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ATP浓度和缺氧暴露对大鼠脑线粒体RNA和蛋白质体外合成的影响 被引量：29
1
作者 柳君泽 高文祥 +2 位作者 蔡明春 曹利飞 孙秉庸 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期485-489,共5页
本文探讨介质中ATP浓度和急、慢性缺氧暴露对大鼠脑线粒体内RNA和蛋白质合成的影响。用差速离心法分离正常和低压舱模拟 4 0 0 0m高原急性连续缺氧暴露 3d和慢性连续缺氧暴露 40d大鼠脑线粒体 ,用体外无细胞 (cell freeinvitro) 3H UTP... 本文探讨介质中ATP浓度和急、慢性缺氧暴露对大鼠脑线粒体内RNA和蛋白质合成的影响。用差速离心法分离正常和低压舱模拟 4 0 0 0m高原急性连续缺氧暴露 3d和慢性连续缺氧暴露 40d大鼠脑线粒体 ,用体外无细胞 (cell freeinvitro) 3H UTP和3H Leucine掺入法分别测定线粒体RNA和蛋白质合成活性。结果显示 ,大鼠急性缺氧暴露后大脑皮质线粒体RNA体外合成活性降低 40 % ,蛋白质合成活性降低 60 % ;慢性缺氧暴露后线粒体RNA和蛋白质合成活性分别为对照的 72 %和 76% ;ATP对正常大鼠脑线粒体RNA以及蛋白质的体外合成活性的影响均呈双相性 ,大于或小于 1mmol/L均可产生不同程度的抑制效应。结果提示 ,缺氧可在转录和翻译两个水平上影响脑线粒体mtDNA的表达 ,而慢性缺氧暴露时 ,线粒体半自主性功能的改善可能是机体对缺氧适应的细胞机制之一 ; 展开更多
关键词 ATP浓度 缺氧暴露 大鼠 脑线粒体RNA 蛋白质 体外合成
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大鼠脑线粒体体外蛋白翻译体系的建立及蛋白产物的鉴定
2
作者 蔡明春 柳君泽 吴利平 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期1-4,共4页
目的 :建立大鼠脑组织线粒体的体外蛋白合成体系并对其合成产物进行电泳分离和分子量鉴定。方法 :分离大鼠脑组织线粒体 ,用3 H 亮氨酸掺入法探索线粒体体外翻译的最佳条件 ,3 5S 蛋氨酸掺入并对翻译后产物经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳和... 目的 :建立大鼠脑组织线粒体的体外蛋白合成体系并对其合成产物进行电泳分离和分子量鉴定。方法 :分离大鼠脑组织线粒体 ,用3 H 亮氨酸掺入法探索线粒体体外翻译的最佳条件 ,3 5S 蛋氨酸掺入并对翻译后产物经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳和放射自显影进行分子量鉴定。结果 :分离的线粒体氧化磷酸化偶联程度高 ,呼吸控制率(RCR)在 3.5～ 5 .5之间 ;体外3 H 亮氨酸的掺入活性在 6 0min内近似线性增长 ,而后维持在一相对稳定水平 ;3 H 亮氨酸的掺入活性随线粒体蛋白浓度而增加 ,而单位线粒体蛋白的掺入活性在 1mg/ml时最高 ;3 5S 蛋氨酸掺入SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳后可观察到清晰的 8条自显影带 ,分子量分别为 (单位Kda) 86、6 6、5 6、43、33、2 9、2 5、18。结论 :用此方法建立的脑线粒体离体翻译反应体系具有高活性和翻译忠实性等特点 。 展开更多
关键词 线粒体翻译 大鼠脑 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 蛋白产物 鉴定 体外翻译体系
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