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石蜡切片多重免疫荧光染色优化条件探讨 被引量:7
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作者 范瑾瑾 骆宁 +1 位作者 彭文兴 毛海萍 《中山大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期675-681,共7页
【目的】探讨在石蜡切片上不同染色条件对多重荧光标记结果的影响。【方法】根据不同组织抗原选择合适的固定剂;对石蜡组织切片采用高温高压的抗原修复方式,使用柠檬酸盐缓冲液或EDTA抗原修复液进行抗原修复,并在染色操作过程中增加封... 【目的】探讨在石蜡切片上不同染色条件对多重荧光标记结果的影响。【方法】根据不同组织抗原选择合适的固定剂;对石蜡组织切片采用高温高压的抗原修复方式,使用柠檬酸盐缓冲液或EDTA抗原修复液进行抗原修复,并在染色操作过程中增加封闭步骤,随后进行常规组织免疫荧光染色。【结果】常规石蜡切片用40g/L多聚甲醛固定、抗原糖基含量高的石蜡切片用过碘酸盐-赖氨酸-多聚甲醛固定可以很好的保护切片中的抗原;pH 6.0的枸橼酸缓冲液及pH 8.0的EDTA-Na缓冲液分别对组织胞浆抗原及胞核抗原具有较好的抗原修复作用;多重荧光染色不同种属来源第一抗体染色间增加一次封闭步骤,可有效的改善多重荧光染色质量。【结论】选择合适的固定剂、抗原修复液及增加抗原封闭次数对石蜡组织切片上的多重荧光标记结果具有显著的影响。 展开更多
关键词 多重免疫荧光染色 石蜡切片 优化条件
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免疫组化双染法分析非桥本背景甲状腺乳头状癌免疫细胞浸润特征与临床病理特征的相关性 被引量:1
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作者 刘文超 郑波 +4 位作者 胡春芳 窦夷远 祝心怡 刘杰 鲁海珍 《临床与实验病理学杂志》 CAS 北大核心 2023年第7期797-801,共5页
目的通过免疫组化双染法在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)组织中的应用,建立人工判读标准并探索该标准应用的可行性;分析非桥本背景PTC组织中T、B淋巴细胞(简称T细胞、B细胞)的浸润特征与临床病理特征的相关性。方法... 目的通过免疫组化双染法在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)组织中的应用,建立人工判读标准并探索该标准应用的可行性;分析非桥本背景PTC组织中T、B淋巴细胞(简称T细胞、B细胞)的浸润特征与临床病理特征的相关性。方法A组选择16例PTC组织进行免疫组化双染和多重免疫荧光染色,分别进行人工判读和机器软件判读;通过Kappa值对比分析人工判读和机器判读结果的一致性。B组选择27例非桥本背景PTC组织进行免疫组化双染,采用人工判读肿瘤组织中T、B细胞表达水平。Kaplan-Meier曲线和Log-rank检验进行无瘤生存期(disease free survival,DFS)分析。结果免疫组化双染人工判读与多重免疫荧光染色机器判读结果达到中等一致性(T细胞Kappa=0.508,B细胞Kappa=0.538),与免疫组化双染机器判读结果达到高度及中等一致性(T细胞Kappa=0.754,B细胞Kappa=0.418)。T细胞表达与各项临床病理特征均无相关性(P>0.05)。B细胞表达仅与淋巴结转移癌被膜侵犯、N分期有相关性(P<0.05)。生存分析显示,B细胞表达与患者DFS无相关性(P>0.05)。结论免疫组化双染人工判读标准用于肿瘤免疫细胞浸润的研究具有一定可行性。非桥本背景PTC中B细胞表达高低与淋巴结转移及N分期有关。 展开更多
关键词 甲状腺肿瘤 乳头状癌 免疫组化双染 多重免疫荧光染色 人工判读
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TSA法多重免疫荧光染色在猴艾滋病模型病理研究中的应用 被引量:1
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作者 何晓妍 郑宏毅 郑永唐 《赣南医学院学报》 2021年第8期768-776,共9页
目的:建立适合石蜡切片的多重免疫荧光染色方法和配套的定量分析算法,用以研究猕猴艾滋病(SAIDS)模型的免疫病理特征。方法:选取SIV感染猕猴和健康猕猴淋巴结的石蜡切片,以优化后的酪胺信号放大技术(TSA)进行荧光染色,通过几轮微波加热... 目的:建立适合石蜡切片的多重免疫荧光染色方法和配套的定量分析算法,用以研究猕猴艾滋病(SAIDS)模型的免疫病理特征。方法:选取SIV感染猕猴和健康猕猴淋巴结的石蜡切片,以优化后的酪胺信号放大技术(TSA)进行荧光染色,通过几轮微波加热洗去前次标记抗体的方式,达到多重染色的目的。对显微图像进行粒度和灰度分析,计算每一个细胞的位置和目的蛋白的表达特征。最后图像信息被转化成数字矩阵,经R语言编程处理后用于定量分析。结果:TSA法经过优化后,切片的荧光背景信号降低而信噪比增加。荧光图像的定量分析表明,SAIDS快进展者淋巴结的CD4^(+)细胞的感染更为严重(P<0.0001),过度浸润滤泡的CD8^(+)细胞异常高表达颗粒酶B(P<0.0001)。结论:本研究建立的TSA法多重免疫荧光染色和配套的定量分析方法是提升病理研究内容的良好技术手段,有助于AIDS及其他疾病发病机制的研究。 展开更多
关键词 TSA HIV AIDS SIV 多重免疫荧光 猕猴动物模型 病理定量分析
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