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呼吸道病原体多重实时荧光定量PCR的检测 被引量：12
1
作者 姚亚萍 徐冉行 吕棠山 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期592-594,共3页
目的建立多重实时荧光定量PCR检测方法,为实现对呼吸道病原体的快速、灵敏特异性检测。方法采用经报道的引物和探针对合胞病毒、腺病毒等8种呼吸道病原体进行多重实时荧光定量PCR检测。结果多重荧光定量PCR阳性检测率高达57.8%,无假阳... 目的建立多重实时荧光定量PCR检测方法,为实现对呼吸道病原体的快速、灵敏特异性检测。方法采用经报道的引物和探针对合胞病毒、腺病毒等8种呼吸道病原体进行多重实时荧光定量PCR检测。结果多重荧光定量PCR阳性检测率高达57.8%,无假阳性及假阴性,特异性强。结论多重实时荧光定量PCR具有经济、快速、特异性强等优点,在呼吸道病原体检测方面有巨大应用价值。 展开更多
关键词 呼吸道 病原体 多重实时荧光定量pcr
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一种从羊奶中检测牛奶和大豆成分多重实时荧光定量PCR方法的建立 被引量：10
2
作者 范阳阳 张荦嘉 +5 位作者 刘艳艳 卞如如 霍胜楠 张卉 张全芳 步迅 《山东农业科学》 2016年第6期118-123,共6页
羊奶制品因其良好的营养功效备受消费者的青睐,也是乳制品主要掺假对象。本研究参考市场可能掺假现状,分别根据羊和牛线粒体基因组16S rRNA基因序列和大豆的KTi-S基因(GI:510514)序列,设计一对牛和羊特异性引物、一对大豆特异性引物以... 羊奶制品因其良好的营养功效备受消费者的青睐,也是乳制品主要掺假对象。本研究参考市场可能掺假现状,分别根据羊和牛线粒体基因组16S rRNA基因序列和大豆的KTi-S基因(GI:510514)序列,设计一对牛和羊特异性引物、一对大豆特异性引物以及相应的Taq Man-MGB探针,建立羊奶中牛奶和大豆成分多重实时荧光定量PCR检测方法,并引入内标质控有效保证检测体系的准确性。本检测体系对羊奶、牛奶及豆浆的基因组DNA检测敏感度为0.01 ng;对羊奶中掺入牛奶和豆浆的体积掺假检测灵敏度均为0.1%。因此,本研究建立的羊奶中牛奶和大豆成分多重实时荧光定量PCR检测体系具有通量大、灵敏度高、特异性好等优点,实现了对羊奶中其他源性成分快速、准确的检测,对保障相关产品市场安全具有重要意义。 展开更多
关键词 羊奶 牛奶 豆浆 多重实时荧光定量pcr
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猪链球菌和猪多杀性巴氏杆菌多重实时荧光PCR方法的建立 被引量：5
3
作者 刘艳艳 吕婷婷 +7 位作者 吴家强 刘飞 任素芳 张玉玉 郝小静 蒋皓静 李华 于江 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期5112-5125,共14页
【背景】猪链球菌(Streptococcus suis,SS)和猪多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)都是能引起宿主致病的人畜共患病原菌,常出现混合感染,临床诊断上易与猪瘟、猪丹毒等混淆。【目的】快速、有效鉴别猪链球菌病和猪多杀性巴氏杆菌... 【背景】猪链球菌(Streptococcus suis,SS)和猪多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)都是能引起宿主致病的人畜共患病原菌,常出现混合感染,临床诊断上易与猪瘟、猪丹毒等混淆。【目的】快速、有效鉴别猪链球菌病和猪多杀性巴氏杆菌病,建立一种能同时检测2种病原的多重实时荧光定量PCR检测方法。【方法】基于猪链球菌的gdh基因和猪多杀性巴氏杆菌的plpE基因,设计2对特异引物及TaqMan探针,以细菌16S rRNA基因设计通用引物及探针,通过对反应条件优化,建立了一种能同时检测猪链球菌和猪多杀性巴氏杆菌的多重实时荧光定量PCR检测方法。【结果】该方法能够特异性地检测猪链球菌和猪多杀性巴氏杆菌,与细菌分离后的测序结果验证完全一致。此方法对重组质粒标准品的最低检出浓度分别为4.53×10^(2)copies/μL和3.97×10^(2) copies/μL。重复性试验结果显示,该方法的组内和组间变异系数均小于3%。【结论】本实验所建立的方法准确、简便、可靠,能够用于2种病原菌的同时检测,为猪链球菌病和猪多杀性巴氏杆菌病的防治提供了有效的检测工具,具有重要的流行病学意义和临床应用价值。 展开更多
关键词 猪链球菌(SS) 猪多杀性巴氏杆菌(Pm) 多重实时荧光定量pcr
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3种蜱传细菌性病原体多重实时荧光定量PCR法的建立
4
作者 胡伟超 李晋宇 +3 位作者 赵宁 刘起勇 温红玲 吴海霞 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS 2024年第3期334-338,共5页
目的建立一种多重实时荧光定量PCR法,同时检测常见蜱传病原体嗜吞噬细胞无形体、伯氏疏螺旋体及斑点热群立克次体(SFGR)。方法针对各病原体的保守区序列设计特异性引物及TaqMan探针,建立并优化多重实时荧光定量PCR反应体系,评价方法的... 目的建立一种多重实时荧光定量PCR法,同时检测常见蜱传病原体嗜吞噬细胞无形体、伯氏疏螺旋体及斑点热群立克次体(SFGR)。方法针对各病原体的保守区序列设计特异性引物及TaqMan探针,建立并优化多重实时荧光定量PCR反应体系,评价方法的特异性、灵敏度、重复性及对蜱样本的检测准确性。结果建立的多重实时荧光定量PCR法检测嗜吞噬细胞无形体、伯氏疏螺旋体、SFGR,与大肠埃希菌、问号钩端螺旋体、布鲁氏菌等病原体间无交叉反应,特异性良好;灵敏度均达到102拷贝/μl,重复性变异系数均<2.00%;蜱样本检测中,多重实时荧光定量PCR法与单重实时荧光定量PCR法检测结果一致性为100%。结论研究建立的3种蜱传细菌性病原体多重实时荧光定量PCR法特异性好、灵敏度高,为蜱传病原体的检测提供了技术手段。 展开更多
关键词 嗜吞噬细胞无形体 伯氏疏螺旋体 斑点热群立克次体 多重实时荧光定量pcr法
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梅迪-维斯纳病毒和羊痘病毒多联实时定量PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：5
5
作者 徐军 孙志华 +4 位作者 刘娟 孟茹 戴莉 段晓东 叶志辉 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2012年第4期448-451,共4页
利用多联实时荧光定量PCR技术建立了一种梅迪-维斯纳病毒和羊痘病毒快速鉴别诊断方法。分别设计并合成梅迪-维斯纳病毒和羊痘病毒基因的引物,建立多联实时定量PCR快速鉴别诊断方法;对所建立的方法进行稳定性、特异性和敏感性试验;并用... 利用多联实时荧光定量PCR技术建立了一种梅迪-维斯纳病毒和羊痘病毒快速鉴别诊断方法。分别设计并合成梅迪-维斯纳病毒和羊痘病毒基因的引物,建立多联实时定量PCR快速鉴别诊断方法;对所建立的方法进行稳定性、特异性和敏感性试验;并用所建立的方法对临床样品进行检测。结果显示:设计的引物敏感性和特异性较好,该多联实时荧光定量PCR方法中梅迪-维斯纳病毒Tm值为89～90℃,羊痘病毒Tm值为91～92℃,对其他供试的菌株则为阴性,并且该方法对梅迪-维斯纳病毒的DNA最低检出量为25拷贝/μL,羊痘病毒为40拷贝/μL,两病原都存在时为80拷贝/μL。研究结果表明本实验建立的方法可用于同时检测梅迪-维斯纳病毒和羊痘病毒,为动物检疫提供了一种有效的检测方法。 展开更多
关键词 梅迪-维斯纳病毒 羊痘病毒 多联实时荧光定量pcr
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低拷贝病毒RNA捕获及多重实时荧光定量PCR检测
6
作者 余佳 李晓宁 +2 位作者 肖君华 李凯 周宇荀 《现代生物医学进展》 CAS 2022年第20期3806-3812,共7页
目的:为提高COVID-19检测灵敏度,减少新冠患者临床假阴性检测结果,本研究建立了一种SARS-CoV-2低拷贝假病毒RNA捕获方法。方法:利用链霉亲和素磁珠,设计并合成生物素探针捕获SARS-CoV-2假病毒RNA;对磁珠用量、生物素探针浓度和洗脱次数... 目的:为提高COVID-19检测灵敏度,减少新冠患者临床假阴性检测结果,本研究建立了一种SARS-CoV-2低拷贝假病毒RNA捕获方法。方法:利用链霉亲和素磁珠,设计并合成生物素探针捕获SARS-CoV-2假病毒RNA;对磁珠用量、生物素探针浓度和洗脱次数等捕获条件进行了优化;参考WHO发布的序列,针对SARS-CoV-2病毒基因组的ORF1ab基因和N基因序列合成引物和TaqMan探针,对捕获的SARS-CoV-2假病毒RNA进行反转录实时荧光定量PCR检测。采用一步法和分步法检测、单重和多重实时荧光定量PCR检测,并分别比较检测结果。结果:本研究设计的生物素探针能富集到距离探针结合位点至少1.8 K处的序列,在生物素探针浓度12.5μM,磁珠的工作浓度333.33μg/mL时,合并RNA的两次洗脱液,对低拷贝病毒RNA的捕获效率最高。研究得到对低拷贝病毒RNA分步法比一步法、多重比单重实时荧光定量PCR检测更灵敏,进行分步法、多重实时荧光定量PCR检测限低于10 copies/μL,组间和重复实验组之间CT值变异系数均小于1%。所有阴性对照样品在检测中均为阴性。结论:本研究优化的链霉亲和素磁珠-生物素探针捕获法是富集SARS-CoV-2低拷贝假病毒RNA的有效方法,其抽提RNA病毒的结果优于一些商业化试剂盒,分步法、多重实时荧光定量PCR对SARS-CoV-2低拷贝假病毒RNA实现了高效检测,这为临床检测低拷贝RNA病毒提供了一种参考方案。 展开更多
关键词 SARS-CoV-2假病毒 链霉亲和素磁珠 生物素探针 多重实时荧光定量pcr
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Taqman多重实时荧光定量PCR检测裸鼠肿瘤转移模型中肿瘤转移率方法的建立 被引量：1
7
作者 张宇 白豆 朱乃硕 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期66-73,共8页
目的:建立基于多重荧光定量PCR技术的动物体内恶性肿瘤转移模型中肿瘤转移率高效检测的方法。方法:以人和小鼠的β2m基因为目标,设计相应的引物和Taqman探针;分别抽提人涎腺腺样囊性癌ACC细胞和小鼠Sp2/0细胞的基因组DNA作为模板,建立... 目的:建立基于多重荧光定量PCR技术的动物体内恶性肿瘤转移模型中肿瘤转移率高效检测的方法。方法:以人和小鼠的β2m基因为目标,设计相应的引物和Taqman探针;分别抽提人涎腺腺样囊性癌ACC细胞和小鼠Sp2/0细胞的基因组DNA作为模板,建立两物种双重荧光定量PCR检测方法,且分别以人和鼠定量基因检测为参照考察双重荧光定量PCR方法的特异性、灵敏性和精确性,并与传统转移灶称重计算肿瘤转移率的方法进行比较。结果:双重Taqman实时荧光定量PCR检测方法具有很好的特异性和较高的灵敏度(0.006ng/μl DNA),重复性较好(批间平均CV=0.036),有较强稳定性,比传统称重法更高效,更准确。结论:双重荧光定量PCR能够在同一反应体系下同时对动物组织中人肿瘤转移灶和周围组织进行快速准确的定量检测,计算出肿瘤转移率,具有经济、快速、特异性强等优点,在肿瘤动物模型肿瘤转移率检测方面具有很高的应用价值。 展开更多
关键词 多重荧光定量pcr 肿瘤转移率 涎腺腺样囊性癌
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改良多重实时荧光定量PCR法测定抑癌基因MGMT、p16、CDH13和RASSF1A甲基化在肺癌早期诊断中的作用 被引量：6
8
作者 钟云华 李燕 《东南大学学报（医学版）》 CAS 2019年第1期33-38,共6页
目的:建立改良多重实时荧光定量PCR法,检测抑癌基因MGMR、p16、CDH13和RASSF1A基因甲基化,探讨其在肺癌早期诊断中的应用。方法:选取30例病理确诊为肺癌的患者作为肺癌组,30例病理确诊为良性病变的患者作为对照组。建立改良实时荧光定量... 目的:建立改良多重实时荧光定量PCR法,检测抑癌基因MGMR、p16、CDH13和RASSF1A基因甲基化,探讨其在肺癌早期诊断中的应用。方法:选取30例病理确诊为肺癌的患者作为肺癌组,30例病理确诊为良性病变的患者作为对照组。建立改良实时荧光定量PCR体系。检测受试者血清MGMT、p16、CDH13和RASSF1A基因甲基化,对比两组基因甲基化阳性率,计算四项基因甲基化单独及联合用于肺癌早期诊断的敏感度和特异度。结果:肺癌组受试者血清MGMT、p16、CDH13和RASSF1A显著高于对照组(P<0.05);MGMT、p16、CDH13和RASSF1A四项基因甲基化联合检测用于肺癌早期诊断的敏感度和特异度显著高于单项指标检测(P<0.05)。结论:建立了多重实时荧光定量PCR法用于MGMT、p16、CDH13和RASSF1A基因甲基化检测,联合检测用于肺癌早期诊断具有较高的敏感度和特异度。 展开更多
关键词 改良多重实时荧光定量pcr法 抑癌基因 MGMT P16 CDH13 RASSF1A 肺癌早期诊断
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多重实时荧光定量RT-PCR法快速检测3种蚊媒病毒 被引量：3
9
作者 吴忠华 罗鹏 +1 位作者 吕沁风 郑伟 《中国卫生检验杂志》 CAS 2015年第12期1975-1977,共3页
目的建立多重实时荧光定量RT-PCR快速检测方法,用于黄热病毒(YFV)、登革热病毒(DFV)、基孔肯雅热病毒(CHIKV)的同时检测和鉴别诊断。方法分别针对YFV 3'UTR基因、DFV 3'UTR C-M基因和CHIKV nsp2基因保守区设计特异性引物和Taq ... 目的建立多重实时荧光定量RT-PCR快速检测方法,用于黄热病毒(YFV)、登革热病毒(DFV)、基孔肯雅热病毒(CHIKV)的同时检测和鉴别诊断。方法分别针对YFV 3'UTR基因、DFV 3'UTR C-M基因和CHIKV nsp2基因保守区设计特异性引物和Taq Man探针,建立并优化多重实时荧光定量RT-PCR反应体系,评价方法的特异性、敏感性和稳定性,并用临床标本进行验证。结果该方法可同时检测YFV、DFV和CHIKV,检测结果的特异性强,灵敏度达1×103copy/ml,结果的重复性很好,其变异系数分别为1.03%、0.90%和0.34%。临床确诊的11例DFV标本,5例CHIKV标本和10例黄热病疫苗标本核酸检测结果皆为阳性。结论研究建立的多重实时荧光定量RT-PCR方法可同时检测YFV、DFV和CHIKV,灵敏度高、特异性强、稳定性好,是一种可同时快速检测多种蚊媒病毒的新方法。 展开更多
关键词 黄热病毒 登革热病毒 基孔肯雅热病毒 多重实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应 检测
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