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砷及其代谢物对BEAS-2B细胞p53基因表达影响
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作者 刘娜 江金鋆 +3 位作者 马和 赵瑞欢 何越峰 文卫华 《环境与职业医学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期431-436,共6页
[背景]砷是人类致癌物。砷及其代谢物会影响p53表达,但砷及其代谢物处理人正常肺上皮细胞系(BEAS-2B)后,p53磷酸化及泛素化水平的变化尚不清楚。[目的]探讨砷及其代谢物一甲基胂酸(MMA)和二甲基胂酸(DMA)对BEAS-2B细胞中抑癌基因p53表... [背景]砷是人类致癌物。砷及其代谢物会影响p53表达,但砷及其代谢物处理人正常肺上皮细胞系(BEAS-2B)后,p53磷酸化及泛素化水平的变化尚不清楚。[目的]探讨砷及其代谢物一甲基胂酸(MMA)和二甲基胂酸(DMA)对BEAS-2B细胞中抑癌基因p53表达的影响。用不同浓度亚砷酸钠(NaAsO2)染毒细胞,利用CCK-8试剂检测细胞活力,确定NaAsO2染毒BEAS-2B细胞的剂量和时间。基于细胞活力结果,将细胞分为两组,即不同浓度亚砷酸钠组和砷甲基化代谢产物组,不同浓度亚砷酸钠组染毒剂量分别为0、2、4、6μmol·L^(-1)NaAsO2;砷甲基化代谢产物组包括0μmol·L^(-1)NaAsO2(对照组)、6μmol·L^(-1)MMA组、6μmol·L^(-1)DMA组和6μmol·L^(-1)NaAsO2组。48 h收集细胞,提取总蛋白和总RNA,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测p53 mRNA相对表达水平,采用免疫共沉淀和蛋白质免疫印迹法检测p53泛素化水平,通过蛋白免疫印迹法检测p53蛋白、p53 Ser9和Ser15位点磷酸化蛋白的相对表达水平。[结果]在BEAS-2B细胞中,与对照组相比,不同浓度NaAsO2染毒后,细胞存活率均降低(P<0.05),并且NaAsO2浓度在6μmol·L^(-1)时细胞存活率约为50%。与对照组相比,不同浓度的NaAsO2(2、4、6μmol·L^(-1))处理后p53 mRNA相对表达水平呈逐渐降低趋势,差异具有统计学意义(P<0.05);不同浓度的NaAsO2诱导p53蛋白、Ser9位点磷酸化蛋白相对表达水平均逐渐降低(P<0.05);不同浓度的NaAsO2诱导p53 Ser15位点磷酸化蛋白相对表达水平均呈逐渐降低趋势,但仅6μmol·L^(-1)NaAsO2组低于对照组且差异具有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,MMA组和DMA组p53 mRNA、p53蛋白、Ser9和Ser15位点磷酸化蛋白相对表达水平无明显影响。与对照组相比,NaAsO2染毒后,p53泛素化表达水平明显下降,K48位点泛素化表达水平下降。[结论]砷引起BEAS-2B细胞p53蛋白表达降低主要由于其磷酸化途径被抑制和mRNA表� 展开更多
关键词 砷 P53 一甲基胂酸 二甲基胂酸 泛素化
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