[目的]建立甘草多糖分子量及分子量分布的测定方法,为甘草多糖质量控制提供方法。[方法]利用高效凝胶色谱法测定甘草多糖的分子量及分子量分布;色谱柱为TOSOH TSK gel G4000 PWXL凝胶色谱柱,检测器为示差折光检测器,流动相为0.7%硫酸钠...[目的]建立甘草多糖分子量及分子量分布的测定方法,为甘草多糖质量控制提供方法。[方法]利用高效凝胶色谱法测定甘草多糖的分子量及分子量分布;色谱柱为TOSOH TSK gel G4000 PWXL凝胶色谱柱,检测器为示差折光检测器,流动相为0.7%硫酸钠水溶液,柱温35℃,流速为0.8 mL/min,进样量20μL。[结果]6批样品的重均分子量在8.0×10^4-1.0×10^5之间,线性关系良好,精密度、重复性均良好。[结论]本实验方法操作简便、快速、准确,为甘草多糖规模化生产的质量控制提供了参考。展开更多
为了建立一种对白术多糖的分子量及其单糖组成测定的方法。采用水提醇沉法提取多糖,提取条件为提取温度90℃、料液比1∶16、提取时间1.5 h,重复提取3次; AB-8大孔树脂纯化。采用高效凝胶色谱法测定白术多糖的分子量,流动相:超纯水,流速:...为了建立一种对白术多糖的分子量及其单糖组成测定的方法。采用水提醇沉法提取多糖,提取条件为提取温度90℃、料液比1∶16、提取时间1.5 h,重复提取3次; AB-8大孔树脂纯化。采用高效凝胶色谱法测定白术多糖的分子量,流动相:超纯水,流速:0.7 m L/min,柱温:35℃,示差折光检测器检测;柱前衍生化HPLC法检测白术多糖的单糖组成,多糖样品用三氟乙酸水解,1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮柱前衍生化,经C18色谱柱分离,以磷酸盐缓冲溶液-乙腈(85∶15)洗脱,柱温40℃,流速1.0 m L/min,进样量20μL检测波长254 nm。结果显示白术多糖中95%为Mw≈3500的小分子多糖;经柱前衍生化HPLC法检测,白术多糖由D-甘露糖、D-葡萄糖、D-半乳糖、阿拉伯糖组成,其物质的量比为1∶239∶18.6∶19.3。结果表明试验建立的白术多糖单糖组成分析方法稳定、可靠,可作为白术多糖质量控制方法的参考。展开更多
目的针对重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的关键质量参数进行检测方法研究。方法采用基质辅助激光解吸/飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)及尺寸排阻色谱与多角度光散...目的针对重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的关键质量参数进行检测方法研究。方法采用基质辅助激光解吸/飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)及尺寸排阻色谱与多角度光散射联用(size exclusion chromatography with multi-angle light scattering,SEC-MALS)法测定相对分子质量及其分布;采用毛细管凝胶电泳(capillary electrophoresis sodium dodecyl sulfate,CE-SDS)和分子排阻高效液相色谱(size exclusion high performance liquid chromatography,SE-HPLC)分析纯度;采用离子交换法和毛细管区带电泳(capillary zone electrophoresis,CZE)分离分析电荷异构体;采用“双”酶切肽图法进行一级结构鉴别试验和序列覆盖率分析。结果MALDI-TOF MS测得相对分子质量45.01×10^(3);SEC-MALS得到其单体相对分子质量为45.17×10^(3)(±0.226%);两种相对分子质量测定方法结果一致。CE-SDS(非还原)纯度为98.77%,其他成分1.23%;SE-HPLC纯度为98.07%,其他成分1.93%;两种纯度测定方法结果一致。强阳离子交换共鉴定到14种电荷异构体组分,其中酸性峰占比52.08%,主峰占比26.22%,碱性峰占比21.70%;CZE鉴定到8种电荷异构体组分,其中酸性峰占比52.10%,主峰占比25.27%,碱性峰占比22.63%;两种电荷异构体鉴别方法,酸性组分、主峰与碱性组分,分布规律一致。“双”酶切肽图法实现重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的序列100%覆盖,实测序列与预期序列一致。结论建立了重组Ⅲ型人源化胶原蛋白关键质量参数分析方法,该方法具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,为我国重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的质量控制提供了参考依据。展开更多
文摘为了建立一种对白术多糖的分子量及其单糖组成测定的方法。采用水提醇沉法提取多糖,提取条件为提取温度90℃、料液比1∶16、提取时间1.5 h,重复提取3次; AB-8大孔树脂纯化。采用高效凝胶色谱法测定白术多糖的分子量,流动相:超纯水,流速:0.7 m L/min,柱温:35℃,示差折光检测器检测;柱前衍生化HPLC法检测白术多糖的单糖组成,多糖样品用三氟乙酸水解,1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮柱前衍生化,经C18色谱柱分离,以磷酸盐缓冲溶液-乙腈(85∶15)洗脱,柱温40℃,流速1.0 m L/min,进样量20μL检测波长254 nm。结果显示白术多糖中95%为Mw≈3500的小分子多糖;经柱前衍生化HPLC法检测,白术多糖由D-甘露糖、D-葡萄糖、D-半乳糖、阿拉伯糖组成,其物质的量比为1∶239∶18.6∶19.3。结果表明试验建立的白术多糖单糖组成分析方法稳定、可靠,可作为白术多糖质量控制方法的参考。
文摘目的针对重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的关键质量参数进行检测方法研究。方法采用基质辅助激光解吸/飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)及尺寸排阻色谱与多角度光散射联用(size exclusion chromatography with multi-angle light scattering,SEC-MALS)法测定相对分子质量及其分布;采用毛细管凝胶电泳(capillary electrophoresis sodium dodecyl sulfate,CE-SDS)和分子排阻高效液相色谱(size exclusion high performance liquid chromatography,SE-HPLC)分析纯度;采用离子交换法和毛细管区带电泳(capillary zone electrophoresis,CZE)分离分析电荷异构体;采用“双”酶切肽图法进行一级结构鉴别试验和序列覆盖率分析。结果MALDI-TOF MS测得相对分子质量45.01×10^(3);SEC-MALS得到其单体相对分子质量为45.17×10^(3)(±0.226%);两种相对分子质量测定方法结果一致。CE-SDS(非还原)纯度为98.77%,其他成分1.23%;SE-HPLC纯度为98.07%,其他成分1.93%;两种纯度测定方法结果一致。强阳离子交换共鉴定到14种电荷异构体组分,其中酸性峰占比52.08%,主峰占比26.22%,碱性峰占比21.70%;CZE鉴定到8种电荷异构体组分,其中酸性峰占比52.10%,主峰占比25.27%,碱性峰占比22.63%;两种电荷异构体鉴别方法,酸性组分、主峰与碱性组分,分布规律一致。“双”酶切肽图法实现重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的序列100%覆盖,实测序列与预期序列一致。结论建立了重组Ⅲ型人源化胶原蛋白关键质量参数分析方法,该方法具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,为我国重组Ⅲ型人源化胶原蛋白的质量控制提供了参考依据。
