分为阴性对照组、阳性对照组(空载病毒对照)、雷帕霉素处理组、...目的观察泛素连接酶肌肉环指状蛋白2(muscle ring finger protein2,MuRF2)在HL-1心肌细胞自噬中的作用。方法采用慢病毒转染技术上调和下调HL-1心肌细胞中MuRF2的表达。实验分为阴性对照组、阳性对照组(空载病毒对照)、雷帕霉素处理组、MuRF2过表达组和MuRF2敲减组。用雷帕霉素处理细胞,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测自噬蛋白LC3和BNIP3的表达。透射电镜观察HL-1心肌细胞超微结构。结果(1)Western blot验证,MuRF2过表达组中MuRF2蛋白表达水平均高于阴性对照组、阳性对照组、雷帕霉素处理组(P均<0.05),MuRF2敲减组中MuRF2蛋白表达水平均低于阴性对照组、阳性对照组、雷帕霉素处理组(P均<0.05)。(2)Western blot结果表明,雷帕霉素处理组LC3蛋白Ⅱ/Ⅰ比值和BNIP3蛋白表达均高于阴性对照组(P均<0.05),MuRF2过表达组LC3蛋白Ⅱ/Ⅰ比值和BNIP3蛋白表达均低于雷帕霉素处理组(P均<0.05)。与阴性对照组相比,MuRF2敲减组的LC3蛋白Ⅱ/Ⅰ比值和BNIP3蛋白表达均升高(P均<0.05),雷帕霉素处理组和MuRF2敲减组在LC蛋白Ⅱ/Ⅰ比值和BNIP3蛋白表达上差异均无统计学意义(P均>0.05)。透射电镜显示,雷帕霉素处理组线粒体分裂、碎片化,自噬体和自噬溶酶体散在胞质内。MuRF2过表达组线粒体处于融合状态,自噬体明显减少。结论MuRF2可以抑制心肌细胞线粒体自噬。展开更多
目的研究黄芪对核转录因子kappaB（nuclear factor of kappaB，NF-kappaB）p65和肌肉环状指蛋白1（muscle RING finger protein 1，MuRF1）活性的影响，探讨黄芪防治肌萎缩的作用及其机制。方法54只Wistar大鼠，建立右下肢腓肠肌失神经...目的研究黄芪对核转录因子kappaB（nuclear factor of kappaB，NF-kappaB）p65和肌肉环状指蛋白1（muscle RING finger protein 1，MuRF1）活性的影响，探讨黄芪防治肌萎缩的作用及其机制。方法54只Wistar大鼠，建立右下肢腓肠肌失神经支配模型，随机分为黄芪治疗组和对照组。采用逆转录聚合酶链反应（RT-RCR）和Western blofing检测术后2d、7d、14d和28d时大鼠腓肠肌NF-kappaB p65和MuRF1的mRNA和蛋白表达水平，并结合肌肉湿重比分析其相关性。结果大鼠腓肠肌失神经支配后NF-kappaB p65和MuRF1的mRNA和蛋白表达在各时间点持续增加（P〈0．05）。术后7d、14d和28d黄芪治疗组腓肠肌湿重比高于同期失神经对照组（P〈0．05），而其NF-kappaB p65和MuRF1的表达则低于相应失神经对照组（P〈0．05）。结论黄芪可以有效延缓去神经骨骼肌的萎缩，其作用机制与拮抗NF-kappaB p65、下调MuRF1的表达有关。展开更多
文摘目的研究黄芪对核转录因子kappaB（nuclear factor of kappaB，NF-kappaB）p65和肌肉环状指蛋白1（muscle RING finger protein 1，MuRF1）活性的影响，探讨黄芪防治肌萎缩的作用及其机制。方法54只Wistar大鼠，建立右下肢腓肠肌失神经支配模型，随机分为黄芪治疗组和对照组。采用逆转录聚合酶链反应（RT-RCR）和Western blofing检测术后2d、7d、14d和28d时大鼠腓肠肌NF-kappaB p65和MuRF1的mRNA和蛋白表达水平，并结合肌肉湿重比分析其相关性。结果大鼠腓肠肌失神经支配后NF-kappaB p65和MuRF1的mRNA和蛋白表达在各时间点持续增加（P〈0．05）。术后7d、14d和28d黄芪治疗组腓肠肌湿重比高于同期失神经对照组（P〈0．05），而其NF-kappaB p65和MuRF1的表达则低于相应失神经对照组（P〈0．05）。结论黄芪可以有效延缓去神经骨骼肌的萎缩，其作用机制与拮抗NF-kappaB p65、下调MuRF1的表达有关。
