三种食源性致病菌多重PCR检测方法的建立 被引量：16

1

作者 舒畅 姜琛璐 +1 位作者 钟慈平 李林 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期49-54,共6页

目的:建立同时快速检测沙门氏菌、志贺氏菌和肠出血性大肠杆菌O157∶H7的多重PCR方法。方法:根据沙门氏菌的invA基因、志贺氏菌的ipaH基因及肠出血性大肠杆菌O157∶H7的uidA基因设计3对引物,通过单因素实验、L9(34)正交实验优化反应体系... 目的:建立同时快速检测沙门氏菌、志贺氏菌和肠出血性大肠杆菌O157∶H7的多重PCR方法。方法:根据沙门氏菌的invA基因、志贺氏菌的ipaH基因及肠出血性大肠杆菌O157∶H7的uidA基因设计3对引物,通过单因素实验、L9(34)正交实验优化反应体系,并对多重PCR扩增的敏感性进行分析。结果:3对引物能特异性扩增出495、620、252bp的目的片段;在最优多重PCR反应体系下,多重PCR检测3种致病菌的灵敏度达104CFU/mL;将该法应用于人工污染实验,可在5h内得到准确、稳定的检测结果。结论:该方法操作简单、检测特异性和灵敏度较高,能够实现对沙门氏菌、志贺氏菌和肠出血性大肠杆菌O157∶H7 3种食源性致病菌的快速监控和诊断。 展开更多

关键词 食源性致病菌 多重pcr 沙门氏菌 志贺氏菌 肠出血性大肠杆菌0157:H7

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多重PCR同时检测食品中4种细菌与常见霉菌 被引量：13

2

作者 熊苏玥 米瑞芳 +5 位作者 陈曦 戚彪 李金春 李家鹏 乔晓玲 王守伟 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第4期305-311,共7页

建立一种同时检测食品中金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌、沙门氏菌、大肠杆菌O157:H7以及霉菌的多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法。根据金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因(nuc)、沙门氏菌的侵袭正调... 建立一种同时检测食品中金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌、沙门氏菌、大肠杆菌O157:H7以及霉菌的多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法。根据金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因(nuc)、沙门氏菌的侵袭正调节蛋白基因(hilA)、大肠杆菌O157:H7鞭毛基因(flic)、单核细胞增生李斯特氏菌的毒力调控蛋白基因(prfA)及霉菌18S rRNA基因V5区分别设计5对特异性引物,并对PCR扩增反应体系和扩增条件进行优化,确定获得特异性良好的PCR扩增产物。而后在37℃对人工污染致病菌的香肠、面包和豆腐进行增菌培养,5种致病微生物在20 h内的检出限均可达到100 CFU/25 g。本实验建立的多重PCR检测方法适用于食品中4种细菌与常见霉菌的同时检测,相较于传统检测方法,具有快速、简便、特异性高的优点。 展开更多

关键词 多重聚合酶链式反应 食源性致病菌 霉菌 快速检测

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肉中4种致病菌的PCR快速检测方法的建立 被引量：11

3

作者 刘红玉 李岩 崔洪斌 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第6期213-216,共4页

目的:建立一种能同时检测肉中金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、沙门氏菌和单核增生李斯特菌的多重PCR检测方法。方法:根据金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因(nuc)、沙门氏菌的侵袭蛋白基因(invA)、志贺氏菌的侵袭性质粒抗原基因(ipaH)和单核细... 目的:建立一种能同时检测肉中金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、沙门氏菌和单核增生李斯特菌的多重PCR检测方法。方法:根据金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因(nuc)、沙门氏菌的侵袭蛋白基因(invA)、志贺氏菌的侵袭性质粒抗原基因(ipaH)和单核细胞增生性李斯特菌的内化素基因(inlA)设计引物,通过优化好的反应体系进行多重聚合酶链反应(PCR)扩增目的基因。结果:特异性实验结果表明4种菌均能在相应位置扩增出特异性条带。对污染4种菌的猪肉进行检测,确定出金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的检出限是102CFU/mL,志贺氏菌和单核增生李斯特菌的检出限是101CFU/mL。结论:本实验建立的多重PCR方法比传统细菌检测方法更特异、快速、灵敏,适用于肉中金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、沙门菌和单核增生李斯特菌的快速检测。 展开更多

关键词 多重聚合酶链反应(pcr) 致病菌 肉 检测

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兰州市及周边地区禽白血病病毒的分子流行病学调查 被引量：6

4

作者 管宏伟 吴润 +4 位作者 刁小龙 罗鹏 张莉 何轶群 艾文娜 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1294-1301,共8页

为了解兰州市及周边地区禽白血病的流行情况及流行毒株的分子特征,从该地区11个鸡场和2个屠宰场采集抗凝鸡血1 294份,应用自建的禽白血病病毒(ALV)A、B、J亚群多重PCR诊断方法检测了A、B、J亚群的感染率与分布,进行了各亚群流行毒株gp8... 为了解兰州市及周边地区禽白血病的流行情况及流行毒株的分子特征,从该地区11个鸡场和2个屠宰场采集抗凝鸡血1 294份,应用自建的禽白血病病毒(ALV)A、B、J亚群多重PCR诊断方法检测了A、B、J亚群的感染率与分布,进行了各亚群流行毒株gp85基因的序列分析。从1 294份样品中,共检出外源性ALV 486份,平均检出率为37.56%。其中检出ALV-A亚群16份,感染率为1.24%;ALV-J亚群383份,感染率为29.60%;ALV-A/J亚群68份,感染率为5.26%;ALV-B/J亚群19份,感染率为1.47%。序列分析表明,J亚群流行株gp85基因的核苷酸序列的同源性介于98%～100%,与J亚群英国毒株HPRS-103、美国毒株ADOL-7501、国内分离株SD9902、本实验室保存毒株(JX1、JX2、AH2和GZ1)间的同源性分别为97%～98%、86%～88%、96%～97%、98%～100%。在J亚群流行株中,发现gp85基因有13个核苷酸突变型,在共104个碱基置换中71个为异义突变、33个为同义突变,可区分为8个氨基酸突变型,突变位点主要集中在第200～400bp、第500～600bp范围的核苷酸之内和第120～240aa内。gp85基因进化关系分析表明,本地区J亚群流行株的8个氨基酸突变型均与英国毒株HPRS-103及国内分离株JX1、JX2、AH1和GZ1处于同一进化树分支。调查结果表明,兰州市及周边地区外源性禽白血病病毒感染现象较为严重且以J亚群为主,部分鸡场也可同时检出A、B亚群。 展开更多

关键词 鸡 禽白血病病毒 多重pcr gp85基因蛋白基因 分子流行病学

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通用引物多重PCR新技术对番木瓜转基因成分检测的研究 被引量：6

5

作者 白卫滨 李宵 +5 位作者 朱翠娟 文罗娜 王丽芳 卢军利 欧仕益 孙建霞 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2016年第4期229-234,共6页

为了满足能够同时对多个靶标进行检测,克服传统多重PCR的引物间排斥、重现性差等缺点的要求,建立通用引物多重PCR新方法对番木瓜中转基因成分进行高效、快速的检测。选用三种转基因番木瓜(Event 55-1、"GM-YK"和"华农一... 为了满足能够同时对多个靶标进行检测,克服传统多重PCR的引物间排斥、重现性差等缺点的要求,建立通用引物多重PCR新方法对番木瓜中转基因成分进行高效、快速的检测。选用三种转基因番木瓜(Event 55-1、"GM-YK"和"华农一号")和非转基因番木瓜("台农2号")的新鲜叶片为研究对象,根据三种转基因番木瓜的外源基因和内标木瓜蛋白酶基因(papain)序列,设计五种特异性引物。通过比较不加入接头的特异性引物的PCR验证结果,发现复合引物(带通用接头的引物)无论在单重PCR或者多重PCR的检测中的电泳条带均更为明亮清晰。而由灵敏度的对比,可以得出通用引物多重PCR灵敏度比普通引物的灵敏度提高了1个数量级。通用引物多重PCR新技术较普通多重PCR方法检测番木瓜中转基因成分拥有更低的检测限和灵敏度,为转基因成分的快速检测提供一种新技术。 展开更多

关键词 转基因 检测 多重pcr 通用引物

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猪胸膜肺炎放线杆菌种及血清1,5,7型多重PCR检测方法的建立 被引量：4

6

作者 王海丽 徐公义 +1 位作者 葛长城 吕云鹏 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期728-732,共5页

根据猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)外膜脂蛋白(OmlA)基因序列设计了1对种特异性引物;根据APP血清1、5、7型荚膜多糖(cps)基因序列设计了3对型特异性引物,建立了鉴定APP种及血清1、5、7型的多重PCR检测方法,该方法的特异性和敏感性均良好。应... 根据猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)外膜脂蛋白(OmlA)基因序列设计了1对种特异性引物;根据APP血清1、5、7型荚膜多糖(cps)基因序列设计了3对型特异性引物,建立了鉴定APP种及血清1、5、7型的多重PCR检测方法,该方法的特异性和敏感性均良好。应用建立的多重PCR方法对临床分离的89株APP及545份无临床症状猪鼻拭子进行了检测。结果显示,89株APP中共检出血清1型17株(检出率为19.1%),血清5型36株(检出率为40.4%),血清7型27株(检出率为30.3%);545份鼻拭子APP检出率为9.36%(51/545),其中血清1型占15.69%(8/51),血清5型占35.29%(18/51),血清7型占33.33%(13/51)。证实,该方法可作为猪传染性胸膜肺炎快速诊断和流行病学调查的重要手段。 展开更多

关键词 胸膜肺炎放线杆菌 血清型 多重聚合酶链式反应

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2014年邢台市流行性感冒后期发热呼吸道症候群的病原学研究 被引量：4

7

作者 孙伟明 董江华 +3 位作者 闫英民 庞俊华 陈风阳 苏铭 《中国卫生检验杂志》 CAS 2015年第3期358-361,共4页

目的了解2014年邢台市流感流行后期发热呼吸道症候群的病原谱构成情况,为临床诊断治疗和预防提供依据。方法采用多重PCR方法检测发热呼吸道症候群患者咽拭子标本中的12种病毒和6种细菌,并进行统计学分析。结果 148例发热呼吸道感染患者... 目的了解2014年邢台市流感流行后期发热呼吸道症候群的病原谱构成情况,为临床诊断治疗和预防提供依据。方法采用多重PCR方法检测发热呼吸道症候群患者咽拭子标本中的12种病毒和6种细菌,并进行统计学分析。结果 148例发热呼吸道感染患者中相关病原体检测阳性65例（43.92%）,包括病毒感染53例（35.81%）,细菌感染26例（17.57%）,混合感染14例（9.46%）。鼻病毒、呼吸道合胞病毒A和甲型流感病毒居病毒感染的前3位。流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和肺炎支原体居细菌感染的前3位。病毒混合感染5例,病毒、细菌混合感染8例,细菌混合感染1例。0~岁组感染的病原种类最多,感染率也最高。结论 2014年邢台市流感流行后期发热呼吸道症候群感染以鼻病毒和呼吸道合胞病毒A、甲型流感病毒和流感嗜血杆菌为主,并伴有混合感染。 展开更多

关键词 呼吸道症候群 病原学 多重聚合酶链式反应

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杜氏/贝氏肌营养不良症4个家系的直接和间接连锁基因诊断分析 被引量：1

8

作者 陈靖 窦瑞艳 +5 位作者 郑天津 卢雪梅 张凤立 赵胜科 王超彦 李红智 《温州医学院学报》 CAS 2013年第9期582-586,共5页

目的:开展温州地区杜氏/贝氏肌营养不良症(DMD/BMD)4个家系的直接和间接连锁基因诊断,进一步为基于DMD/BMD症状前男性患者和女性携带者基因诊断结果的遗传咨询和生育指导提供依据。方法:针对4例DMD/BMD先证者,采用多重PCR技术检测常见1... 目的:开展温州地区杜氏/贝氏肌营养不良症(DMD/BMD)4个家系的直接和间接连锁基因诊断,进一步为基于DMD/BMD症状前男性患者和女性携带者基因诊断结果的遗传咨询和生育指导提供依据。方法:针对4例DMD/BMD先证者,采用多重PCR技术检测常见18个外显子缺失,进行直接基因诊断。针对未能发现常见外显子缺失的DMD/BMD先证者及其有关家系成员,采用短串联重复序列(STR)-PCR技术检测第50内含子STR多态性,进行连锁基因诊断。结果:家系2的先证者缺失外显子48、49。家系1中先证者二姨不是携带者。家系3中,儿子均正常的先证者大姨、三姨都是携带者,二姨未婚二女儿是携带者,先证者幼小弟弟为正常者,即使年龄增大也不会发病。家系4中刚出生的先证者妹妹是携带者。结论:本研究的DMD/BMD家系的直接和间接连锁基因诊断结果,特别是症状前男性患者诊断结果、尚无患儿的女性携带者的检出结果,具有一定的临床意义,可以为遗传咨询和生育指导提供可靠依据。 展开更多

关键词 杜氏 贝氏肌营养不良症 基因诊断 多重pcr 短串联重复序列多态性 遗传连锁分析

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低温肉制品中3种食源性致病菌多重聚合酶链式反应快速检测方法的建立 被引量：12

9

作者 李新福 王周平 +3 位作者 李聪 方伶俐 赵颖 徐宝才 《肉类研究》 北大核心 2017年第2期45-50,共6页

针对低温肉制品中较易污染的沙门氏菌(Salmonella spp.)、单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)等有害微生物,利用多重聚合酶链式反应(multiplex polymerase chain reaction,m-PCR)的方法,对3... 针对低温肉制品中较易污染的沙门氏菌(Salmonella spp.)、单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)等有害微生物,利用多重聚合酶链式反应(multiplex polymerase chain reaction,m-PCR)的方法,对3种菌同时快速检测,从而达到节省时间,提高效率的目的。使用沙门氏菌的inv A基因、金黄色葡萄球菌的Prf A基因和单增李斯特菌nuc基因设计3对特异性引物,在确定特异性引物的基础上,将3种菌进行培养增菌后接种于低温肉制品中,过夜富集后收集并进行灵敏度检测,优化多重PCR反应体系并应用于实际样品的检测。结果表明:多重PCR方法在同时检测这3种有害微生物时,m-PCR最佳反应条件如下:25 μL反应体系、10×PCR缓冲液2.5 μL、2.5 mmol/L d NTPs 2.0 μL、2.5 U/μL的DNA聚合酶0.5 μL及上、下游引物各0.5 μL、单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌的模板1.0 μL、沙门氏菌的模板2.0 μL,加dd H_2O补足至25 μL,最佳退火温度为64℃。多重PCR快速检测方法适用于低温肉制品中沙门氏菌等3种食源性致病菌的检测,具有快速、灵敏、特异、简便等特点。 展开更多

关键词 低温肉制品 多重pcr 快速检测 食源性致病菌

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食品中3种致病菌多重PCR检测体系的建立及初步应用 被引量：12

10

作者 钱志伟 孙新城 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第16期236-239,共4页

目的:建立同步速测食品中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生性李斯特菌的多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法。方法:利用基因组比对法寻找3种致病菌的特异性序列——沙门氏菌的invA基因、金黄色葡萄球菌的nu... 目的:建立同步速测食品中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生性李斯特菌的多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法。方法:利用基因组比对法寻找3种致病菌的特异性序列——沙门氏菌的invA基因、金黄色葡萄球菌的nuc基因和单增李斯特菌的prs基因,运用Primer Premier 5.0分别设计3对片段大小不同的特异性引物;通过优化反应体系,建立3种致病菌的多重PCR检测体系。结果:建立的多重PCR方法灵敏度测试结果分别为7.6、3.8、5.1pg/μL,在此灵敏度下可以扩增出全部特异性引物条带,验证性实验结果出现相应的目的条带且未发生交叉影响。结论:初步建立能同步、简便、快速、灵敏地检测食品中沙门菌、金黄色葡萄球菌和单核细胞增生性李斯特菌的三重PCR方法。 展开更多

关键词 食源性致病菌 多重聚合酶链式反应(pcr) 沙门氏菌 金黄色葡萄球菌 单核细胞增生性李斯特菌 食品检测

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多重PCR-RFLP检测XRCC1基因两位点多态性 被引量：4

11

作者 王威 金如锋 +1 位作者 吴芬 夏昭林 《中国工业医学杂志》 CAS 北大核心 2008年第1期3-6,共4页

目的探讨多重聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(多重PCR-RFLP)技术在单核苷酸多态性检测中的应用。方法应用多重聚合酶链反应(Multiplex)(多重PCR)原理设计人类X射线交错互补修复基因1(XRCC1基因)194、399位点引物,通过PCR-RFLP技术判... 目的探讨多重聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(多重PCR-RFLP)技术在单核苷酸多态性检测中的应用。方法应用多重聚合酶链反应(Multiplex)(多重PCR)原理设计人类X射线交错互补修复基因1(XRCC1基因)194、399位点引物,通过PCR-RFLP技术判断XRCC1基因2个SNP位点多态性。结果设计的两对引物可同时PCR扩增分别含2个多态位点的DNA片段,MspI限制性内切酶酶切可判断2位点多态性,PCR和酶切效果均较好。结论多重PCR-RFLP技术可应用于单核苷酸多态位点的检测,并节省时间和费用,提高检测效率。 展开更多

关键词 多重pcr pcr-RFLP 单核苷酸多态性 XRCC1 引物设计

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多重PCR快速检测三种食品病原菌 被引量：6

12

作者 武卫影 马晓燕 张伟 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第18期90-92,95,共4页

建立一种快速、经济、实用的可以同步检测食品中金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌的多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的方法。根据金黄色葡萄球菌的nuc基因,沙门氏菌的invA基因,小肠结肠炎耶尔森氏菌... 建立一种快速、经济、实用的可以同步检测食品中金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌的多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的方法。根据金黄色葡萄球菌的nuc基因,沙门氏菌的invA基因,小肠结肠炎耶尔森氏菌的ail基因,分别设计了三对引物,对单个基因PCR和单管多重PCR扩增进行特异性、灵敏性实验以及优化反应体系。三对引物能特异性扩增出236、475、127bp的目的条带。建立的多重PCR同时对3种食源性致病菌进行检测具有较高的灵敏度,灵敏度金黄色葡萄球菌为102CFU/mL、沙门氏菌为102CFU/mL、小肠结肠炎耶尔森氏菌为102CFU/mL。初步建立能同步、简便、快速、灵敏地检测食品中金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和小肠结肠炎耶尔森氏菌的三重PCR方法。 展开更多

关键词 多重pcr 金黄色葡萄球菌 沙门氏菌 小肠结肠炎耶尔森氏菌

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多重聚合酶链反应-毛细管电泳-激光诱导荧光法检测三种食源性致病菌 被引量：6

13

作者 毛红霞 黎源倩 +2 位作者 裴晓方 何超 渠凌丽 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期473-477,共5页

建立了食品中常见致病菌大肠杆菌O157：H7的uidA基因、沙门菌的invA基因和志贺菌的ipaH基因的多重聚合酶链反应（PCR）产物的毛细管电泳快速检测方法。根据这3种致病菌的特异性基因序列设计多重PCR引物,优化PCR扩增反应体系,采用7.0g/L... 建立了食品中常见致病菌大肠杆菌O157：H7的uidA基因、沙门菌的invA基因和志贺菌的ipaH基因的多重聚合酶链反应（PCR）产物的毛细管电泳快速检测方法。根据这3种致病菌的特异性基因序列设计多重PCR引物,优化PCR扩增反应体系,采用7.0g/L甲基纤维素为筛分介质,毛细管电泳-激光诱导荧光检测法同时检测了3种常见致病菌的PCR扩增产物。在优化的多重PCR反应和毛细管筛分电泳条件下,该方法可以同时检测沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157：H7基因的多重PCR扩增产物,22min内即可完成3种常见致病菌的毛细管电泳检测。迁移时间的相对标准偏差为1.47%-2.07%。与凝胶电泳法比较,该法简便快速,灵敏度高,可用于多种致病菌脱氧核糖核酸的检测,为食品安全提供了一种可靠的快速检测方法。 展开更多

关键词 多重聚合酶链反应 毛细管电泳法 激光诱导荧光检测 食源性致病菌

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牛乳源金黄色葡萄球菌耐药性变迁及β内酰胺类药物耐药基因分析 被引量：6

14

作者 凡琴 刘书亮 +4 位作者 吴聪明 韩新锋 周康 刘冬香 侯小刚 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第3期147-151,共5页

采用肉汤微量稀释法,对203 株源于2006—2011年四川牛乳源金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,Sa)进行10 种常用抗生素药敏性检测,多重聚合酶链式反应(multiplex polymerase chain reaction,M-PCR)法对其耐甲氧西林基因(mecA)和β-... 采用肉汤微量稀释法,对203 株源于2006—2011年四川牛乳源金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,Sa)进行10 种常用抗生素药敏性检测,多重聚合酶链式反应(multiplex polymerase chain reaction,M-PCR)法对其耐甲氧西林基因(mecA)和β-内酰胺类药物耐药基因(blaZ)进行分析,了解Sa耐药性变迁。结果表明:牛乳源Sa菌株对青霉素、氨苄西林耐药率一直居高不下;对阿莫西林/克拉维酸、红霉素、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑耐药率有增强趋势;对林可霉素、四环素耐药率呈降低趋势;对环丙沙星耐药率不定;对苯唑西林和头孢噻呋敏感;Sa分离株多重耐药率介于72.1%～100.0%,显示出不尽相同的耐药谱,却呈现出不断增宽的趋势。M-PCR检测显示,2006—2011年分离Sa菌株未从基因水平扩增出mecA基因;不同年度分离株均不同程度携带blaZ基因,不同年度分离株blaZ+检出率介于49.1%～87.5%。药敏实验结果与相关耐药基因检测结果存在对应关系,部分菌株的耐药性与耐药基因的检出率不一致,推测还存在其他耐药机制。结论:四川地区牛乳源金黄色葡萄球菌耐药性不容乐观。 展开更多

关键词 生牛乳 金黄色葡萄球菌 耐药性 多重聚合酶链式反应 β内酰胺类耐药基因

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多重PCR检测缺失型α地中海贫血 被引量：5

15

作者 芮德蓉 闫宗合 +1 位作者 李巍 何蕴韶 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期186-187,共2页

目的　针对中国人常见的缺失型α地中海贫血建立一种快速、简便、可靠的多重聚合酶链反应 (PCR)基因诊断技术。方法　设计 4对引物 ,利用单管多重PCR方法进行扩增 ,同时检测 3种缺失型和正常的α2 珠蛋白基因。结果　成功检测出正常人... 目的　针对中国人常见的缺失型α地中海贫血建立一种快速、简便、可靠的多重聚合酶链反应 (PCR)基因诊断技术。方法　设计 4对引物 ,利用单管多重PCR方法进行扩增 ,同时检测 3种缺失型和正常的α2 珠蛋白基因。结果　成功检测出正常人及 3种缺失型的杂合子、双重杂合子 ;正常α2 基因的扩增片段为 180 0bp ,东南亚型缺失基因的扩增片段为 70 8bp ,右侧缺失基因的扩增片段为 2 0 2 2bp ,左侧缺失基因的扩增片段为 16 2 8bp , α3 .7/ SEA双重杂合子的扩增片段为 2 0 2 2bp和 70 8bp , α4.2 / SEA双重杂合子的扩增片段为 16 2 8bp和 70 8bp。结论　 790例标本的基因检测结果分析表明 ,该法快速、准确 ,可用于常规临床标本的检测。 展开更多

关键词 多重pcr检测 缺失型Α地中海贫血 基因诊断 α2珠蛋白基因 杂合子

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适用于结核分枝杆菌微测序耐药基因芯片的多重PCR体系的优化与评价 被引量：4

16

作者 孙照刚 李自慧 +4 位作者 张洪静 孙琦 潘丽萍 张宗德 许绍发 《临床肺科杂志》 2020年第2期163-166,共4页

目的优化结核分枝杆菌耐药相关基因多重PCR反应体系并评估其优缺点。方法利用改进的方法提取结核分枝杆菌基因组DNA,优化适合扩增rpoB,katG,mabA/inhA,pncA,embB,gyrA,rpsL,rrs和eis耐药基因片段的多重PCR体系,经测序确定所扩增出的基... 目的优化结核分枝杆菌耐药相关基因多重PCR反应体系并评估其优缺点。方法利用改进的方法提取结核分枝杆菌基因组DNA,优化适合扩增rpoB,katG,mabA/inhA,pncA,embB,gyrA,rpsL,rrs和eis耐药基因片段的多重PCR体系,经测序确定所扩增出的基因片段,计算PCR操作过程所用的时间和材料成本等,分析多重PCR反应体系存在的优缺点。结果经过优化煺火温度、引物浓度以及添加NH 4^+和二甲基亚砜可以较好的扩增出5重和4重PCR产物,达到两管同时扩增9个结核分枝杆菌耐药相关基因的目的。利用该条件可以扩增出全部培养出的135株菌株DNA样本和80.56%的痰菌DNA样本,并且可以缩短PCR操作时间、降低试剂耗材成本,减少操作失误。结论优化的两管多重PCR法在同时扩增9个结核分枝杆菌耐药相关基因,具有明显的优势,具有良好的实用价值。 展开更多

关键词 结核病 结核分枝杆菌 耐药 基因 多重pcr

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浙江汉族人群6个STR基因座的遗传多态性的调查 被引量：2

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作者 李佑英 吴微微 +1 位作者 刘建锋 徐林苗 《刑事技术》 2002年第3期18-19,共2页

目的进一步完善浙江省汉族人群STR基因座遗传多态性的调查,为其应用提供基础数据。方法采用AmpF1STRSGMplus和AmpF1STRCoficer反应试剂盒,使用ABI310型基因分析仪对浙江汉族人群200名无关个体血样进行了D16S539、D2S1338、D19S433、TH01... 目的进一步完善浙江省汉族人群STR基因座遗传多态性的调查,为其应用提供基础数据。方法采用AmpF1STRSGMplus和AmpF1STRCoficer反应试剂盒,使用ABI310型基因分析仪对浙江汉族人群200名无关个体血样进行了D16S539、D2S1338、D19S433、TH01、TPOX和CSF1PO6个STR基因座遗传学分析。结果分别发现了9、15、15、11、8、10个等位基因,发现的基因型分别为23、42、35、19、16、17个,其分布经X2检验均符合Hardy-Weinberg平衡定律,并分别统计了6个STR基因座的H、DP、PM、PE及PIC参数。结论6个STR基因座适合法医学应用。 展开更多

关键词 浙江汉族人群 STR基因座 遗传多态性 法庭科学 短串联重复序列 复合扩增

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快速鉴定B群链球菌及检测其耐药性方法的建立和初步应用 被引量：2

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作者 何其励 王欣 +5 位作者 黄娟 陈军剑 郭主声 张丽华 朱学海 杨维青 《微生物学免疫学进展》 2017年第4期27-32,共6页

目的建立快速鉴定B群链球菌(group B Streptococcus,GBS)的同时检测其对克林霉素、红霉素耐药基因的多重PCR方法,并初步应用。方法建立多重PCR方法,同时扩增以下4个基因位点:GBS编码CAMP因子的基因cfb、大环类脂类耐药基因erm B和mef A/... 目的建立快速鉴定B群链球菌(group B Streptococcus,GBS)的同时检测其对克林霉素、红霉素耐药基因的多重PCR方法,并初步应用。方法建立多重PCR方法,同时扩增以下4个基因位点:GBS编码CAMP因子的基因cfb、大环类脂类耐药基因erm B和mef A/E、克林霉素耐药基因lin B。对该方法的引物质量浓度、Taq酶量和退火温度进行优化,确定多重PCR最适反应体系及最低检测限;将该方法用于91株GBS临床菌株的鉴定及其耐药性的检测,并评价其与常规PCR方法结果的一致性。结果多重PCR的最适反应体系,总量25μL:多重PCR mix212.5μL、多重PCR mix1Taq酶0.23μL、lin B-F和lin B-R引物0.4μmol/L、mef A/E-F和mef A/E-R引物0.2μmol/L、erm B-F和erm B-R引物0.12μmol/L、cfb-F和cfb-R引物0.08μmol/L、DNA 10~100 ng、不足量补入无菌去离子水。扩增程序为:94℃预变性60 s;94℃变性30 s、53℃退火90 s、72℃延伸30 s,共30个循环;72℃延伸10 min。最低检测限为20 pg/μL。多重PCR方法与常规PCR方法检测91株GBS临床菌株,cfb基因结果一致率为100%,erm B、mef A/E和lin B基因的Kappa值分别为0.938、0.956和0.935。结论建立的以GBS cfb、erm B、mef A/E和lin B基因为检测位点的多重PCR方法,可在鉴定GBS的同时检测其对克林霉素、红霉素的耐药性。 展开更多

关键词 多重聚合酶链式反应 B群链球菌 耐药基因 快速鉴定

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适用于结核分枝杆菌微测序耐药基因芯片的多重PCR体系的优化与评价

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作者 孙照刚 李自慧 +4 位作者 张洪静 孙琦 潘丽萍 张宗德 许绍发 《结核病与胸部肿瘤》 2020年第1期7-10,共4页

目的优化结核分枝杆菌耐药相关基因多重PCR反应体系并评估其优缺点。方法利用改进的方法提取结核分枝杆菌基因组DNA,优化适合扩增rpoB,katG,mab4/inhA,pncA,embB,gyrA,rpsL,rrs和eis耐药基因片段的多重PCR体系,经测序确定所扩增出的基... 目的优化结核分枝杆菌耐药相关基因多重PCR反应体系并评估其优缺点。方法利用改进的方法提取结核分枝杆菌基因组DNA,优化适合扩增rpoB,katG,mab4/inhA,pncA,embB,gyrA,rpsL,rrs和eis耐药基因片段的多重PCR体系,经测序确定所扩增出的基因片段,计算PCR操作过程所用的时间和材料成本等,分析多重PCR反应体系存在的优缺点。结果经过优化煺火温度、引物浓度以及添加NH*和二甲基亚砜可以较好的扩增出5重和4重PCR产物,达到两管同时扩增9个结核分枝杆菌耐药相关基因的目的。利用该条件可以扩增出全部培养出的135株菌株DNA样本和80.56%的痰菌DNA样本,并且可以缩短PCR操作时间、降低试剂耗材成本,减少操作失误。结论优化的两管多重PCR法在同时扩增9个结核分枝杆菌耐药相关基因,具有明显的优势,具有良好的实用价值。 展开更多

关键词 结核病 分枝杆菌 结核 耐药 基因 多重pcr

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多重串联式PCR基因碟片技术检测转基因大豆GTS 40-3-2 被引量：5

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作者 魏霜 周广彪 +3 位作者 刘津 付伟 张志强 吴希阳 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第2期244-249,共6页

建立多重串联式PCR(MT-PCR)的基因碟片技术用于转基因大豆GTS40-3-2的检测。针对GTS 40-3-2的常见外源基因NOS终止子、CP4-EPSPS、Ca MV35S启动子和大豆内源基因Lectin设计引物,同时针对外源基因插入位点的旁临序列设计品系特异性引物... 建立多重串联式PCR(MT-PCR)的基因碟片技术用于转基因大豆GTS40-3-2的检测。针对GTS 40-3-2的常见外源基因NOS终止子、CP4-EPSPS、Ca MV35S启动子和大豆内源基因Lectin设计引物,同时针对外源基因插入位点的旁临序列设计品系特异性引物。首先进行一次循环数较少(15 cycles),引物浓度较低(0.1μmol/L)的高通量多重PCR,以均匀地扩增各基因模板,同时避免引物之间的竞争,然后利用巢式荧光定量PCR检测各个基因。根据熔融曲线分析结果,灵敏度高于普通荧光定量PCR法1个数量级。该方法能够快速、高通量、准确地检测转基因大豆GTS40-3-2中的多种转基因成分,并能对该品系进行分析,重复性好,适合转基因的高通量、定量检测,可用于特异性检测转基因大豆GTS40-3-2,具有较好的应用价值。 展开更多

关键词 转基因 多重串联式pcr 检测

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