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单极纺锤体蛋白激酶1(Mps1)对蛋白酶体α7亚基(PSMA7)蛋白稳定性的影响
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作者 张萍萍 王鹏皓 +4 位作者 曹源 魏从文 何湘 钟辉 胡成进 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期392-395,共4页
目的研究单极纺锤体蛋白激酶1(Mps1)对蛋白酶体α7亚基(PSMA7)蛋白稳定性的影响。方法通过重组PCR方法将663位天冬氨酸突变为丙氨酸,构建Mps1激酶活性缺失的突变体(pc DNA3-Flag-Mps1KD),并通过免疫印迹实验检测其是否能成功表达。采用... 目的研究单极纺锤体蛋白激酶1(Mps1)对蛋白酶体α7亚基(PSMA7)蛋白稳定性的影响。方法通过重组PCR方法将663位天冬氨酸突变为丙氨酸,构建Mps1激酶活性缺失的突变体(pc DNA3-Flag-Mps1KD),并通过免疫印迹实验检测其是否能成功表达。采用免疫印迹实验检测Mps1及Mps1KD对PSMA7蛋白稳定性的影响;通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测Mps1及Mps1KD对PSMA7 RNA表达水平的影响。结果免疫印迹结果证实构建的突变质粒Mps1KD能正确表达且野生型Mps1可明显增强PSMA7稳定性,而Mps1KD则不能;加入Mps1激酶活性抑制剂后,降低PSMA7稳定性;RT-PCR检测结果发现Mps1及Mps1KD对PSMA7 RNA表达水平无影响。结论成功构建了Mps1激酶活性缺失突变体真核表达质粒pc DNA3-Flag-Mps1KD,并在293T细胞中得到了表达;研究还发现Mps1通过其激酶活性可增强PSMA7蛋白稳定性,但对其RNA表达水平无影响,为进一步研究Mps1对蛋白酶体功能影响及对肿瘤发生发展奠定基础。 展开更多
关键词 单极纺锤体蛋白激酶1(mps1) 蛋白酶体α7亚基(PSMA7) 蛋白酶体 稳定性
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单极纺锤体蛋白激酶1(Mps1)与蛋白酶体α7亚基(PSMA7)相互作用研究
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作者 张萍萍 王鹏皓 +7 位作者 曹源 魏从文 何湘 曹叶 马胜利 张艳红 钟辉 胡成进 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期923-925,937,共4页
目的研究单极纺锤体蛋白激酶1(Mps1)与蛋白酶体α7亚基(PSMA7)是否存在蛋白间相互作用。方法以真核表达质粒p CMV-C-Myc-PSMA7为模板,p GEX-4T-1为载体,构建原核表达载体p GEX-4T-1-PSMA7(GSTPSMA7);并通过GST pull-down及免疫共沉淀实... 目的研究单极纺锤体蛋白激酶1(Mps1)与蛋白酶体α7亚基(PSMA7)是否存在蛋白间相互作用。方法以真核表达质粒p CMV-C-Myc-PSMA7为模板,p GEX-4T-1为载体,构建原核表达载体p GEX-4T-1-PSMA7(GSTPSMA7);并通过GST pull-down及免疫共沉淀实验检测Mps1与PSMA7之间是否存在相互作用。结果免疫印迹实验结果证实,构建的原核表达载体p GEX-4T-1-PSMA7(GST-PSMA7)能正确表达;GST pull-down及免疫共沉淀实验表明,Mps1与PSMA7之间存在蛋白质间相互作用。结论成功构建了原核表达载体p GEX-4T-1-PSMA7(GSTPSMA7),并在大肠杆菌中得到了表达;Mps1与PSMA7之间存在相互作用,为进一步研究两者之间的关系及Mps1功能的影响打下基础。 展开更多
关键词 单极纺锤体蛋白激酶1(mps1) 蛋白酶体α7亚基(PSMA7) 蛋白质相互作用
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