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转基因大豆、玉米、水稻深加工产品的五重巢式PCR技术检测 被引量：25
1
作者 敖金霞 高学军 +2 位作者 于艳波 曲波 李庆章 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期93-99,共7页
本试验针对已商品化的转基因大豆、玉米和水稻的主要外源基因Cry1A(B)基因、BAR基因、CP4-EPSPS基因和PAT基因及共有的内标准基因RBCL基因设计了10对引物,对从超市购买的进口大豆、玉米和水稻的11种深加工制品(未标注是否含有转基因成分... 本试验针对已商品化的转基因大豆、玉米和水稻的主要外源基因Cry1A(B)基因、BAR基因、CP4-EPSPS基因和PAT基因及共有的内标准基因RBCL基因设计了10对引物,对从超市购买的进口大豆、玉米和水稻的11种深加工制品(未标注是否含有转基因成分)进行了五重巢式PCR定性检测。第1轮普通五重PCR检测,11个待测样品均未出现任何转基因成分,其灵敏度为0.5%;第2轮将普通五重PCR扩增产物进行五重巢式PCR检测,结果在卵磷脂、大豆蛋白质粉、巧克力饮品和婴儿米粉中扩增出RBCL基因,玉米淀粉和玉米泥中扩增出RBCL基因、Cry1A(B)基因和PAT基因;玉米蛋白粉扩增出RBCL基因、Cry1A(B)基因和BAR基因,营养麦片扩增出内参RBCL基因和Cry1A(B)基因,在大豆精炼油、色拉油和玉米油中未检测出上述2种基因和另外3种外源基因CP4-EPSPS、BAR和PAT,其检测灵敏度为0.005%。结果提示,五重巢式PCR检测方法适用于转基因大豆、玉米和水稻深加工产品的定性检测。 展开更多
关键词 转基因 大豆 玉米 水稻 深加工产品 五重巢式pcr
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检测4种人体疟原虫多重PCR体系的建立和应用 被引量：26
2
作者 李美 夏志贵 汤林华 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期91-95,共5页
目的 应用新建的多重PCR体系检测4种人体疟原虫。 方法 应用DNAman软件比较分析4种人体疟原虫的18S rDNA基因序列，采用Oligo 6.0软件，在其第5和第6保守区间的变异区设计4条下游引物序列，并以含4种疟原虫18S rDNA部分序列的质粒DNA为... 目的 应用新建的多重PCR体系检测4种人体疟原虫。 方法 应用DNAman软件比较分析4种人体疟原虫的18S rDNA基因序列，采用Oligo 6.0软件，在其第5和第6保守区间的变异区设计4条下游引物序列，并以含4种疟原虫18S rDNA部分序列的质粒DNA为模板，检测多重PCR体系的特异性和敏感性。此外，将新建的多重PCR体系与NP-1993体系的第1轮属特异引物组合，形成新的巢式PCR扩增体系（M-Nest体系），并用该体系和新建的多重PCR体系对不同稀释倍数的恶性疟和间日疟患者血样DNA进行扩增，检测这两种体系的敏感性。应用M-Nest体系和NP-1993体系检测广西2013年自加纳疟疾高流行区返乡人员的307份血样，比较两者的检测结果是否一致。最后，应用M-Nest和NP-2002体系对广西2014年1～5月份报告的66份镜检以卵形疟原虫感染为主的血样进行复核，比较两者的检测结果是否一致。 结果 应用新建的多重PCR体系得到的恶性疟原虫、三日疟原虫、卵形疟原虫和间日疟原虫的扩增片段大小分别为268、446、394和323 bp，且不同原虫的扩增条带恰好位于50 bp DNA标志物条带之间，更易于区分，但不同疟原虫的Tm值较为接近，不易区分和鉴别虫种。新建体系对4种疟原虫18S rDNA基因的最低检出浓度分别为：恶性疟原虫5.58×102 拷贝/μl，三日疟原虫1.56×103 拷贝/μl，卵形疟原虫1.66×103 拷贝/μl，间日疟原虫1.80×102 拷贝/μl。新建体系对恶性疟原虫血样的最低检测浓度为1.43×102～8.84×103 拷贝/μl或5.10×10～4.92×102个原虫/μl，高于间日疟原虫的17.4～69.1 拷贝/μl和13.5～83.2个原虫/μl。与单独的多重PCR体系相比，应用M-Nest检测体系将对疟原虫的最低检测浓度降低了10～100倍。M-Nest体系和NP-1993体系对从加纳返乡的307份血样的检测结果不一致，并且M-Nest体系还检测到2例卵形疟原虫感染，而NP-1993体系则未能检� 展开更多
关键词 多重pcr 巢式pcr 卵形疟原虫wallikeri亚种
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4种病原菌“单管一步法”PCR快速检测方法的建立 被引量：2
3
作者 潘雅君 徐汪节 +2 位作者 彭丽娜 乔中东 王朝霞 《实验室研究与探索》 CAS 北大核心 2021年第5期68-72,共5页
为了检测实验动物常见的4种条件性致病菌:肺炎克雷伯杆菌、金黄色葡萄球菌、嗜肺巴斯德杆菌和绿脓杆菌,提出一种可更准确、灵敏、快速、简便的多重巢式PCR方法(MN-PCR)。根据待检微生物16S rDNA序列的保守区和可变区分别设计通用引物和... 为了检测实验动物常见的4种条件性致病菌:肺炎克雷伯杆菌、金黄色葡萄球菌、嗜肺巴斯德杆菌和绿脓杆菌,提出一种可更准确、灵敏、快速、简便的多重巢式PCR方法(MN-PCR)。根据待检微生物16S rDNA序列的保守区和可变区分别设计通用引物和特异引物,通过两种引物长短差异化创新设计,将模板富集和特异片段扩增两个过程整合为单个反应体系内的一步PCR反应。结果表明,MN-PCR方法能够在标准株DNA混合模板中同时扩增出4条待检测片段;而在阴性对照组中未检测出任何片段。MN-PCR方法在实际检测应用中能够成功检测出细菌感染阳性样本,且未扩增出其他微生物的特异性条带。建立的MN-PCR体系可以同时检测实验动物咽拭子等临床样本中的多种病原菌,与常规多重PCR方法相比,该方法具有特异性和灵敏度高、操作简便、节省时间等优点。 展开更多
关键词 多重巢式pcr 肺炎克雷伯杆菌 金黄色葡萄球菌 嗜肺巴斯德杆菌 绿脓杆菌 小鼠
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多引物嵌套式聚合酶链反应在艾滋病病毒感染诊断中的应用 被引量：1
4
作者 吴守丽 严延生 《中国性病艾滋病防治》 2002年第4期216-218,共3页
目的 评价多引物嵌套式聚合酶链反应(Nested-PCR)在艾滋病病毒(HIV)感染诊断中的应用。方法 采用柱离心式小量组织/细胞基因组脱氧核糖核酸(DNA)抽提试剂盒提取DNA。用3套分别来自于长末湍重复序列(LTR)-gag、pol、env不同区域的序列引... 目的 评价多引物嵌套式聚合酶链反应(Nested-PCR)在艾滋病病毒(HIV)感染诊断中的应用。方法 采用柱离心式小量组织/细胞基因组脱氧核糖核酸(DNA)抽提试剂盒提取DNA。用3套分别来自于长末湍重复序列(LTR)-gag、pol、env不同区域的序列引物进行嵌套式PCR扩增。结果 用多引物嵌套式PCR对28例不同来源标本进行检测,其中13例为HIV感染者,4例为HIV可疑感染者,4例为人嗜T淋巴细胞病毒(HTLV)感染者且HIV抗体检测为阴性,7例为正常者。经过检测每一套引物均漏检了1份标本,即每一套引物敏感性均为92.3％。HTLV标本经检测均为HIV阴性。根据判断标准,该检测方法敏感性和特异性均达到100％,最低检测线达到103外周血单核细胞(PBMC)。结论 多引物嵌套式PCR具有高敏感性及特异性,在鉴定HTV感染方面有重要的意义.可作为蛋白印迹试验的补充和辅助诊断。 展开更多
关键词 多引物 嵌套式聚保酶链反应 艾滋病病毒感染 诊断 艾滋病病毒检测 艾滋病 HIV AIDS
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