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弯曲菌多重PCR检测方法的建立及其初步应用 被引量：50
1
作者 何蕊 黄金林 +3 位作者 许海燕 苏洁 潘志明 焦新安 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期5-8,共4页
以16S rRNA、mapA和ceuE为靶基因,建立检测空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的多重PCR方法。特异性试验能分别扩增出空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的特异性条带,其他参考菌株均未扩增出条带;敏感性试验表明,基于增菌培养和选择性培养的多重PCR方法对弯... 以16S rRNA、mapA和ceuE为靶基因,建立检测空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的多重PCR方法。特异性试验能分别扩增出空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的特异性条带,其他参考菌株均未扩增出条带;敏感性试验表明,基于增菌培养和选择性培养的多重PCR方法对弯曲菌检测限为10 mL或10 g模拟污染样品,最低可检测0.925 pg.μL-1空肠弯曲菌DNA和1.050 pg.μL-1结肠弯曲菌DNA。以国家标准为参照,应用该方法对180份生鲜鸡肉样品进行检测,结果表明多重PCR方法具有快速、简便、特异性强和灵敏度高等特点,可克服传统生化鉴定和血清学方法的不足,为弯曲菌检测提供新的技术。 展开更多
关键词 空肠弯曲菌 结肠弯曲菌 多重pcr 快速检测
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多重PCR技术在病原检测中的应用 被引量：51
2
作者 赵红庆 苑锡铜 黄留玉 《生物技术通讯》 CAS 2007年第5期863-865,共3页
多重PCR能够同时扩增不同片段,具有普通PCR方法不可比拟的优势。简要论述了多重PCR在细菌病原体的检测、病毒病原体的检测、支原体和衣原体及寄生虫的检测、微生物耐药性检测等方面的应用,分析了多重PCR的影响因素及条件优化,并进一步... 多重PCR能够同时扩增不同片段,具有普通PCR方法不可比拟的优势。简要论述了多重PCR在细菌病原体的检测、病毒病原体的检测、支原体和衣原体及寄生虫的检测、微生物耐药性检测等方面的应用,分析了多重PCR的影响因素及条件优化,并进一步综述了多重PCR的应用前景。 展开更多
关键词 多重pcr 病原 检测 影响因素
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沙门氏菌多重PCR检测方法的建立 被引量：33
3
作者 邵碧英 陈彬 +2 位作者 汤敏英 吴谦 张体银 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第10期489-492,共4页
采用CTAB/NaCl法提取沙门氏菌及对照菌株的基因组DNA。对引物浓度、TaqDNA聚合酶用量进行优化,建立了沙门氏菌属特异基因-hut基因(495bp)、hilA基因(490bp)、invA基因(284bp)和hns基因(152bp)间的多重PCR检测方法,并进行了灵敏度测试。... 采用CTAB/NaCl法提取沙门氏菌及对照菌株的基因组DNA。对引物浓度、TaqDNA聚合酶用量进行优化,建立了沙门氏菌属特异基因-hut基因(495bp)、hilA基因(490bp)、invA基因(284bp)和hns基因(152bp)间的多重PCR检测方法,并进行了灵敏度测试。结果表明,建立的多重PCR检测结果与预期一致,二重PCR的检测灵敏度与单一PCR的一致,三重PCR检测灵敏度有所下降。 展开更多
关键词 沙门氏菌 基因组DNA 多重pcr 检测灵敏度
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应用多重RT-PCR检测百合无症病毒和百合斑驳病毒 被引量：30
4
作者 王继华 王丽花 +3 位作者 丁元明 瞿素萍 熊丽 唐开学 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期284-287,共4页
根据病毒外壳蛋白基因序列,设计了2对检测百合无症病毒(LSV)、百合斑驳病毒(LMoV)的引物,对扩增条件进行优化,建立了同时检测LSV和LMoV的多重RTPCR检测方法。此方法可特异地从带有LSV和LMoV的样品中扩增出2条带LSV(876bp)、LMoV(662bp)... 根据病毒外壳蛋白基因序列,设计了2对检测百合无症病毒(LSV)、百合斑驳病毒(LMoV)的引物,对扩增条件进行优化,建立了同时检测LSV和LMoV的多重RTPCR检测方法。此方法可特异地从带有LSV和LMoV的样品中扩增出2条带LSV(876bp)、LMoV(662bp)。灵敏性测定结果表明,该双重PCR可从稀释104组织中检测出病毒,具有与单一PCR相同的灵敏性。扩增产物测序表明,LSV扩增产物与其它分离物核苷酸同源性为87.8%～99.3%,LMoV扩增产物与其它分离物的同源性为90.1%～99.5%。 展开更多
关键词 多重pcr 检测 百合无症病毒 百合斑驳病毒
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食品中4种致病微生物的多重PCR快速检测技术研究 被引量：35
5
作者 杨平 杨迎伍 +2 位作者 陈伟 王国民 李正国 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期90-94,共5页
传统微生物检测方法耗时长、灵敏性差,难以满足食品安全快速检测要求,建立和完善食品中致病微生物快速检测技术具有重要的现实意义.本研究针对沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌和单核细胞增生性李斯特菌,根据其特异基因设计出4对引物... 传统微生物检测方法耗时长、灵敏性差,难以满足食品安全快速检测要求,建立和完善食品中致病微生物快速检测技术具有重要的现实意义.本研究针对沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌和单核细胞增生性李斯特菌,根据其特异基因设计出4对引物,通过对食品样品进行梯度离心处理、改良异硫氰酸胍法提取基因组DNA和多重PCR(multiplex PCR)条件的优化,建立了这4种食源性致病微生物的多重PCR检测方法.通过人工污染检测和市场样品检测,同时进行传统方法验证,结果表明:该检测方法简单、快速、准确、灵敏度高,只需经过增菌4～8h其最低检出限可达1cfu/mL,具有较强的实际应用价值,可广泛应用于食品卫生检测和临床检验等领域. 展开更多
关键词 食源性致病微生物 多重pcr 快速检测
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基因芯片技术检测3种食源性致病微生物方法的建立 被引量：35
6
作者 陈昱 潘迎捷 +4 位作者 赵勇 金维荣 秦红友 徐晓晶 唐明未 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期285-291,共7页
建立一种运用多重PCR和基因芯片技术检测和鉴定志贺氏菌、沙门氏菌、大肠杆菌O157的方法,为3种食源性致病菌的快速检测和鉴定提供了准确、快速、灵敏的方法。分别选取编码志贺氏菌侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)、沙门氏菌肠毒素(stn)基因... 建立一种运用多重PCR和基因芯片技术检测和鉴定志贺氏菌、沙门氏菌、大肠杆菌O157的方法,为3种食源性致病菌的快速检测和鉴定提供了准确、快速、灵敏的方法。分别选取编码志贺氏菌侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)、沙门氏菌肠毒素(stn)基因和致泻性大肠杆菌O157志贺样毒素(slt)基因设计引物和探针,进行三重PCR扩增,产物与含特异性探针的芯片杂交。对7种细菌共26株菌进行芯片检测,仅3种菌得到阳性扩增结果,证明此方法具有很高的特异性。3种致病菌基因组DNA和细菌纯培养物的检测灵敏度约为8pg。对模拟食品样品进行直接检测,结果与常规细菌学培养结果一致,检测限为50CFU/mL。结果表明:所建立的基因芯片检测方法特异性好,灵敏度高,为食源性致病菌的检测提供了理想手段,有良好的应用前景。 展开更多
关键词 基因芯片 多重pcr 微生物 检测
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多重PCR技术在食品微生物检测中的应用进展 被引量：33
7
作者 陈诺 唐善虎 +1 位作者 岑璐伽 李雪 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第10期72-75,共4页
聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术在微生物检测中具有快速、灵敏、操作简单等优点,而多重PCR检测还可以同时扩增多个目的基因,对高效快速检测具有重要意义,已经成为近几年来的研究热点。作者对近来多重PCR技术在食品... 聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术在微生物检测中具有快速、灵敏、操作简单等优点,而多重PCR检测还可以同时扩增多个目的基因,对高效快速检测具有重要意义,已经成为近几年来的研究热点。作者对近来多重PCR技术在食品病原微生物、食品非致病微生物及相关环境食品微生物中应用的研究现状,以及未来在食品检测中的应用展望进行了综述。 展开更多
关键词 多重pcr 食品 微生物检测
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多重PCR技术在植物生物学研究中的应用 被引量：29
8
作者 刘正斌 高庆荣 +2 位作者 王瑞霞 乔晓琳 邱新民 《分子植物育种》 CAS CSCD 2005年第2期261-268,共8页
多重PCR是近几年兴起的一项新技术,它高效快捷﹑高度特异敏感﹑能够降低实验成本很适宜于大样本的植物生物学研究。本文较为详细地介绍了多重PCR的概念、原理及其在国内外植物种质纯度鉴定、病虫害检测和植物分子育种中的应用现状,并对... 多重PCR是近几年兴起的一项新技术,它高效快捷﹑高度特异敏感﹑能够降低实验成本很适宜于大样本的植物生物学研究。本文较为详细地介绍了多重PCR的概念、原理及其在国内外植物种质纯度鉴定、病虫害检测和植物分子育种中的应用现状,并对其应用前景作了展望。 展开更多
关键词 多重pcr技术 种质 分子育种 纯度鉴定 病虫害 植物生物学 应用现状 物种 敏感
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多重PCR方法快速检测猪的5种呼吸道病原菌 被引量：25
9
作者 薛云 赵战勤 +5 位作者 陈杨 邹浩勇 何启盖 李文洁 熊金凤 陈焕春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1222-1228,共7页
猪胸膜肺炎放线杆菌(App)、副猪嗜血杆菌(Hps)、支气管败血波氏杆菌(Bb)、产毒性多杀巴氏杆菌(T+Pm)和猪肺炎支原体(Mhp)是最常见的几种猪呼吸道病原菌。笔者参照文献报道的基因序列设计针对App、Hps、Bb、T+Pm和Mhp的特异性引物,对单一... 猪胸膜肺炎放线杆菌(App)、副猪嗜血杆菌(Hps)、支气管败血波氏杆菌(Bb)、产毒性多杀巴氏杆菌(T+Pm)和猪肺炎支原体(Mhp)是最常见的几种猪呼吸道病原菌。笔者参照文献报道的基因序列设计针对App、Hps、Bb、T+Pm和Mhp的特异性引物,对单一PCR条件进行系统优化后建立5重PCR方法。该多重PCR方法能对同一样品中5种病原菌的DNA模板进行扩增,且在5种病原菌之间没有交叉反应;对大肠杆菌等其它6种常见猪细菌性病原的检测结果均为阴性;对5种病原菌DNA模板检出的最小量均低于160 pg,且能从攻毒小鼠(App、Hps、Bb和T+Pm)肺脏组织8 h增菌的培养物中快速检测出相应的病原菌。对中国华中地区269份临床样本的检测结果表明,5种呼吸道病原菌在华中地区猪群中普遍存在,且混合感染情况十分严重。这些试验结果表明该多重PCR方法可用于猪呼吸道病原菌App、Hps、Bb、T+Pm和Mhp的单一或混合感染的鉴别诊断及病原流行病学调查。 展开更多
关键词 猪 呼吸道病原 多重pcr 检测
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多重PCR检测猪细小病毒和猪伪狂犬病病毒的研究 被引量：22
10
作者 李小康 赵丽 +2 位作者 崔保安 陈红英 魏战勇 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期227-230,共4页
根据GenBank上已发表的猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)的VP2基因序列和猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)的gH基因序列,设计合成了两对特异引物,分别建立了PPV和PRV的单项PCR诊断方法,通过对扩增条件的筛选,最终成... 根据GenBank上已发表的猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)的VP2基因序列和猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)的gH基因序列,设计合成了两对特异引物,分别建立了PPV和PRV的单项PCR诊断方法,通过对扩增条件的筛选,最终成功地建立了PPV和PRV的复合PCR诊断方法,即利用一次PCR反应,可同时扩增PPV的751bp和PRV355bp的特异性片段,而扩增猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)及相应的培养细胞(PK-15)核酸结果均为阴性,对PPV和PRV的最低检出量分别为100pg和10pg的DNA。该方法适合对PPV和PRV的联合检测和鉴别诊断。 展开更多
关键词 复合pcr 检测 PPV PRV
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正交优化多重PCR反应体系检测3种食源性致病菌的研究 被引量：24
11
作者 郝玉芹 孙皆宜 +2 位作者 李艾 杨国兴 张伟 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第2期602-605,共4页
[目的]建立金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、志贺氏菌的快速、敏感、特异的多重PCR检测方法。[方法]根据金黄色葡萄球菌的nuc基因、沙门氏菌的IpaB基因、志贺氏菌的ipaH基因,设计3对特异性引物进行多重PCR检测,利用正交设计对多重PCR反应体... [目的]建立金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、志贺氏菌的快速、敏感、特异的多重PCR检测方法。[方法]根据金黄色葡萄球菌的nuc基因、沙门氏菌的IpaB基因、志贺氏菌的ipaH基因,设计3对特异性引物进行多重PCR检测,利用正交设计对多重PCR反应体系的镁离子、Taq酶、dNTP、引物的浓度在4个水平上进行L16(44)优化试验,并确定该检测方法的特异性与灵敏度。[结果]3对引物能特异性扩增出210、280、393 bp的目的条带。利用FTA滤膜提取模板DNA,采用建立多重PCR同时对3种食源性致病菌进行检测具有较高的灵敏度,灵敏度金黄色葡萄球菌为3.5×102cfu/ml、沙门氏菌为2.2×102cfu/ml、志贺氏菌为1.0×102cfu/ml。[结论]该检测方法准确、快速、高效,为同时检测食品中多种致病菌奠定了基础。 展开更多
关键词 多重pcr 食源性致病菌 检测 FTA滤膜
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荧光假单胞菌、沙门氏菌和单增李斯特菌多重PCR检测方法的建立 被引量：22
12
作者 胡冰雪 舒沿沿 +2 位作者 潘道东 曾小群 吴振 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第20期209-214,共6页
针对肉制品中易污染的荧光假单胞菌、沙门氏菌和单增李斯特菌等有害微生物,通过3种标准菌株及肉制品建立多重聚合酶链式反应方法,实现肉制品中这3种菌的同时、快速检测。利用荧光假单胞菌的gyrB基因、沙门氏菌的invA基因和单增李斯特菌... 针对肉制品中易污染的荧光假单胞菌、沙门氏菌和单增李斯特菌等有害微生物,通过3种标准菌株及肉制品建立多重聚合酶链式反应方法,实现肉制品中这3种菌的同时、快速检测。利用荧光假单胞菌的gyrB基因、沙门氏菌的invA基因和单增李斯特菌的hly A基因设计3对特异性引物,在确定引物特异性的基础上,对3种标准菌株及在冷却肉上过夜富集后进行灵敏度检测。结果表明,该多重聚合酶链式反应方法对于同时检测这3种有害微生物具有高度的特异性;同时检测这3种菌时,纯菌DNA检测限可达1 pg/μL;将3种菌一起接种到冷却肉中35℃过夜培养后,荧光假单胞菌、沙门氏菌和单增李斯特菌的检测限分别可达到9、5、70 CFU/m L。 展开更多
关键词 多重聚合酶链式反应 检测方法 荧光假单胞菌 沙门氏菌 单增李斯特菌
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检测致泻大肠杆菌的多重PCR方法的建立与应用 被引量：21
13
作者 林杰 陈爱平 +4 位作者 杨劲松 陈建辉 徐海滨 郑金凤 严延生 《预防医学论坛》 2012年第12期881-884,共4页
[目的]解决从大量标本中检测5种致泻大肠杆菌工作繁重的问题,提高检测的准确性与效率,尝试建立多重PCR的方法。[方法]2012年,应用多重PCR或单重PCR方法检测致泻大肠杆菌的EPEC/EHEC的eaeA基因、EHEC的stx基因、EAEC的aggR基因、EIEC的i... [目的]解决从大量标本中检测5种致泻大肠杆菌工作繁重的问题,提高检测的准确性与效率,尝试建立多重PCR的方法。[方法]2012年,应用多重PCR或单重PCR方法检测致泻大肠杆菌的EPEC/EHEC的eaeA基因、EHEC的stx基因、EAEC的aggR基因、EIEC的ipaH和virA基因、ETEC的ST和LT基因、EPEC的bfp基因。对多重PCR方法的建立进行改进优化。同时结合API 20E生化鉴定条和常规血清学诊断方法进行综合的判断。[结果]应用已建立的多重PCR方法,从175株福建省监测点分离的可疑致泻大肠杆菌中检出1株EAEC,1株tEPEC,4株aEPEC,13株ETEC;能将本实验室保存的福建省分离的2株O157∶H7和2株EIEC正确鉴定。[结论]本研究建立的方法能够正确地检出相关病原菌,提高了工作效率。 展开更多
关键词 致泻大肠杆菌 多重pcr 检测
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6种食品致病菌的多重PCR检测 被引量：18
14
作者 焦豫良 张兴群 +6 位作者 李振勇 李智涛 吕文川 郭志武 崔天星 邵大晓 景建洲 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期256-258,共3页
目的寻求食物中毒诊断及食品检测的有效方法。方法建立多重PCR体系一次检测多种食品致病菌方法。结果可以一次检测出肠毒性大肠埃希菌(E.coli-ETEC),蜡样芽胞杆菌(Bacilluscereus),沙门菌属(Salmonellaspp),大肠埃希菌O157:H7(E.coli-O1... 目的寻求食物中毒诊断及食品检测的有效方法。方法建立多重PCR体系一次检测多种食品致病菌方法。结果可以一次检测出肠毒性大肠埃希菌(E.coli-ETEC),蜡样芽胞杆菌(Bacilluscereus),沙门菌属(Salmonellaspp),大肠埃希菌O157:H7(E.coli-O157:H7),志贺菌属(Shigellaspp),霍乱弧菌(Vibriocholerae)等菌属或菌。结论多重PCR体系检测6种菌DNA的灵敏度最低为10.30fg,与单独的PCR检测的灵敏度相同。将它做成体外基因诊断试剂盒,将成为细菌性食物中毒诊断及食品检测的有效工具。 展开更多
关键词 多重pcr检测 致病菌 细菌性食物中毒 蜡样芽胞杆菌 食品检测 诊断试剂盒 有效方法 O157 霍乱弧茵 体外基因 灵敏度 DNA 大肠
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应用多重聚合酶链式反应检测鸡毒支原体、鸡滑液囊支原体和禽衣阿华支原体的研究 被引量：20
15
作者 谢志勤 谢芝勋 +2 位作者 庞耀珊 邓显文 刘加波 《畜牧与兽医》 北大核心 2000年第5期4-6,共3页
根据鸡毒支原体 (MG)、禽衣阿华支原体 (MI)、鸡滑液囊支原体 (MS)的基因文库 ,设计了 3对分别与MG、MI、MS某段基因序列互补的引物。用这 3对引物对同一样品中的MG、MI、MSDNA模板进行多重聚合酶链式反应 (PCR)扩增 ,结果均同时得到了 ... 根据鸡毒支原体 (MG)、禽衣阿华支原体 (MI)、鸡滑液囊支原体 (MS)的基因文库 ,设计了 3对分别与MG、MI、MS某段基因序列互补的引物。用这 3对引物对同一样品中的MG、MI、MSDNA模板进行多重聚合酶链式反应 (PCR)扩增 ,结果均同时得到了 3条特异性的大小与实验设计相符的 732bp (MG)、 2 99bp (MI)、 2 0 7bp (MS)多重的PCR扩增带 ,而对其他 6种禽病病原的PCR扩增结果均为阴性 ;敏感性测定结果能同时检出 1pg的MG。 展开更多
关键词 多重聚合酶链式反应 MG MS MI 早期鉴别诊断
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转基因抗草甘膦油菜的实用PCR检测方法 被引量：17
16
作者 潘爱虎 张大兵 +3 位作者 潘良文 陈家华 袁政 梁婉琪 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第7期856-860,共5页
利用定性PCR技术 ,建立了检测孟山都公司培育的转基因抗草甘膦油菜中的epsps、gox和fmv35s的方法 ,同时设立了阳性内对照napin。该方法的检测灵敏度为 0 .0 5 %。利用复合PCR可以在一个PCR反应中同时检测出epsps、gox、fmv35s和napin基... 利用定性PCR技术 ,建立了检测孟山都公司培育的转基因抗草甘膦油菜中的epsps、gox和fmv35s的方法 ,同时设立了阳性内对照napin。该方法的检测灵敏度为 0 .0 5 %。利用复合PCR可以在一个PCR反应中同时检测出epsps、gox、fmv35s和napin基因。这种方法可以有效地用于转基因抗草甘膦油菜中的外源基因的检测。 展开更多
关键词 转基因抗草甘膦油菜 pcr检测方法 灵敏度 外源基因 检测技术
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禽致病性大肠杆菌毒力基因多重PCR方法的建立和应用 被引量：20
17
作者 孟庆美 王少辉 +4 位作者 韩先干 韩月 丁铲 戴建君 于圣青 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期696-702,共7页
【目的】建立禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)黏附相关基因、侵袭及毒素相关基因、抗血清存活相关基因及铁转运相关基因的多重PCR方法,实现禽致病性大肠杆菌毒力基因的简便、快速检测。【方法】根据GenBank... 【目的】建立禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)黏附相关基因、侵袭及毒素相关基因、抗血清存活相关基因及铁转运相关基因的多重PCR方法,实现禽致病性大肠杆菌毒力基因的简便、快速检测。【方法】根据GenBank公布的基因序列,设计合成18对特异性引物,通过条件优化,建立四组多重PCR体系,并通过模板倍比稀释检测各组多重PCR的灵敏性。利用多重PCR检测100株APEC毒力基因的分布,验证多重PCR方法的可行性。【结果】根据PCR扩增片段大小判定,上述四组多重PCR体系均能同时扩增出该组中的各个毒力基因,且灵敏度分别为:103CFU、103CFU、105CFU、105CFU细菌和1ng、1ng、10ng、10ng DNA。100株APEC的毒力因子检测结果显示,多重PCR和单基因PCR结果一致。【结论】建立的四组多重PCR方法能够简便、快速地检测禽致病性大肠杆菌的毒力基因,可用于毒力基因的鉴定以及流行病学调查。 展开更多
关键词 禽致病性大肠杆菌 毒力基因 多重pcr 检测
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鲜切果蔬中4种病原微生物多重PCR检测技术 被引量：19
18
作者 冯可 胡文忠 +4 位作者 姜爱丽 萨仁高娃 徐永平 司琦 马新秀 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第6期276-283,共8页
研发可同时检测鲜切果蔬中的单核细胞性李斯特菌、鼠伤寒沙门菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌O157:H7的多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法。根据单核细胞性李斯特菌inl A基因、鼠伤寒沙门菌inv A基因、大肠杆菌O... 研发可同时检测鲜切果蔬中的单核细胞性李斯特菌、鼠伤寒沙门菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌O157:H7的多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法。根据单核细胞性李斯特菌inl A基因、鼠伤寒沙门菌inv A基因、大肠杆菌O157:H7 wzy基因、金黄色葡萄球菌nuc基因设计及筛选出4对引物。对多重PCR体系及条件进行优化。该方法对单核细胞性李斯特菌、鼠伤寒沙门菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌O157:H7的检出限分别为3.5×10~6、1.6×10~5、2.4×10~5、4.8×10~5 CFU/m L。将优化的多重PCR方法对不同接种量富集后验证,结果表明,经过9 h富集后,该方法检出限为1 CFU/m L。该方法在鲜切莴苣、鲜切黄瓜、鲜切木瓜、鲜切哈密瓜中应用同样可扩增出4条目标菌。因此,利用所建立的多重PCR方法对鲜切果蔬中侵染的病原菌检出限可达到1 CFU/g。该方法相较于传统的培养检测方法具有节约大量的劳力、试剂、时间等优点,检测时间也由原来的5~7 d缩短至9~11 h,对于企业或分析检验中心大批量样品的监测具有指导意义。 展开更多
关键词 多重pcr 快速检测 食源性病原微生物 鲜切果蔬
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多重PCR技术在病原微生物检测中的应用 被引量：19
19
作者 白菊红 康建平 +4 位作者 张星灿 华苗苗 刘建 杨健 钟雪婷 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第7期322-325,331,共5页
多重PCR技术特异性强、灵敏度高,被广泛应用于生命科学研究的各个领域。本文阐述了多重PCR技术原理,并就其近年来在人类、动物疾病、农作物病害、食源性致病微生物等方面的研究进行了介绍,提出了该技术目前存在的问题,并对其前景进行了... 多重PCR技术特异性强、灵敏度高,被广泛应用于生命科学研究的各个领域。本文阐述了多重PCR技术原理,并就其近年来在人类、动物疾病、农作物病害、食源性致病微生物等方面的研究进行了介绍,提出了该技术目前存在的问题,并对其前景进行了展望,旨在为多重PCR技术更好的应用提供参考。 展开更多
关键词 多重pcr 原理 病原微生物检测
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二温式多重PCR检测鉴别对虾白斑综合征病毒(WSSV)和传染性皮下及造血器官坏死病毒(IHHNV)的研究与应用 被引量：19
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作者 谢芝勋 庞耀珊 +2 位作者 刘加波 邓显文 唐小飞 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期9-12,24,共5页
建立了一种同时检测对虾白斑综合征病毒(WSSV)、传染性皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)的二温式多重PCR技术。根据基因库中WSSV(AF369029)和IHHNV(NC002190)基因序列,设计了两对分别与WSSV和IHHNV某段保守基因序列互补的引物,用这两对引... 建立了一种同时检测对虾白斑综合征病毒(WSSV)、传染性皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)的二温式多重PCR技术。根据基因库中WSSV(AF369029)和IHHNV(NC002190)基因序列,设计了两对分别与WSSV和IHHNV某段保守基因序列互补的引物,用这两对引物对同一样品中的WSSV和IHHNV DNA模板进行多重PCR扩增,结果均同时得到了两条大小与实验设计相符的593 bp(WSSV)和356 bp(IHHNV)特异性多重PCR扩增条带,而对其他对虾疾病病原的PCR扩增结果均为阴性;敏感性测定结果表明,该多重PCR技术最低能检测到WSSV和IHHNV DNA各100 pg。用该多重PCR对400份临床病料进行检测,结果230份检出WSSV,阳性率57.5%;96份检出IHHNV,阳性率24%;56份同时检出WSSV和IHHNV,阳性率14%。18份为阴性,阴性率为4.5%。结果提示了WSSV和IHHNV广泛存在于中国南方的养殖对虾中,作者建立的二温式多重PCR可以用于这两种病毒的临床快速检测和鉴别诊断。 展开更多
关键词 多重聚合酶链式反应 检测 对虾 白斑综合征病毒(WSSV) 传染性皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)
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