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MAP3K9在肺癌组织中的表达及其对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响 被引量:1
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作者 段誉 俞建昆 +7 位作者 徐益恒 刘晓晓 李思琪 许木丽 贾皖婷 孔莲花 邰文琳 马千里 《现代肿瘤医学》 CAS 北大核心 2022年第15期2685-2690,共6页
目的:检测MAP3K9在临床肺癌样本及肺癌细胞系中的表达,研究MAP3K9对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响,并结合受试者工作特征曲线(ROC曲线)评估其诊断价值。方法:从云南省肿瘤医院收集2018年09月至2019年12月经病理诊断确诊为肺癌患... 目的:检测MAP3K9在临床肺癌样本及肺癌细胞系中的表达,研究MAP3K9对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响,并结合受试者工作特征曲线(ROC曲线)评估其诊断价值。方法:从云南省肿瘤医院收集2018年09月至2019年12月经病理诊断确诊为肺癌患者的癌组织及其对应的癌旁组织。MAP3K9在肺癌组织及癌旁组织、肺癌细胞系A549和H1299、人正常肺上皮细胞系BEAS-2B中的mRNA表达量采用实时荧光定量PCR技术检测。MAP3K9在细胞系中的蛋白表达量采用蛋白质印迹技术检测。分别用CCK8、划痕和Transwell实验检测细胞的增殖、迁移、侵袭能力。利用在线生存数据库分析表达MAP3K9患者的生存率。使用SPSS软件绘制ROC曲线。结果:MAP3K9在肺癌组织中的表达量显著高于癌旁组织(P<0.05)。MAP3K9在A549和H1299中的表达量均高于BEAS-2B(P均<0.05)。体外细胞实验表明敲低MAP3K9能够明显抑制A549、H1299细胞的增殖、迁移和侵袭(P均<0.05)。生存曲线显示高表达MAP3K9的肺癌患者生存率低(P<0.05)。ROC曲线下面积为0.894(P<0.05),诊断临界值为1.36×10^(-3),诊断敏感度为71.2%,特异度为98.1%。结论:MAP3K9在临床肺癌样本及肺癌细胞系中高表达,该基因高表达能够促进肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,与患者预后不良有关,MAP3K9作为一个致癌基因有潜力成为临床诊断和治疗肺癌的有效靶点。 展开更多
关键词 肺癌 丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶9 细胞增殖 细胞迁移 细胞侵袭
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IκB激酶的激活及其在NF-κB活化过程中的作用 被引量:3
2
作者 王勇 黄文华 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第4期455-458,共4页
在NF κB二聚体活化过程中 ,IκB激酶 (IKK)通过对抑制性蛋白κB (IκBs)的磷酸化而扮演关键的角色 .IKK复合物在胞浆内有多种存在形式 ,其中 ,IKK α、IKK β两者氨基酸序列 5 2 %的同源性 ,空间构象相似 ,常为催化亚单位 ,而IKK γ则... 在NF κB二聚体活化过程中 ,IκB激酶 (IKK)通过对抑制性蛋白κB (IκBs)的磷酸化而扮演关键的角色 .IKK复合物在胞浆内有多种存在形式 ,其中 ,IKK α、IKK β两者氨基酸序列 5 2 %的同源性 ,空间构象相似 ,常为催化亚单位 ,而IKK γ则为调节亚单位 ,它们以不同的方式活化IκBs.核因子κB诱导激酶 (NIK)与丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶 1(MEKK1)均为IKK的上游激酶 ,NIK可引起IKK αSer176、IKK β相应位点的磷酸化 ,而MEKK1主要引起IKK β的活化 .通过级联反应 ,使IκBs磷酸化而与NF κB解离 ,致使NF κB被激活并易位入核 。 展开更多
关键词 IkB激酶 核因子kB诱导激酶 核因子KB 抑制性蛋白kB 丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶-1
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甲状腺癌组织中DCBLD2和MAP4K3的表达及与临床病理特征及预后的关系
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作者 谈玖婷 傅聿明 +1 位作者 刘婧 张倜然 《现代检验医学杂志》 CAS 2024年第2期34-38,67,共6页
目的 探讨甲状腺癌组织中盘状蛋白含CUB和LCCL结构域2(discoidin CUB and LCCL domain containing 2,DCBLD2)、丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶激酶3(mitogen-activated protein kinase kinase kinase kinase 3,MAP4K3)的表达及与临床病理... 目的 探讨甲状腺癌组织中盘状蛋白含CUB和LCCL结构域2(discoidin CUB and LCCL domain containing 2,DCBLD2)、丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶激酶3(mitogen-activated protein kinase kinase kinase kinase 3,MAP4K3)的表达及与临床病理特征及预后的关系。方法 选取2016年1月~2020年6月在扬州大学附属兴化市人民医院诊治的92例甲状腺癌患者。采用免疫组织化学(immunohitochemistry,IHC)检测癌组织及癌旁组织中DCBLD2和MAP4K3的表达。比较不同临床病理特征甲状腺癌患者DCBLD2和MAP4K3表达差异。Kaplan-Meier曲线分析不同DCBLD2和MAP4K3表达患者无进展生存预后的差异。多因素COX分析影响甲状腺癌无进展生存预后的危险因素。结果 甲状腺癌组织中DCBLD2(67.39%),MAP4K3(65.22%)阳性率高于癌旁组织(5.43%,6.52%),差异具有统计学意义(χ^(2)=76.262,68.894,均P<0.05)。癌组织中DCBLD2与MAP4K3的表达呈显著正相关(r=0.742,P<0.05)。TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、并发淋巴结转移癌组织中DCBLD2的阳性率(87.18%,93.75%)和MAP4K3的阳性率(84.62%,90.63%)分别高于Ⅰ~Ⅱ期(52.83%,50.94%)、无淋巴结转移癌组织(53.33%,51.67%),差异具有统计学意义(χ^(2)=11.230~15.513,均P<0.05)。DCBLD2阳性和阴性组患者三年无进展生存率分别为74.19%(46/62),93.33%(28/30)。MAP4K3阳性和阴性组患者三年无进展生存率分别为75.00%(45/60),90.63%(29/32)。DCBLD2阳性组,MAP4K3阳性组患者三年累积无进展生存率低于DCBLD2阴性组、MAP4K3阴性组,差异具有统计学意义(χ^(2)=4.533,4.138,P=0.033,0.046)。DCBLD2阳性(OR=1.659,P=0.001)、MAP4K3阳性(OR=1.606,P=0.001)、肿瘤TNM分期Ⅲ~Ⅳ期(OR=1.766,P=0.001)和并发淋巴结转移(OR=1.868,P=0.001)是影响甲状腺癌患者无进展生存预后的独立危险因素。结论 甲状腺癌组织中DCBLD2和MAP4K3表达升高,两者均参与甲状腺癌的发生发展,有助于评估甲状腺癌患者的无进展生存预后。 展开更多
关键词 甲状腺癌 盘状蛋白含CUB和LCCL结构域2 丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶激酶3 无进展生存预后
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SASH1通过MAP2K2和MAP4K4与ERK信号通路交互作用 被引量:4
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作者 王晶 贺勇 +3 位作者 张继旺 廖娟 曾家伟 周定安 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2014年第11期1530-1536,共7页
目的探讨新候选抑癌基因SASH1与细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路的两个关键分子MAP2K2和MAP4K4的蛋白-蛋白相互作用关系。方法用XhoⅠ和HpaⅠ构建SBP-Flag-SASH1-p BABE-puro反转录病毒载体,转染HEK-293T细胞,通过嘌呤霉素筛选出稳定... 目的探讨新候选抑癌基因SASH1与细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路的两个关键分子MAP2K2和MAP4K4的蛋白-蛋白相互作用关系。方法用XhoⅠ和HpaⅠ构建SBP-Flag-SASH1-p BABE-puro反转录病毒载体,转染HEK-293T细胞,通过嘌呤霉素筛选出稳定表达外源性SASH1基因的细胞系。Western blot检测外源性Flag-SASH1蛋白表达,利用pull-down实验、质谱技术、免疫沉淀鉴定和分析与SASH1结合的并可能调节细胞增殖、转移和凋亡等的关键蛋白。用SASH1-siRNA1和SASH1-siRNA2分别转染MDA-MB-231细胞系,以空白组和Negative-siRNA组为对照。72 h后Western blot检测SASH1的干扰效果和P-ERK1/2水平。结果成功构建稳定表达SBP-Flag-SASH1-p BABE-puro重组质粒的HEK-293T细胞系,SASH1与MAP2K2和MAP4K4结合并发生相互作用。SASH1-siRNA有效抑制MDA-MB-231细胞SASH1蛋白表达(P<0.05),且P-ERK1/2在SASH1抑制组表达增加。结论 MAP2K2和MAP4K4是SASH1的重要的候选结合蛋白,SASH1可能通过与其直接或间接结合串话ERK信号传导通路,进而调节细胞增殖和迁移等细胞生物学功能。 展开更多
关键词 SASH1基因 胞外信号调节激酶 MAP2K2 MAP4K4
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断藤益母汤对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞MEKK2及CIA小鼠关节炎的影响 被引量:6
5
作者 王强 韩隆胤 +4 位作者 魏赈权 李楠 潘东梅 刘敏莹 林昌松 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期31-41,共11页
目的:为了研究断藤益母汤(DTYMD)在类风湿关节炎中对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)上游激酶的调控作用,阐明DTYMD抗炎的分子机制。方法:培养成纤维样滑膜细胞,将细胞分为空白组,模型组,DTYMD高、中、低质量浓度组(1000,800,600 mg·L^-... 目的:为了研究断藤益母汤(DTYMD)在类风湿关节炎中对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)上游激酶的调控作用,阐明DTYMD抗炎的分子机制。方法:培养成纤维样滑膜细胞,将细胞分为空白组,模型组,DTYMD高、中、低质量浓度组(1000,800,600 mg·L^-1),甲氨蝶呤(MTX)组(20μmol·L^-1)组,采用蛋白免疫印迹法(Western blot),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)对丝分裂原活化蛋白激酶激酶激酶2(MEKK2)的蛋白和mRNA表达进行分析。将42只雄性DBA/1J小鼠随机分为6组,每组7只,分别为正常组,模型组,MTX组(2 mg·kg-1),DTYMD低、中、高剂量组(6.25,12.5,25 mg·kg-1)。除正常组外,其他5组均采用二次免疫法构建胶原诱导型关节炎(CIA)模型。给药结束后,取小鼠后肢踝关节行苏木素-伊红(HE)染色并进行关节病理评分。结果:与模型组比较,DTYMD以浓度依赖方式抑制成纤维样滑膜细胞活性(P<0.01);与空白组比较,模型组细胞增殖率升高(P<0.01)。与模型组比较,DTYMD高、中质量浓度组降低MEKK2蛋白及mRNA的表达(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,DTYMD不同剂量组均降低细胞基质金属蛋白酶-1(MMP-1),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)的表达(P<0.01);与空白组比较,模型组MMP-1,IL-6,TNF-α表达明显上升(P<0.05,P<0.01)。在动物实验中,与模型组比较,DTYMD高、中剂量组可以降低CIA小鼠关节肿胀度(P<0.05,P<0.01);与正常组比较,模型组小鼠二次免疫后关节明显肿胀(P<0.05)。在CIA小鼠踝关节HE染色中,与空白组比较,模型组小鼠病理学评分升高(P<0.01);与模型组比较,DTYMD高、中剂量小鼠关节病理评分明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论:DTYMD可能通过下调MEKK2对细胞因子IL-6,TNF-α,MMP-1负性调控,从而缓解类风湿关节炎的炎症反应。 展开更多
关键词 断藤益母汤 类风湿关节炎 丝分裂原活化蛋白激酶激酶激酶2 炎症因子 胶原诱导关节炎小鼠模型
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MEKK3与宫颈癌患者凋亡抑制基因bcl-2表达的相关性研究 被引量:4
6
作者 蒋丹 舒楚强 龚颖萍 《河北医药》 CAS 2020年第14期2164-2167,共4页
目的研究有丝分裂原活化蛋白激酶激酶激酶3(mitogen-activated protein kinase kinase kinase 3,MEKK3)与宫颈癌患者凋亡抑制基因B淋巴细胞瘤-2基因(B lymphocytoma-2 gene,bcl-2)表达的相关性。方法选取2017年1月至2018年12月收治的宫... 目的研究有丝分裂原活化蛋白激酶激酶激酶3(mitogen-activated protein kinase kinase kinase 3,MEKK3)与宫颈癌患者凋亡抑制基因B淋巴细胞瘤-2基因(B lymphocytoma-2 gene,bcl-2)表达的相关性。方法选取2017年1月至2018年12月收治的宫颈癌患者30例,取所有宫颈癌患者手术切除癌组织及癌旁组织标本,行免疫组化染色,检测宫颈癌癌组织及癌旁组织中MEKK3、bcl-2的表达,并分析MEKK3、bcl-2与宫颈癌患者临床病理特征的关系,采用Pearson分析MEKK3、bcl-2之间的相关性。结果宫颈癌癌组织中MEKK3、bcl-2阳性表达率均高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。MEKK3、bcl-2与宫颈癌患者年龄、组织学类型无关,差异无统计学意义(P>0.05);MEKK3、bcl-2与宫颈癌患者FIGO分期、肌层浸润、淋巴结转移、分化程度有关,MEKK3、bcl-2在Ⅲ+Ⅳ期、肌层浸润>1/2、有淋巴结转移、中-高分化的宫颈癌患者中阳性表达率高于在Ⅰ期、Ⅱ期、肌层浸润≤1/2、无淋巴结转移、低分化的宫颈癌患者中阳性表达率,差异有统计学意义(P<0.05)。MEKK3、bcl-2之间呈现正相关(r=0.521,P=0.003)。结论MEKK3在宫颈癌中呈现高表达,且与凋亡抑制基因bcl-2之间具有一定的相关性,两者在宫颈癌的发生发展中具有协同作用。 展开更多
关键词 有丝分裂原活化蛋白激酶激酶激酶3 B淋巴细胞瘤-2基因 宫颈癌
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热激活Rac-MEKK-JNK信号通路与hsp90β基因表达 被引量:1
7
作者 李晓燕 路程 +1 位作者 吴宁华 沈珝琲 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期264-268,共5页
目的探讨Rac-MEKK-JNK(Rac-丝裂原活化的蛋白激酶的激酶的激酶-C-junN端蛋白激酶)信号通路对热诱导hsp90β基因表达的调控作用以及Hsp90蛋白对Rac信号通路传递的调节过程。方法将载体PcDNA3、显性负突变Rac(DN-Rac),显性负突变MEKK(DN-M... 目的探讨Rac-MEKK-JNK(Rac-丝裂原活化的蛋白激酶的激酶的激酶-C-junN端蛋白激酶)信号通路对热诱导hsp90β基因表达的调控作用以及Hsp90蛋白对Rac信号通路传递的调节过程。方法将载体PcDNA3、显性负突变Rac(DN-Rac),显性负突变MEKK(DN-MEKK)和显性负突变JNK(DN-JNK)表达质粒分别与hsp90β基因转录调控片段介导的氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因质粒β3.1共转染Jurkat和LETPa-2细胞,采用以竞争性RT-PCR为基础的系统检测CAT报告基因转录水平。用Western印迹分析检测转染了DN-Rac、DN-MEKK和DN-JNK的细胞在热刺激前后c-Jun的表达水平和磷酸化状态。用体外激酶活性分析法检测geldanamycin(GA)对热诱导的JNK活性的影响。结果转染DN-Rac、DN-MEKK及DN-JNK均能抑制42℃1h诱导的β3.1报告基因的表达,Jurkat细胞中CAT的热诱导表达分别为对照组的(72.8±5)%、(60±13.2)%及(47.7±12.1)%;LETPa-2细胞中CAT的热诱导表达分别为对照组的(16.17±5.1)%、(50.2±8.7)%及(47.5±10)%。转录因子c-Jun的表达和磷酸化水平也在一定程度上被抑制。GA处理细胞可明显抑制热诱导激活的JNK激酶活性和c-Jun的磷酸化水平,但不影响JNK和c-Jun的蛋白表达水平。结论Rac-MEKK-JNK通路参与hsp90β基因的热诱导表达,hsp90可能对热激活化? 展开更多
关键词 Rac-MEKK-JNK信号通路 Rac蛋白 丝裂原活化的蛋白激酶的激酶的激酶 C-junN端蛋白激酶 HSP90Β基因 基因表达调控
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丝裂原激活蛋白激酶激酶激酶激酶4在动脉粥样硬化易损斑块形成中的调节作用 被引量:2
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作者 陶晓芳 王雅洁 +1 位作者 王文斌 费年华 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2022年第11期1346-1352,共7页
目的 探讨丝裂原激活蛋白激酶激酶激酶激酶4(Map4k4)在血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的动脉粥样硬化(AS)易损斑块形成中的调节作用。方法 ApoE^(-/-)小鼠随机分为4组(每组8只):Control组、Ang Ⅱ组、Ang Ⅱ+shMap4k4组和Ang Ⅱ+Map4k4组。... 目的 探讨丝裂原激活蛋白激酶激酶激酶激酶4(Map4k4)在血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的动脉粥样硬化(AS)易损斑块形成中的调节作用。方法 ApoE^(-/-)小鼠随机分为4组(每组8只):Control组、Ang Ⅱ组、Ang Ⅱ+shMap4k4组和Ang Ⅱ+Map4k4组。采用油红O染色(脂质)、Masson染色(胶原)、α-肌动蛋白免疫荧光染色(平滑肌细胞)和F4/80染色(巨噬细胞)检测主动脉窦斑块稳定性。通过免疫荧光和Western blot分析Map4k4表达。体外构建Map4k4敲低或过表达巨噬细胞,用于确认Map4k4在Ang Ⅱ诱导的细胞凋亡中的作用。结果 Ang Ⅱ促进了ApoE^(-/-)小鼠AS斑块易损性和巨噬细胞凋亡(P <0.05),伴随着Map4k4表达的上调(P <0.05)。与Ang Ⅱ组小鼠相比,Ang Ⅱ+shMap4k4组小鼠的AS斑块易损性[(1.22±0.06)vs.(0.49±0.04)]和巨噬细胞凋亡[(8.42±0.40)vs.(3.49±0.31)]明显减弱(P <0.05),而Ang Ⅱ+Map4k4组小鼠上述指标明显增强[(1.22±0.06)vs.(1.45±0.05),(8.42±0.40)vs.(14.11±0.78),P <0.05]。体外实验显示,Map4k4敲低有效减弱了Ang Ⅱ诱导的c-Caspase3、Bax蛋白表达增加(P <0.05),并增加了Bcl-2蛋白表达(P <0.05)。而Map4k4过表达进一步增强了Ang Ⅱ的诱导作用(P <0.05)。结论Ang Ⅱ通过上调Map4k4表达促进巨噬细胞凋亡,并进一步参与AS中易损斑块的形成。 展开更多
关键词 丝裂原激活蛋白激酶激酶激酶激酶4 血管紧张素Ⅱ 动脉粥样硬化 易损斑块 巨噬细胞
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Association of Common Genetic Variants in Mitogen-activated Protein Kinase Kinase Kinase Kinase 4 with Type 2 Diabetes Mellitus in a Chinese Han Population 被引量:1
9
作者 Ting-Ting Li Hong Qiao +2 位作者 Hui-Xin Tong Tian-Wei Zhuang Tong-Tong Wang 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2016年第10期1179-1184,共6页
Background: A study has identified several novel susceptibility variants of the mitogen-activated protein kinase kinase kinase kinase 4 (MAP4K4) gene for type 2 diabetes mellitus (T2DM) within the German populati... Background: A study has identified several novel susceptibility variants of the mitogen-activated protein kinase kinase kinase kinase 4 (MAP4K4) gene for type 2 diabetes mellitus (T2DM) within the German population. Among the variants, five single nucleotide polymorphisms (SNPs) of MAP4K4 (rs1003376, rs1 1674694, rs2236935, rs2236936, and rs6543087) showed significant association with T2DM or diabetes-related quantitative traits. We aimed to evaluate whether common SNPs in the MAP4K4 gene were associated with T2DM in the Chinese population. Methods: Five candidate SNPs were genotyped in 996 patients newly diagnosed with T2DM and in 976 control subjects, using the SNPscanTM method. All subjects were recruited from the Second Affiliated Hospital, Harbin Medical University from October 2010 to September 2013. We evaluated the T2DM risk conferred by individual SNPs and haplotypes using logistic analysis, and the association between the five SNPs and metabolic traits in the subgroups. Results: Of the five variants, SNP rs2236935T/C was significantly associated with T2DM in this study population (odds ratio = 1.293; 95% confidence interval: 1.034-1.619, P= 0.025). In addition, among the controls, rs1003376 was significantly associated with an increased body mass index (P = 0.045) and homeostatic model assessment-insulin resistance (P = 0.037). Conclusions: MAP4K4 gene is associated with T2DM in a Chinese Han population, and MAP4K4 gene variants may contribute to the risk toward the development of T2DM. 展开更多
关键词 Chinese Han Population mitogen-activated protein kinase kinase kinase kinase 4 Single Nucleotide Polymorphism Type 2 Diabetes Mellitus
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菰黑粉菌菌丝形成相关基因UeSsk2的克隆及表达分析 被引量:3
10
作者 曹乾超 张雅芬 +3 位作者 胡鹏 崔海峰 俞晓平 叶子弘 《中国计量大学学报》 2017年第2期252-260,共9页
基于菰黑粉菌全基因组测序结果及其酵母型和菌丝型转录组差异化表达数据库,结合RACE技术克隆获得一个长度为7 625 bp的基因,其中编码序列为5 874 bp,无内含子.结构及聚类分析结果表明该基因编码的MAPKKK蛋白激酶,属于Hog1信号途径,与大... 基于菰黑粉菌全基因组测序结果及其酵母型和菌丝型转录组差异化表达数据库,结合RACE技术克隆获得一个长度为7 625 bp的基因,其中编码序列为5 874 bp,无内含子.结构及聚类分析结果表明该基因编码的MAPKKK蛋白激酶,属于Hog1信号途径,与大麦坚黑粉菌中的Ssk2亲缘关系最近.表达分析结果显示:Ue Ssk2在菌丝诱导形成过程中持续上调表达,而在生长受到抑制的菌丝细胞中其表达无显著变化或受到抑制,表明Ue Ssk2与菌丝形成具有相关性.同时,经生物传感器进行的蛋白互作检测结果表明,Ue Ssk2与前期发现的Ue Mkk1不存在蛋白互作关系,表明该蛋白参与其他MAPK途径来影响菌丝形成及生长. 展开更多
关键词 菰黑粉菌 丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶 UeSsk2基因 二型态转换
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草菇MAPKKK同源基因的克隆及序列分析 被引量:3
11
作者 汪虹 鲍大鹏 +2 位作者 陈明杰 陈辉 冯爱萍 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1606-1609,共4页
根据担子菌丝裂原活化蛋白质激酶激酶激酶(MAPKKK)蛋白的保守序列设计两对简并引物,通过巢式简并PCR方法获得草菇VV-MAPKKK基因中的保守片段,然后通过和草菇基因组信息比对,获得了VV-MAPKKK基因全长序列。VV-MAPKKK基因长度为4434bp,包... 根据担子菌丝裂原活化蛋白质激酶激酶激酶(MAPKKK)蛋白的保守序列设计两对简并引物,通过巢式简并PCR方法获得草菇VV-MAPKKK基因中的保守片段,然后通过和草菇基因组信息比对,获得了VV-MAPKKK基因全长序列。VV-MAPKKK基因长度为4434bp,包含4个内含子,编码1405个氨基酸残基,推定的氨基酸序列与新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)、巴西芽生菌(Paracoccidioides brasiliensis)和异旋孢腔菌(Cochliobolus heterostrophus)的MAPKKK同源蛋白相似性分别为58%、57%和56%。对VV-MAPKKK蛋白的系统发生学分析的结果表明,VV-MAPKKK与担子菌中的Hog信号传导途径的MAPKKK同源蛋白聚在同一进化支上,这些数据都支持所获得的VV-MAPKKK为Hog-MAPKKK蛋白在草菇中的同源物的推定。 展开更多
关键词 草菇 丝裂原活化蛋白质激酶激酶激酶(MAPKKK) 克隆 序列分析
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MAP4K4在肝细胞癌中的表达及意义 被引量:2
12
作者 胡蓉环 刘安文 +1 位作者 蔡婧 张树辉 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期752-755,共4页
目的探讨MAP4K4蛋白在肝细胞癌中的表达及临床病理学意义。方法用400例肝细胞癌蜡块标本构建肝细胞癌组织芯片,采用免疫组织化学技术检测MAP4K4蛋白在含400例配对肝细胞癌及癌旁组织的表达,并分析不同临床病理参数中MAP4K4蛋白表达水平... 目的探讨MAP4K4蛋白在肝细胞癌中的表达及临床病理学意义。方法用400例肝细胞癌蜡块标本构建肝细胞癌组织芯片,采用免疫组织化学技术检测MAP4K4蛋白在含400例配对肝细胞癌及癌旁组织的表达,并分析不同临床病理参数中MAP4K4蛋白表达水平的差异。结果在正常肝、肝炎和肝硬化组织中MAP4K4呈一致阴性或弱阳性表达,周围结缔组织、血管和胆管无MAP4K4阳性着色,Kuffer细胞和淋巴细胞生发中心可见阳性染色;异型增生结节的肝细胞中MAP4K4的表达明显强于正常肝、肝炎和肝硬化组织,肝细胞癌组织中MAP4K4表达显著增强,其中过度表达194例(48.5%),灶性阳性或阴性206例(51.5%);HBsAg阳性患者MAP4K4阳性率51.5%(157/305)显著高于阴性患者的38.8%(37/95)(P=0.033),肿瘤直径≤2cm的MAP4K4阳性率为31.6%(18/57)显著低于肿瘤直径>2cm的51.3%(176/343)(P=0.006),MAP4K4在不同组织学分级中的阳性率差异有统计学意义(P<0.001),肝内转移病例的MAP4K4阳性率为55.5%(152/274)显著高于未转移者的33.3%(42/126)(P=0.002),MAP4K4表达在患者年龄、血清甲胎蛋白浓度、肝硬化、包膜浸润方面差异无统计学意义。结论 MAP4K4在肝细胞癌组织中高表达,并且其表达水平与HBV感染状态、肿瘤大小、组织学分级及转移情况可能有一定关系。 展开更多
关键词 肝细胞癌 MAP4K4 组织芯片 免疫组织化学
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微小RNA-181a-3p表达下调对甲状腺癌细胞放射敏感性的影响及其作用机制 被引量:1
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作者 王红梅 谢斌 +2 位作者 陈寒超 关虹 李春芸 《广西医学》 CAS 2021年第16期1959-1964,共6页
目的探讨下调微小RNA(miRNA)-181a-3p表达对甲状腺癌细胞放射敏感性的影响,并分析其可能的分子生物学机制。方法(1)体外培养甲状腺癌细胞TPC-1、BCPAP和正常甲状腺上皮细胞Nthyori3-1,并以不同剂量(0、2、4、6、8 Gy)X射线照射TPC-1细胞... 目的探讨下调微小RNA(miRNA)-181a-3p表达对甲状腺癌细胞放射敏感性的影响,并分析其可能的分子生物学机制。方法(1)体外培养甲状腺癌细胞TPC-1、BCPAP和正常甲状腺上皮细胞Nthyori3-1,并以不同剂量(0、2、4、6、8 Gy)X射线照射TPC-1细胞,采用定量PCR法检测各细胞中miRNA-181a-3p的表达量。(2)将inhibitor control、miRNA-181a-3p inhibitors分别转染TPC-1细胞(anti-miRNA-NC组、anti-miRNA-181a-3p组),另设对照组(细胞中只加入转染试剂),检测不同剂量(0、2、4、6、8 Gy)X射线照射后的细胞活性和经4 Gy X射线照射后的细胞克隆数。(3)应用TargetScan在线工具预测miRNA-181a-3p和丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶5(MAP3K5)的靶向关系并采用双荧光素酶报告基因实验验证。(4)将空载质粒、shRNA-MAP3K5、shRNA-MAP3K5对照质粒Vector和miRNA-181a-3p inhibitors、shRNA-MAP3K5和miRNA-181a-3p inhibitors分别转染至TPC-1细胞,设为Scrambled组、shMAP3K5组、Vector+anti-miRNA-181a-3p组和shMAP3K5+anti-miRNA-181a-3p组。检测不同剂量(0、2、4、6、8 Gy)X射线照射后的细胞活性和经4 Gy X射线照射后的细胞克隆数。结果(1)TPC-1、BCPAP细胞中miRNA-181a-3p的表达量高于Nthyori3-1细胞(均P<0.05);不同剂量X射线照射能上调TPC-1细胞中miRNA-181a-3p的表达量,且表达量与照射剂量呈剂量依赖性(均P<0.05)。(2)与对照组和anti-miRNA-NC组比较,经4、6、8 Gy X射线照射的anti-miRNA-181a-3p组细胞活力降低,经4 Gy X射线照射后anti-miRNA-181a-3p组细胞克隆数减少(均P<0.05)。(3)TargetScan在线预测和双荧光素酶报告基因实验结果表明,MAP3K5是miRNA-181a-3p的靶基因。(4)与Vector+anti-miRNA-181a-3p组比较,MAP3K5+anti-miRNA-181a-3p组经4、6、8 Gy X射线照射后的细胞活力和经4 Gy X射线照射后的细胞克隆数均增加(P<0.05)。结论miRNA-181a-3p在甲状腺癌细胞中表达上调,抑制miRNA-181a-3p表达或通过靶向调控MAP3K5或可增强甲状腺癌TPC-1细胞的放 展开更多
关键词 甲状腺癌 微小RNA-181a-3p 丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶5 放射敏感性
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茶树3个MAPKKK基因的克隆及其在采后加工中的表达
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作者 沈潮如 杨润梅 +1 位作者 岳川 曹红利 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期1281-1290,共10页
丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)级联在植物应对生物和非生物胁迫过程中发挥重要作用。为了研究MAPKKK基因在应答茶树采后加工中的功能,本研究以福鼎大白茶品种为材料,克隆了3个MAPKKK基因,分别命名为CsMAPKKK18、CsMAPKKK18-like和CsMAPKKK-N... 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)级联在植物应对生物和非生物胁迫过程中发挥重要作用。为了研究MAPKKK基因在应答茶树采后加工中的功能,本研究以福鼎大白茶品种为材料,克隆了3个MAPKKK基因,分别命名为CsMAPKKK18、CsMAPKKK18-like和CsMAPKKK-NPK1。生物信息学分析结果显示,CsMAPKKK18包含1 005 bp开放阅读框,编码334个氨基酸,预测定位于液泡中;CsMAPKKK18-like包含1 209 bp开放阅读框,编码402个氨基酸,预测定位于线粒体中;CsMAPKKK-NPK1包含1 077 bp开放阅读框,编码358个氨基酸,预测定位于细胞核中。3个MAPKKK蛋白均具有MEKK特征性保守区域G(T/S)PX(W/Y/F)MAPEV,属于MEKK亚家族。进化树分析显示,CsMAPKKK18与CsMAPKKK18-like都与番茄、甜椒亲缘关系较近,MAPKKK-NPK1与蓖麻和葡萄关系最近。荧光定量PCR检测结果显示,3个CsMAPKKK基因都在根中表达量较高。在白茶萎凋过程中,3个MAPKKK基因都显著上调表达,其中CsMAPKKK18表达量最高上调达65倍。在乌龙茶做青过程中,CsMAPKKK18表达量显著上调最大为26倍;CsMAPKKK18-like在三摇显著上调,但在晒青、二摇和杀青前显著下调表达;CsMAPKKK-NPK1在晒青过程中显著下调,在一摇、二摇和三摇都显著上调。研究结果表明CsMAPKKKs基因在白茶萎凋过程及乌龙茶做青过程中可能发挥作用,这为后续研究茶叶加工过程中品质形成的分子调控机理提供参考。 展开更多
关键词 茶树 丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶(MAPK) 白茶萎凋 乌龙茶做青 基因表达
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基于MEKK1/SEK1/JNK1/AP-1通路探讨三七总皂苷对4T1乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤模型的影响 被引量:9
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作者 陆慧敏 孙文熙 +1 位作者 霍晨星 陈宝艳 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第24期75-81,共7页
目的:通过研究三七总皂苷对4T1乳腺癌荷瘤小鼠促分裂原激活的蛋白激酶的激酶1(MEKK1)/应激激活的蛋白激酶/细胞外信号调节的蛋白激酶(SAPK/Erk激酶,SEK1)/c-Jun氨基末端激酶1(JNK1)/激活蛋白-1(AP-1)通路的影响,探讨三七总皂苷抑制肿瘤... 目的:通过研究三七总皂苷对4T1乳腺癌荷瘤小鼠促分裂原激活的蛋白激酶的激酶1(MEKK1)/应激激活的蛋白激酶/细胞外信号调节的蛋白激酶(SAPK/Erk激酶,SEK1)/c-Jun氨基末端激酶1(JNK1)/激活蛋白-1(AP-1)通路的影响,探讨三七总皂苷抑制肿瘤的可能机制。方法:建立4T1乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤模型,将48只造模成功的小鼠随机分为三七总皂苷低、中、高剂量组(10,20,40 mg·kg^-1)和模型组,每组12只,三七总皂苷各剂量组腹腔注射剂量为10 mL·kg^-1,模型组给予相同剂量的生理盐水,连续给药28 d。给药结束后分离肿瘤组织、称质量、切片、匀浆等,采用脱氧核苷酸末端转移酶(TdT)介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)染色检测肿瘤细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肿瘤组织MEKK1,SEK1,JNK1,AP-1 mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测4T1乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤组织MEKK1,SEK1,JNK1,AP-1蛋白表达。结果:与模型组比较,三七总皂苷中、高剂量组的肿瘤质量明显下降(P<0.05);肿瘤细胞凋亡数量随三七总皂苷剂量的升高明显升高(P<0.05);三七总皂苷中、高剂量组肿瘤组织中MEKK1,SEK1,JNK1,AP-1 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论:三七总皂苷对4T1乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤模型具有抑制作用,其作用机制可能与激活MEKK1/SEK1/JNK1/AP-1信号通路有关。 展开更多
关键词 三七总皂苷 4T1小鼠乳腺癌细胞 促分裂原激活的蛋白激酶的激酶1(MEKK1)/应激激活的蛋白激酶/细胞外信号调节的蛋白激酶(SAPK/Erk激酶 SEK1)/c-Jun氨基末端激酶1(JNK1)/激活蛋白-1(AP-1)通路 凋亡
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电针对帕金森病大鼠海马组织MAP4K3/MKK4/JNK通路的影响 被引量:3
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作者 朱福连 梁培日 张创良 《遵义医科大学学报》 2022年第2期153-158,共6页
目的探讨电针对帕金森病(PD)大鼠海马组织丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶激酶3(MAP4K3)/丝裂原活化蛋白激酶激酶4(MKK4)/c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路的影响。方法大鼠分为对照组、PD模型组(PD造模)及电针干预组(PD造模+电针干预)。Morris... 目的探讨电针对帕金森病(PD)大鼠海马组织丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶激酶3(MAP4K3)/丝裂原活化蛋白激酶激酶4(MKK4)/c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路的影响。方法大鼠分为对照组、PD模型组(PD造模)及电针干预组(PD造模+电针干预)。Morris水迷宫实验记录逃避潜伏期及原平台停留时间,旷场实验统计水平运动得分及垂直运动得分,HE染色观察大鼠海马组织病理改变,TUNEL染色检测大鼠海马组织中细胞凋亡,Western blot法检测大鼠海马组织中MAP4K3/MKK4/JNK通路及凋亡相关蛋白表达。结果与对照组相比,PD模型组大鼠逃避潜伏期显著延长(P<0.05),原平台停留时间显著缩短(P<0.05),水平运动得分及垂直运动得分显著降低(P<0.05),大鼠海马组织中细胞凋亡率及MAP4K3、p-MKK4/MKK4、p-JNK/JNK、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.05),海马组织出现明显的病理学改变;与PD模型组相比,电针干预组大鼠逃避潜伏期显著缩短(P<0.05),原平台停留时间显著延长(P<0.05),水平运动得分及垂直运动得分显著升高(P<0.05),大鼠海马组织中细胞凋亡率及MAP4K3、p-MKK4/MKK4、p-JNK/JNK、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平显著降低(P<0.05),海马组织病理改变较轻。结论电针可抑制MAP4K3/MKK4/JNK通路激活,减轻PD大鼠海马组织细胞凋亡及病理改变,提高认知、行为功能。 展开更多
关键词 电针 帕金森病 海马 丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶激酶3/丝裂原活化蛋白激酶激酶4/c-Jun氨基末端激酶
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六味地黄丸通过MAPKKK1、KLF4抑制三阴乳腺癌的作用机制 被引量:3
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作者 郑里翔 刘婷婷 +2 位作者 黄萍 权威 俞志鹏 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期16-25,共10页
目的:探讨六味地黄丸通过丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶1(MAPKKK1)、锌指转录因子4(KLF4)抑制三阴乳腺癌的作用机制。方法:400只SPF级11.5月龄昆明种雌性种鼠,每3 d触诊乳腺部位1次,自发瘤小鼠随机分为模型组(给予生理盐水)、紫杉醇组(0.0... 目的:探讨六味地黄丸通过丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶1(MAPKKK1)、锌指转录因子4(KLF4)抑制三阴乳腺癌的作用机制。方法:400只SPF级11.5月龄昆明种雌性种鼠,每3 d触诊乳腺部位1次,自发瘤小鼠随机分为模型组(给予生理盐水)、紫杉醇组(0.025 g·kg^(-1)·d^(-1)腹腔注射21 d)、六味地黄丸高、中、低剂量组(7.2、3.6、1.8 g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃),饲养至濒死期剥离瘤组织,测瘤体积、质量、计算抑瘤率及发瘤小鼠生存期(6个月后未发瘤小鼠设为正常组);选用SPF级SD大鼠制备不同浓度六味地黄丸含药血清用于培养细胞,沉默MDA-MB-231细胞中MAPKKK1,免疫荧光及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测MAPKKK1和KLF4蛋白表达。结果:体内实验表明,与正常组比较,模型组肿瘤组织MAPKKK1、KLF4蛋白表达显著下降(P<0.01);与模型组比较,各用药组肿瘤组织体积明显减小、质量明显降低(P<0.05,P<0.01),抑瘤率升高,发瘤小鼠生存期明显延长(P<0.05),MAPKKK1蛋白表达显著升高(P<0.01),紫杉醇组及六味地黄丸高剂量组KLF4蛋白表达显著升高(P<0.01)。体外实验表明,与正常大鼠血清比较,各用药组MDA-MB-231细胞中MAPKKK1、KLF4荧光强度明显增强,紫杉醇组及六味地黄丸高、中剂量组MAPKKK1蛋白表达明显升高,紫杉醇组及六味地黄丸高剂量组KLF4蛋白表达显著升高(P<0.01)。沉默MAPKKK1后,与阴性质粒组(未沉默MAPKKK1)比较,阳性质粒组(沉默MAPKKK1)中MAPKKK1及KLF4荧光强度明显减弱(P<0.05),蛋白表达显著降低(P<0.01);与阳性质粒组比较,各用药组MAPKKK1及KLF4荧光强度均有明显增强,蛋白表达均有明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:六味地黄丸抑制三阴性乳腺癌的生长,其可能的分子机制是通过上调MAPKKK1的表达,从而激活KLF4的表达。 展开更多
关键词 六味地黄丸 三阴性乳腺癌 丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶1 锌指转录因4 质粒沉默
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miR-380调控羊驼黑色素细胞MAPK/ERK信号通路 被引量:1
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作者 杜斌 刘学贤 +4 位作者 姬凯元 杨姗姗 刘博 张俊珍 范瑞文 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期876-883,共8页
miR-380是不同羊驼毛色中差异表达的基因之一,但是否与黑色素生成有关未见报道。为了丰富调控黑色素生成的机制,挖掘黑色素生成路径中所涉及到的更多新的基因并揭示miR-380在黑色素细胞中的功能,本实验通过生物信息学方法预测出MAPK信... miR-380是不同羊驼毛色中差异表达的基因之一,但是否与黑色素生成有关未见报道。为了丰富调控黑色素生成的机制,挖掘黑色素生成路径中所涉及到的更多新的基因并揭示miR-380在黑色素细胞中的功能,本实验通过生物信息学方法预测出MAPK信号通路的成员MAP3K6是miR-380的靶基因之一。在293T细胞中共转染miR-380和MAP3K6后,与对照组相比双荧光报告酶活性下降(28.92±25.63)%(P<0.01),下降趋势明显,说明MAP3K6可能是miR-380的靶基因之一;在羊驼黑色素细胞中转染miR-380后,MAP3K6、MEK1、ERK1/2、CREB和MITF在转录水平的表达量与NC组相比具有显著下降趋势,其中CREB下降趋势尤为显著(64.20±54.30)%(P<0.01),Western印迹检测MAP3K6、p-MEK1、p-ERK1/2、CREB和MITF在蛋白质水平的表达与NC组相比下降趋势明显且p-MEK1和CREB基因下降极为显著,分别为(29.09±10.68)%(P<0.001)和(47.12±6.70)%(P<0.001),抑制组则反之。通过Masson-Fontana黑色素颗粒染色法检测miR-380抑制黑色素细胞产生黑色素颗粒,用紫外分光度法检测真黑素(eumelanin,EM)和褐黑素(pheomelanin,PM),含量结果提示EM与PM含量分别下降为(38.63±2.00)%(P<0.01),(54.10±5.73)%(P<0.001)且PM含量下降极为显著。综上所述miR-380通过靶向抑制MAP3K6等基因的表达,从而对MAPK/ERK信号通路起调控作用,最终影响黑色素生成生物学功能,此研究对哺乳动物毛色形成机制和防止皮肤受紫外辐射有重要意义。 展开更多
关键词 miR-380 丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶6 丝裂原活化蛋白激酶 胞外信号调节激酶1/2 c AMP反应元件结合蛋白质 小眼畸形转录因子 黑色素细胞
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