牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒和牛肠道病毒多重RT-PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：26

1

作者 侯佩莉 王洪梅 何洪彬 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1672-1675,1700,共5页

根椐GenBank中已发表中病毒性腹泻病毒(BVDV)、中冠状病毒(BCoV)和中肠道病毒(BEV)基因的保守序列,设计合成引物,在建立单一病毒RT-PCR检测方法的基础上,继续优化条件,建立上述3种病毒的多重RT-PCR检测方法,并应用建立的检测方法对临床... 根椐GenBank中已发表中病毒性腹泻病毒(BVDV)、中冠状病毒(BCoV)和中肠道病毒(BEV)基因的保守序列,设计合成引物,在建立单一病毒RT-PCR检测方法的基础上,继续优化条件,建立上述3种病毒的多重RT-PCR检测方法,并应用建立的检测方法对临床样本进行检测,计算符合率。结果表明,引物浓度分别为BVDV 0.5μL(20μmol/L),BCoV 0.25μL(20μmol/L),BEV 0.25μL(20μmol/L),退火温度为52℃时,可同时扩增BVDV的289bp,BCoV的458bp和BEV的732bp的特异性片段,对牛流行热病毒(BEFV)、牛轮状病毒(BRV)、牛副流感病毒3型(BPIV3)和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)均无扩增。该方法最低能检出6.4pg的BVDV,1.28pg的BCoV和6.4pg的BEV的等量混合质粒模板。对24份临床腹泻病料进行检测,与单项RT-PCR检测的符合率为100.0%。本研究建立的多重RT-PCR检测方法,具有准确、快速、特异的特点,可用于临床混合感染的同时检测。 展开更多

关键词 多重rt—pcr 牛病毒性腹泻病毒 牛冠状病毒 牛肠道病毒

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Survivin在多发性骨髓瘤患者骨髓细胞中的表达及其临床意义 被引量：13

2

作者 李娟 赵莹 +1 位作者 张殿宝 黄蓓晖 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1522-1526,共5页

背景与目的:Survivin是凋亡抑制蛋白家族成员之一,在多种恶性肿瘤中高表达,但在正常成人分化组织无表达。其表达与多种肿瘤的预后及肿瘤对放、化疗的耐受有关。本研究旨在通过检测Survivin在正常人、初治及复发/难治多发性骨髓瘤(multip... 背景与目的:Survivin是凋亡抑制蛋白家族成员之一,在多种恶性肿瘤中高表达,但在正常成人分化组织无表达。其表达与多种肿瘤的预后及肿瘤对放、化疗的耐受有关。本研究旨在通过检测Survivin在正常人、初治及复发/难治多发性骨髓瘤(multiplemyeloma,MM)患者骨髓细胞及骨髓瘤细胞系KM3中的表达,以揭示Survivin在骨髓瘤中的表达与耐药及疗效的关系。方法:RT-PCR和Westernblot法检测29例MM患者(其中初治17例,复发/难治12例)、9例正常人骨髓标本及KM3细胞系中SurvivinmRNA和蛋白质水平表达。结果:骨髓瘤细胞系KM3高表达Survivin。SurvivinmRNA在正常人、初治和难治/复发MM患者骨髓细胞中阳性率分别为22.2%、70.5%和83.3%,表达水平(Survivin/β-actin比值)分别为0.06±0.04、0.31±0.14和0.69±0.24,骨髓瘤患者表达率和表达水平显著高于正常人(P<0.01),而难治/复发MM组表达水平高于初治组(P<0.05)。所有的正常人标本中均未检测到Survivin蛋白,在初治和难治/复发MM组Survivin蛋白阳性率分别为41.1%和58.3%(P>0.05),表达水平(Survivin/α-tubulin半定量比值)分别为0.11±0.07和0.21±0.12,难治/复发MM组明显为高(P<0.05)。17例初治患者中,7例Survivin阳性者4例部分缓解(partialresponse,PR),1例微小反应(minorresponse,MR),2例无变化(nochange,NC),有效率[完全缓解(completeresponse,CR)+PR+MR]71.4%;10例Survivin阴性者中2例CR,4例PR,2例MR,2例NC,有效率80%,略高于阳性组。但统计学分析未发现两组有效率存在显著性差异。结论:Survivin在骨髓瘤患者中的高表达可能是部分患者对化疗不敏感的原因之一,由于Survivin仅特异性表达于骨髓瘤细胞,Survivin可作为逆转骨髓瘤细胞耐药治疗中的潜在靶点。 展开更多

关键词 骨髓瘤 多发性 SURVIVIN KM3细胞 耐药 疗效 逆转录-聚合酶链反应 免疫印迹

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烟草中TMV、CMV和PVY多重RT-PCR检测体系的建立与应用 被引量：16

3

作者 杨金广 张帅 +5 位作者 申莉莉 钱玉梅 陈德鑫 王长栓 黄瑾 王凤龙 《中国烟草学报》 EI CAS CSCD 2010年第4期83-88,共6页

利用DNAMAN软件对GenBank数据库中已登录的烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaicvirus,CMV)和马铃薯Y病毒(Potato virusY,PVY)全基因组序列进行序列比对,选择最保守的区域,进行相应病毒的引物设计,建... 利用DNAMAN软件对GenBank数据库中已登录的烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaicvirus,CMV)和马铃薯Y病毒(Potato virusY,PVY)全基因组序列进行序列比对,选择最保守的区域,进行相应病毒的引物设计,建立了多重RT-PCR检测烟草中TMV、CMV和PVY的技术体系。对3条扩增片段进行回收、测序和BLAST比较,结果表明多重RT-PCR所扩增的片段序列均与预期设计序列相符,同源性均在98%以上。利用多重RT-PCR对广西区132个烟草病毒病样品进行检测分析,结果表明TMV检出率为91.7%,CMV检出率为18.2%,PVY检出率为55.3%。较单一的RT-PCR,具有简便、快速和经济的特点。与酶联免疫吸附法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)相比,其检测限度高出ELISA的检测限度104级数,具有更高的特异性与准确性。该方法可以同步快速、特异地检测出烟草中TMV、CMV和PVY病毒的侵染。 展开更多

关键词 烟草 多重rt-pcr 病毒检测 应用

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检测牛5种腹泻病毒的多重RT-PCR方法的建立及应用 被引量：15

4

作者 孙吉 岳华 汤承 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期209-218,共10页

牛A群轮状病毒(BRVA)、牛冠状病毒(BCoV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛诺瓦病毒(BNoV)和牛纽布病毒(BNeV)是引起犊牛腹泻的常见病毒,且临床上多存在混合感染的情况。本试验的目的是建立可以同时检测上述5种病毒的多重PCR方法。通过设计... 牛A群轮状病毒(BRVA)、牛冠状病毒(BCoV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛诺瓦病毒(BNoV)和牛纽布病毒(BNeV)是引起犊牛腹泻的常见病毒,且临床上多存在混合感染的情况。本试验的目的是建立可以同时检测上述5种病毒的多重PCR方法。通过设计引物,优化反应体系和条件,成功建立了可同时检测BRVA、BCoV、BVDV、BNoV和BNeV的多重PCR方法。该方法只特异性检出目标病毒,而对牛星状病毒、牛嵴病毒、牛细小病毒、产肠毒素大肠杆菌、沙门菌和空肠弯曲杆菌等腹泻病原均无扩增,具有良好的特异性和稳定性。对BRVA、BCoV、BVDV、BNoV、BNeV的最低检测下限分别为1.63×10^(5)、2.0×10^(6)、1.9×10^(5)、1.96×10^(5)和2.0×10^(5)copies·μL^(-1)。比较试验表明,该多重RT-PCR方法与检测单一病毒的RT-PCR方法的符合率为100%。利用该方法对2019—2020年采集自川西北草原的220份牦牛腹泻样本的检测结果表明,BRV的检出率为40.5%、BNoV的检出率为5.9%、BNeV的检出率为4.5%,而BVDV和BCoV无检出。本研究建立的多重RT-PCR方法可同时检测犊牛腹泻粪便样品中的5种常见腹泻病毒,为牛腹泻的快速诊断提供了技术支持。 展开更多

关键词 牛A群轮状病毒 牛冠状病毒 牛病毒性腹泻病毒 牛诺瓦病毒 牛纽布病毒 多重rt-pcr

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葡萄卷叶伴随3型病毒和葡萄A病毒的多重检测及其系统进化分析 被引量：12

5

作者 王建辉 刘建军 +3 位作者 陈克玲 李洪雯 席德慧 林宏辉 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期2401-2410,共10页

葡萄卷叶伴随3型病毒(Grapevine leafroll associated virus-3,GLRaV-3)和葡萄A病毒(Grapevine virus A,GVA)常常复合侵染部分主栽欧美杂交葡萄品种。以半定量RT-PCR与qRT-PCR方法研究了‘希姆劳特’葡萄(Vitis vinifera L.×V.labr... 葡萄卷叶伴随3型病毒(Grapevine leafroll associated virus-3,GLRaV-3)和葡萄A病毒(Grapevine virus A,GVA)常常复合侵染部分主栽欧美杂交葡萄品种。以半定量RT-PCR与qRT-PCR方法研究了‘希姆劳特’葡萄(Vitis vinifera L.×V.labrusca L.‘Himrod’)中不同组织内病毒的相对积累量,结果表明叶脉和韧皮部内的病毒相对积累量显著高于其他组织。以成熟枝条韧皮部组织的cDNA为模板,优化了RT-PCR多重扩增体系,可以同时扩增待测样本中两种病毒的目标基因。从一株复合感染GLRaV-3与GVA的‘藤稔’葡萄(Vitis vinifera L.×V.labrusca L.‘Fujiminori’)中,分别克隆了GLRaV-3外壳蛋白(coat protein,CP)基因全长序列和GVA部分基因组区域序列,后者包括CP基因的部分序列与病毒RNA沉默抑制子(viral suppressor of RNA silencing,VSR)基因全长序列。病毒核酸同源性分析与系统进化研究表明,不同GLRaV-3分离物的CP高度保守;而‘藤稔’葡萄的GVA分离物包含多种变异株,具有准种病毒的特点。 展开更多

关键词 葡萄 葡萄卷叶伴随3型病毒 葡萄A病毒 病毒外壳蛋白基因 病毒RNA沉默抑制子基因 rt-pcr多重检测 病毒变异株

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慢性复合应激对学习记忆的影响及cAMP/PKA-CREB信号通路的作用 被引量：12

6

作者 刘能保 洪小平 +2 位作者 李晓恒 张敏海 孙臣友 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期611-616,共6页

目的探讨慢性复合应激对大鼠学习与记忆的影响和cAMP/PKA-CREB信号系统在此机制中的作用。方法将成年雄性Wistar大鼠分为对照组:不作任何处理;慢性单一应激组:每天捆绑6 h,持续6周;慢性复合应激组:每天随机暴露于4种应激原中,持续6周。... 目的探讨慢性复合应激对大鼠学习与记忆的影响和cAMP/PKA-CREB信号系统在此机制中的作用。方法将成年雄性Wistar大鼠分为对照组:不作任何处理;慢性单一应激组:每天捆绑6 h,持续6周;慢性复合应激组:每天随机暴露于4种应激原中,持续6周。应激结束后,用Morris水迷宫(MWM)测试大鼠空间学习与记忆成绩;免疫组织化学方法观察大鼠海马PKA-Cβ和磷酸化的CREB的表达水平;应用RT-PCR法半定量检测海马组织内BDNF和Bcl-2的mRNAs水平。结果应激后在MWM寻找平台潜伏期,与对照组(18.9±13.0)s相比,慢性复合应激组(14.2±5.8)s明显缩短(P<0.05),显示其空间记忆明显增强,而慢性单一应激组(20.4±12.8)s无明显差异(P>0.05);慢性复合应激组大鼠海马CA1和CA3区PKA-Cβ的表达以及CA1区和齿状回pCREB的表达明显上调(P<0.05);而慢性单一应激组海马各亚区PKA-Cβ和pCREB的表达无显著性改变(P>0.05)。BDNF和Bcl-2mRNAs的表达水平3组间差别无显著性(P>0.05)。结论慢性复合应激可增强海马依赖的学习与记忆功能,多元的环境刺激可能是其增强的主要原因。PKA-CREB信号通路在其影响机制中发挥了一定的作用。 展开更多

关键词 慢性复合应激 学习与记忆 蛋白激酶A-Cβ亚基 CAMP反应元件结合蛋白 海马 免疫组织化学 rt-pcr 大鼠

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多发性骨髓瘤骨髓间充质干细胞多种细胞因子的异常表达 被引量：10

7

作者 沈文怡 陆化 +4 位作者 唐宇宏 费小明 张晓艳 刘澎 汪承亚 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期239-242,共4页

目的:了解多发性骨髓瘤(MM)病人骨髓间充质干细胞(BM鄄MSCs)的改变,进一步探讨可能存在的与MM发生﹑发展相关的MSCs异常。方法:采用半定量RT鄄PCR方法在mRNA水平上检测MM患者BM鄄MSCsIL鄄1茁,IL鄄6,SCF,TPO,G鄄CSF的表达。结果:MM组BM鄄... 目的:了解多发性骨髓瘤(MM)病人骨髓间充质干细胞(BM鄄MSCs)的改变,进一步探讨可能存在的与MM发生﹑发展相关的MSCs异常。方法:采用半定量RT鄄PCR方法在mRNA水平上检测MM患者BM鄄MSCsIL鄄1茁,IL鄄6,SCF,TPO,G鄄CSF的表达。结果:MM组BM鄄MSCsIL鄄1茁mRNA,IL鄄6mRNA,SCFmRNA,TPOmRNA与茁鄄actin的比值分别为:0.6129±0.1702,0.9133±0.1320,0.7853±0.0943,0.6830±0.2243;非MM组BM鄄MSCsIL鄄1茁mRNA,IL鄄6mRNA,SCFmRNA,TPOmRNA与茁鄄actin的比值分别为:0.1821±0.0593,0.2371±0.0491,0.3222±0.0436,0.5400±0.2511。MM组IL鄄1茁,IL鄄6,SCF表达与正常对照组和非MM组相比均具有显著性差异(P<0.01),MM组TPO的表达与正常对照组相比差异有显著性(P<0.05),与非MM组相比差异无显著性(P>0.05)。不同组别均未见G鄄CSF的表达。结论:体外培养的多发性骨髓瘤BM鄄MSCsIL鄄1茁,IL鄄6,SCF,TPO的表达存在明显异常。 展开更多

关键词 间充质干细胞 多发性骨髓瘤 细胞因子 rt—pcr

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牛病毒性腹泻病毒、牛呼吸道合胞体病毒和牛副流感病毒3型三重RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：9

8

作者 索阳 陈继勇 《畜牧与兽医》 北大核心 2013年第6期10-13,共4页

根椐GenBank中牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus,BRSV)和牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type 3,BPIV-3)3种病毒基因序列,设计合成引物,建立... 根椐GenBank中牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus,BRSV)和牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type 3,BPIV-3)3种病毒基因序列,设计合成引物,建立3种病毒的三重RT-PCR方法。用这3对引物对同一样品中的BVDV、BRSV和BPIV-3核酸模板进行三重RT-PCR扩增,结果显示:可同时扩增BVDV的466 bp,BRSV的735 bp和BPIV-3的258 bp的特异性片段,而对其他4种病原的PCR扩增结果均为阴性;敏感性测定结果表明,该三重RT-PCR技术能检出10 pg的BVDV、1 pg的BPIV-3和10 pg的BRSV模板。用37份临床病料对本研究多重RT-PCR技术和单项RT-PCR技术进行对比验证,结果显示:两者的总符合率为100%。结果表明:建立的多重RT-PCR检测方法,具有特异、快速、准确的特点,可用于对这3种病毒的同时检测和鉴别诊断。 展开更多

关键词 三重聚合酶链式反应 牛病毒性腹泻病毒(BVDV) 牛呼吸道合胞体病毒(BRSV) 牛副流感病毒3型(BPIV-3)

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β-catenin在多发性骨髓瘤中的表达及其临床意义 被引量：8

9

作者 李娟 张殿宝 +3 位作者 罗绍凯 赵莹 黄蓓晖 谷景立 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第9期1010-1014,共5页

背景与目的:β-catenin是Wnt通路中的关键因子,在细胞粘附和信号转导中发挥着重要作用,目前已在多种人类肿瘤检测到β-catenin的高表达。本研究旨在探讨β-catenin在多发性骨髓瘤(multiplemyeloma,MM)中表达的临床意义。方法:选取26例M... 背景与目的:β-catenin是Wnt通路中的关键因子,在细胞粘附和信号转导中发挥着重要作用,目前已在多种人类肿瘤检测到β-catenin的高表达。本研究旨在探讨β-catenin在多发性骨髓瘤(multiplemyeloma,MM)中表达的临床意义。方法:选取26例MM患者(其中初治12例,复发/难治14例)和11例正常人骨髓标本,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹(Westernblot)法分别检测其β-cateninmRNA和蛋白质水平的表达,比较各组表达水平的差异,结合患者临床特征和疗效进行分析。结果:β-cateninmRNA在正常人、初治组MM患者和难治/复发组MM患者骨髓细胞中阳性率分别为27.3%(3/11)、75.0%(9/12)和100%(14/14),表达水平分别为0.35±0.17、0.72±0.11和0.85±0.16,初治和难治/复发MM患者β-cateninmRNA阳性率和表达水平均显著高于对照组(P<0.01),而难治/复发MM组β-cateninmRNA表达水平高于初治组(P=0.045)。所有的正常标本中均未检测到β-catenin蛋白,在初治MM和难治/复发MM中β-catenin蛋白阳性率分别为50.0%(6/12)和85.7%(12/14),蛋白表达水平分别为0.21±0.08和0.32±0.11,难治/复发MM组明显为高(P=0.039)。10例可评价疗效的初治病例中,无效组β-catenin蛋白阳性率(100%,3/3)明显高于有效组(14.3%,1/7)(P=0.033)。26例患者进行D/S分期,Ⅲ期患者β-catenin蛋白阳性率明显高于Ⅱ期患者,分别为87.5%(14/16)和40.0%(4/10)(P=0.026);进行ISS分期,Ⅲ期患者β-catenin蛋白阳性率(100%,11/11)明显高于Ⅰ期患者(45.5%,5/11)和Ⅱ期患者(33.3%,1/3)(P=0.006和0.032)。18例β-catenin蛋白表达阳性患者,其β-catenin蛋白表达水平与血清β2-微球蛋白水平及血清乳酸脱氢酶水平均呈中度正相关(r分别为0.688和0.502,P值分别为0.002和0.034)。结论:β-catenin蛋白表达与MM的疗效、Durin-Salmon分期和ISS分期有关,并与血清LDH、β2-MG水平呈正相关。 展开更多

关键词 多发性骨髓瘤 Β-CATENIN WNT信号转导通路 逆转录-聚合酶链反应 免疫印迹

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GeXP多重分析技术检测肝癌组织长链非编码RNA表达的实验研究 被引量：8

10

作者 史俊英 王晔 +2 位作者 陈文 刘成玉 牟晓峰 《分子诊断与治疗杂志》 2018年第1期9-16,共8页

目的运用多重基因表达遗传分析系统(genomelab gene expression profiler,Ge XP),创建一种能同时检测肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织长链非编码RNA(long non-coding RNA,Lnc RNA)表达的一种多重逆转录-聚合酶链反应(revers... 目的运用多重基因表达遗传分析系统(genomelab gene expression profiler,Ge XP),创建一种能同时检测肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织长链非编码RNA(long non-coding RNA,Lnc RNA)表达的一种多重逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RTPCR)检测方法,为HCC的诊断及预后提供一定的方法学基础。方法检索并筛选Pubmed数据库中近10年发表的与HCC有关报道的8种Lnc RNAs,并分别设计特异性引物。首先验证引物及多重反应体系的特异性及灵敏性,经过系统优化后建立一种多重RT-PCR检测方法。另检测23对HCC肿瘤组织和癌旁非肿瘤组织标本,并用实时定量PCR技术(quantitative real-time PCR,q PCR)来验证检测体系并进行结果统计。结果优化后的Ge XP多重检测体系,特异性及灵敏性良好。另在23对HCC肿瘤组织及癌旁组织中检测到了这8种Lnc RNAs的差异表达:与癌旁组织相比,HCC组织中Lnc RNA NEAT1、H19、MALAT1、HOTAIR、DANCR、UCA1、BCAR4的表达显著下降(P均<0.05);肝癌组织中Lnc RNA GAS5的表达显著上升(P<0.05)。q PCR方法验证与Ge XP方法结果一致。结论应用Ge XP多重分析技术成功建立了一种于单管中同时检测HCC组织8种Lnc RNAs表达的检测方法,该方法有效、快捷、灵敏、特异,对HCC的诊断及预后具有启示作用并奠定了一定的方法学基础。 展开更多

关键词 GeXP系统 多重rt—pcr qpcr LncRNA 肝细胞癌

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猪腹泻相关病毒多重RT-PCR检测方法的建立 被引量：8

11

作者 吴洋 杜彩虹 +4 位作者 张博 唐丽杰 乔薪瑗 姜艳平 李一经 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期376-378,共3页

为建立同时检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PRV)的多重RT-PCR检测方法,本研究根据GenBank中登录的PEDV S基因、TGEV S基因和PRV VP6基因序列设计合成引物,利用这3对引物对同一样品中的PEDV、TGEV、... 为建立同时检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PRV)的多重RT-PCR检测方法,本研究根据GenBank中登录的PEDV S基因、TGEV S基因和PRV VP6基因序列设计合成引物,利用这3对引物对同一样品中的PEDV、TGEV、PRV进行多重RT-PCR扩增,结果显示,该方法可以同时扩增PEDV(682 bp)、TGEV(480 bp)和PRV(297 bp)的特异性DNA片段,而对猪瘟病毒和猪伪狂犬病毒的PCR扩增结果均为阴性;敏感性试验结果表明,该多重RT-PCR方法对PEDV、TGEV和PRV的最低检出量分别为3.3×103拷贝/μL、3.2×103拷贝/μL和2.8×103拷贝/μL。利用建立的多重RT-PCR检测方法和单项RT-PCR对20份临床病料进行检测,结果显示,两者的总符合率为100%。结果表明建立的多重RT-PCR检测方法具有特异、快速、准确的特点,可以用于这3种病毒的同时检测和疾病的鉴别诊断。 展开更多

关键词 多重聚合酶链式反应 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪轮状病毒

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基于多重RT-PCR检测法的儿童呼吸道病原体流行特征 被引量：7

12

作者 刘文渊 张艺之 +2 位作者 周城波 吴军华 卢文波 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2021年第4期467-471,共5页

目的:了解宁波市儿童呼吸道感染病原体的流行特征,为临床防控和诊治提供参考依据。方法:收集2019年7~10月份间宁波市妇女儿童医院就诊急性呼吸道感染患儿的标本共3103例,通过基于毛细电泳的多重RT-PCR法检测常见的13种呼吸道病原体,并... 目的:了解宁波市儿童呼吸道感染病原体的流行特征,为临床防控和诊治提供参考依据。方法:收集2019年7~10月份间宁波市妇女儿童医院就诊急性呼吸道感染患儿的标本共3103例,通过基于毛细电泳的多重RT-PCR法检测常见的13种呼吸道病原体,并对结果进行统计分析。结果:3103例患儿中2053例呼吸道病原体检测阳性,总阳性率为66.16%。检出率前3位分别为肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)33.19%(1030/3103)、鼻病毒(human rhinovirus,HRV)24.20%(751/3103)和腺病毒(human adenovirus,HADV)8.77%(272/3103)。病原体在男性患儿和女性患儿中的检出率分别为65.70%(1157/1761)和66.77%(896/1342),差异无统计学意义(χ^(2)=0.386,P=0.535);在年龄≤1岁组、1~≤3岁组、3~≤6岁组和6~≤16岁组检出率分别为58.02%(626/1079)、74.37%(589/792)、73.78%(543/736)和59.48%(295/496),组间差异具有统计学意义(χ^(2)=84.770,P=0.000);7~10月份检出率依次为71.64%(341/476)、68.81%(536/779)、67.01%(648/967)和59.93%(528/881),差异具有统计学意义(χ^(2)=24.395,P=0.000);单一感染率为52.30%(1623/3103),2种及以上病原体混合感染率为13.86%(430/3103),其中以2种病原体混合感染多见。结论:宁波市儿童呼吸道病原体检出以Mp和HRV为主,病原体检出率在不同年龄阶段和不同月份间存在一定差异。 展开更多

关键词 儿童 呼吸道病原体 多重rt-pcr法

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鸭新城疫病毒和流感病毒多重RT-PCR鉴别诊断技术的建立和应用 被引量：6

13

作者 何永强 云涛 +2 位作者 梁华丽 林林 华炯钢 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期296-299,共4页

对同样以引起鸭产蛋下降为主要特征的鸭流感病毒(AIV)分离株和鸭新城疫病毒(NDV)YH99V分离株,通过设计特异性引物和优化体系反应条件,建立了一种早期快速鉴别诊断鸭AIV和鸭NDV的单项RT-PCR方法和多重RT-PCR方法,AIV的扩增片段大小为483b... 对同样以引起鸭产蛋下降为主要特征的鸭流感病毒(AIV)分离株和鸭新城疫病毒(NDV)YH99V分离株,通过设计特异性引物和优化体系反应条件,建立了一种早期快速鉴别诊断鸭AIV和鸭NDV的单项RT-PCR方法和多重RT-PCR方法,AIV的扩增片段大小为483bp,NDV的扩增片段为310bp,电泳快速,易于区分。敏感性试验表明,该方法比HA敏感100倍以上;对AIV、YH99V、IBV、IBDV及正常鸡胚尿囊液的混合液检测显示,多重RT-PCR法具有很强的特异性。对鸭病毒性产蛋下降征侯群送检病料的检测证明,该方法能有效鉴别AIV和/或NDV单独感染或混合感染,阳性检出率明显高于HA方法。 展开更多

关键词 多重rt—pcr 鸭流感病毒 鸭新城疫病毒 鸭病毒性产蛋下降征侯群

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慢性复合应激增强大鼠海马Doublecortin的表达 被引量：5

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作者 周艳玲 刘能保 +4 位作者 张敏海 李晓恒 陈鸿伟 洪小平 孙臣友 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期18-22,共5页

目的探讨慢性复合应激性学习记忆增强大鼠海马齿状回(DG)新生神经元数量变化以及Doublecortin(DCX)在海马组织中表达的变化及其意义。方法成年雄性大鼠随机分为复合应激组和正常对照组。复合应激组动物每天交替暴露于复合应激原中达6周... 目的探讨慢性复合应激性学习记忆增强大鼠海马齿状回(DG)新生神经元数量变化以及Doublecortin(DCX)在海马组织中表达的变化及其意义。方法成年雄性大鼠随机分为复合应激组和正常对照组。复合应激组动物每天交替暴露于复合应激原中达6周。实验结束后,所有动物分别进行3d的Morris水迷宫测试,记录其学习和记忆成绩。运用免疫细胞化学方法观察海马DG新生神经元数量的变化,同时运用Westernblotting和RT-PCR技术分别检测DCX在海马的表达及其mRNA水平的变化。结果与对照组相比,复合应激组动物的学习与记忆成绩优于对照组(P<0.05);其海马DG新生神经元数明显增多(P<0.05);海马DCX蛋白的表达明显增加(P<0.05);海马DCX mRNA水平明显上调(P<0.05)。结论慢性复合应激致大鼠的学习与记忆能力增强,海马DG内DCX阳性细胞数增多,提示新生神经元数量增加是导致大鼠学习记忆能力增强的原因之一。 展开更多

关键词 慢性复合应激 学习与记忆 海马 DOUBLECOrtIN 免疫细胞化学 免疫印迹 rt-pcr 大鼠

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冬春季儿童急性下呼吸道感染病原菌分布及炎症指标联合应用的鉴别诊断作用 被引量：5

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作者 梁友方 贺超奇 陈亮 《中国卫生检验杂志》 CAS 2022年第5期581-584,共4页

目的了解儿童急性下呼吸道感染的细菌、非典型呼吸道病原体分布、流行趋势,为临床预防及合理诊治提供参考。方法采用多重RT-PCR与毛细管电泳联合技术检测呼吸道病原体,同时回顾性统计分析痰培养阳性、病毒感染患者临床病例资料及实验室... 目的了解儿童急性下呼吸道感染的细菌、非典型呼吸道病原体分布、流行趋势,为临床预防及合理诊治提供参考。方法采用多重RT-PCR与毛细管电泳联合技术检测呼吸道病原体,同时回顾性统计分析痰培养阳性、病毒感染患者临床病例资料及实验室检测结果,并随机选取同期健康体验儿童作为对照组。结果1478份痰液培养标本检测出致病菌416株(28.1%);随机选择600例呼吸道标本进行13项病原学检测,总阳性率为16.2%(97/600),其中鼻病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、肺炎支原体、甲型流感病毒、副流感病毒构成比分别为47.4%、12.4%、7.2%、6.2%、13.4%、10.3%;病毒阳性组SAA、PCT、CRP指标ROC曲线下面积分别为0.790、0.117、0.271;其中SAA/CRP曲线下面积最大,为0.976。结论儿童急性下呼吸道感染以细菌为主;非典型呼吸道病原体感染引起的急性下呼吸道感染患儿中以HRV易感性最高。 展开更多

关键词 儿童 呼吸道感染 多重rt-pcr 毛细管电泳 炎症指标

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3种黄矮病毒多重RT-PCR检测方法的建立及应用

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作者 王贺 姜兴林 +7 位作者 韩晓玉 徐永伟 彭红 王怡凡 袁虹霞 李洪连 杨雪 施艳 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期457-461,共5页

0 引言.小麦黄矮病是我国小麦生产上重要的病毒病,受害小麦感病后植物矮化叶片黄化,一般减产10%~20%左右,严重的可达到50%以上,个别地块甚至可造成绝产。目前国际上已报道的作物黄矮病毒有十多种[1],我国引起小麦黄矮病的主要病原是大... 0 引言.小麦黄矮病是我国小麦生产上重要的病毒病,受害小麦感病后植物矮化叶片黄化,一般减产10%~20%左右,严重的可达到50%以上,个别地块甚至可造成绝产。目前国际上已报道的作物黄矮病毒有十多种[1],我国引起小麦黄矮病的主要病原是大麦黄矮病毒(barley yellow dwarf virus, BYDV)PAV和GAV株系[2],其在全国小麦种植区广泛分布。 展开更多

关键词 小麦黄矮病 我国小麦生产 大麦黄矮病毒 叶片黄化 主要病原 yellow BYDV

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酿酒葡萄4种病毒多重RT-PCR检测体系的建立 被引量：5

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作者 苏静 陈佰鸿 +3 位作者 毛娟 左存武 胡紫璟 王凯 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期632-638,共7页

【目的】建立快速、灵敏的葡萄病毒多重RT-PCR检测体系。【方法】通过设计6对不同引物,在退火温度分别为48.0、49.0、50.0、51.0、52.0、53.0、54.0、55.0、56.0、57.0、58.0、59.0和60.0℃,采用单一RT-PCR技术检测酿酒葡萄6种常见的葡... 【目的】建立快速、灵敏的葡萄病毒多重RT-PCR检测体系。【方法】通过设计6对不同引物,在退火温度分别为48.0、49.0、50.0、51.0、52.0、53.0、54.0、55.0、56.0、57.0、58.0、59.0和60.0℃,采用单一RT-PCR技术检测酿酒葡萄6种常见的葡萄病毒,即葡萄病毒A(Grapevine virus A,GVA)、葡萄斑点病毒(Grapevine fleck virus,GFKV)、葡萄扇叶病毒(Grapevine fanleaf virus,GFLV)、葡萄卷叶病毒1(Grapevine leafroll associated virus-1,GLRa V-1)、葡萄卷叶病毒2(Grapevine leafroll associated virus-1,GLRa V-2)和葡萄卷叶病毒4(Grapevine leafroll associated virus-4,GLRa V-4)。在此基础上,对退火温度相似、扩增片段长度不同的引物进行组合,建立能同时检测2种或2种以上病毒的多重RT-PCR检测体系。【结果】单一RT-PCR结果显示,退火温度为49℃、55℃和60℃时,可分别检测GVA和GLRa V、GLRa V和GFKV以及GFLV和GLRa V。多重RT-PCR结果显示,退火温度分别为49℃和55℃时,引物GVA和GLRa V-2以及引物GLRa V-1和GFKV组合所建立的2个多重RT-PCR检测体系可同时检测葡萄叶片中GVA和GLRa V以及GLRa V和GFKV。所检测的河西地区16份样品普遍携带葡萄病毒,部分葡萄样品同时携带两种病毒。其中,5份样品为GVA阳性,8份为GLRa V-1阳性,3份为GLRa V-2阳性,5份为GFKV阳性,所有样品均未检测到GFLV和GLRa V-4。退火温度分别为49℃和55℃时所建立的GVA和GLRa V以及GLRa V和GFKV两个多重PCR扩增体系检测结果与各样品单一PCR检测结果均一致。【结论】建立2套多重PCR检测体系,可同时有效地检测GVA和GLRa V-2或GLRa V-1和GFKV,可用于田间葡萄样品的快速检测。 展开更多

关键词 酿酒葡萄 病毒 检测 多重rt-pcr

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VEGF及其受体在多发性骨髓瘤中的表达及意义 被引量：5

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作者 刘俊茹 罗绍凯 +1 位作者 李娟 苏畅 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第6期652-656,共5页

背景与目的:骨髓新生血管形成在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)的发生、发展和预后中起着重要的作用,血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在此过程中扮演了关键角色。本研究旨在研究VEGF及其受体在MM中的表... 背景与目的:骨髓新生血管形成在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)的发生、发展和预后中起着重要的作用,血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在此过程中扮演了关键角色。本研究旨在研究VEGF及其受体在MM中的表达,分析其与MM发生、发展的关系。方法:采用RT-PCR的方法检测35例MM患者、16例非肿瘤患者(下称对照组)以及KM3细胞株中VEGF及其受体Flt-1和KDR的表达,并分析阳性率以及表达相对含量在MM患者和非肿瘤患者、MM不同分期间的差异。结果:VEGF和Flt-1基因在MM组的阳性率(62.9%和80.0%)显著高于对照组(18.8%和31.3%)(P<0.01),VEGF在两组中的表达水平为0.41±0.19vs.0.06±0.01(P<0.05),Flt-1为0.60±0.33vs.0.08±0.03(P<0.01);VEGF基因在初治组和复发/难治MM组的阳性率为66.7%vs.60.9%(P>0.05),Flt-1基因为83.3%vs.78.3%(P>0.05);VEGF在Ⅱ期和Ⅲ期MM的阳性率为50%vs.73.7%(P>0.05),Flt-1为81.3%vs.78.9%(P>0.05);复发/难治MM组的VEGF和Flt-1基因的表达水平明显高于初治组(0.49±0.20vs.0.28±0.04,P<0.05;0.70±0.38vs.0.41±0.06,P<0.05),Ⅲ期MM患者VEGF和Flt-1基因的表达水平明显高于Ⅱ期患者(0.48±0.19vs.0.28±0.09,P<0.05;0.75±0.35vs.0.41±0.21,P<0.05)。KDR仅在3例MM患者中检出,对照组未检出。结论:VEGF和Flt-1在MM中高表达,并与疾病进展相关。 展开更多

关键词 多发性骨髓瘤 血管内皮生长因子 受体 逆转录-聚合酶链反应

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PEDV、TGEV、RV多重RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量：4

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作者 徐引弟 张青娴 +3 位作者 李建林 张彬 王克领 朱文豪 《中国兽药杂志》 2014年第11期10-13,共4页

为了快速准确诊断猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(RV)引起的猪腹泻病,通过设计三对引物,建立了扩增PEDV、TGEV、RV的多重RT-PCR方法,用于临床上大量腹泻病料的鉴定。该方法特异敏感,能同时检测PEDV、TGE... 为了快速准确诊断猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(RV)引起的猪腹泻病,通过设计三对引物,建立了扩增PEDV、TGEV、RV的多重RT-PCR方法,用于临床上大量腹泻病料的鉴定。该方法特异敏感,能同时检测PEDV、TGEV、RV,而对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型病毒、乙型脑炎病毒、猪细小病毒等无扩增,检测的抗原稀释极限为107。用于35个猪场120份临床样品的检测,PEDV阳性率占37.5%,TGEV阳性率占0.75%,RV阳性率占1.25%。PEDV阳性病料测序结果分析表明,与近几年分离毒株亲缘关系较近,与经典毒株和疫苗株亲缘关系较远。结果表明建立的多重PCR方法特异性强、敏感度高,能用于临床诊断及流行病学调查。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪轮状病毒 多重rt-pcr

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多重RT-PCR快速检测东南沿海城市生食水产品中致病菌污染状况 被引量：4

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作者 谢庆超 李想 +4 位作者 赵勇 黄新新 潘迎捷 郭德华 刘海泉 《检验检疫学刊》 2017年第4期1-5,共5页

为实现生食水产品中致病菌的快速、定量检测,构建了副溶血性弧菌及单增李斯特菌的多重RT-PCR体系。对东南沿海地区的92份生食水产品样品进行检测,并同国标方法进行比对,同时对检测结果的变化趋势进行分析。快速检测结果在36 h后得到,国... 为实现生食水产品中致病菌的快速、定量检测,构建了副溶血性弧菌及单增李斯特菌的多重RT-PCR体系。对东南沿海地区的92份生食水产品样品进行检测,并同国标方法进行比对,同时对检测结果的变化趋势进行分析。快速检测结果在36 h后得到,国标方法的结果在3-5 d后得到;经过比对,二者检出率相同,致病菌总体检出率为41.30%:其中副溶血性弧菌检出率为39.13%,单增李斯特菌检出率为20.65%。比对结果表明多重RT-PCR方法具有快速、灵敏、特异性强的优点;对检出率的分析表明东南沿海地区生食水产品中致病菌污染情况较为严重,相关部门应加强管理及控制。 展开更多

关键词 多重rt-pcr 快速检测 生食水产品 致病菌

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