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抗菌肽基因misgurin同向串连表达载体构建新策略
被引量：
8
1
作者
龚杰万
刘飞鹏
《生物技术》
CAS
CSCD
2002年第1期1-2,共2页
目的是将抗菌肽基因misgurin以同向串连方式连接成多拷贝基因 ,并克隆到甲醇酵母表达载体上。在设计和连接中采用新策略 ,运用常规分子克隆操作进行表达载体构建 ,结果表明 ,该策略能方便高效地进行基因多拷贝同向串连表达载体的构建。
关键词
抗菌肽
misgurin
同向串连
多拷贝基因
表达载体
下载PDF
职称材料
泥鳅抗菌肽在毕赤酵母SMD1168中的高效表达及活性检测
被引量：
3
2
作者
马萍
薛林贵
+7 位作者
尚海
何小燕
谢长庚
王霞
范桃桃
陈熙明
姜金融
李婷
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第5期970-980,共11页
【背景】泥鳅抗菌肽Misgurin是泥鳅非特异性免疫防御系统的重要组成部分,具有广谱和较强的抗菌能力,所以获得大量抗菌肽是很有必要的。【目的】为了实现高效表达泥鳅抗菌肽Misgurin。【方法】将泥鳅抗菌肽的目的基因与p PIC9K表达载体连...
【背景】泥鳅抗菌肽Misgurin是泥鳅非特异性免疫防御系统的重要组成部分,具有广谱和较强的抗菌能力,所以获得大量抗菌肽是很有必要的。【目的】为了实现高效表达泥鳅抗菌肽Misgurin。【方法】将泥鳅抗菌肽的目的基因与p PIC9K表达载体连接,构建重组表达质粒p PIC9K-misgurin,Sal I酶切线性化,再通过电击法将其整合到毕赤酵母SMD1168染色体上。在MD固体培养基挑选阳性克隆子到MD液体培养基中,30°C、200 r/min摇瓶培养96 h,转接到BMMY液体培养基进行诱导表达,每隔24 h加入5%的甲醇。通过比较抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌圈直径的大小,筛选出活性较高的菌株p PIC9K-misgurin-22。将该菌株在100 L的发酵罐中诱导表达,48 h后进行活性检测。【结果】经Tricine-SDS-PAGE蛋白胶检测和质谱分析鉴定,p PIC9K-misgurin-22菌株诱导表达的活性物质为抗菌肽Misgurin。发酵罐发酵48 h相对于摇瓶发酵48 h,抗大肠杆菌的生物效价提高了1.47倍,抗金黄色葡萄球菌的生物效价提高了1.43倍;抗菌肽Misgurin对鲍曼不动杆菌、沙门氏菌有较弱的抗菌活性,对致病菌产气荚膜梭菌和益生菌如枯草芽孢杆菌、粪肠球菌、乳酸菌没有抗菌活性,无明显溶血活性;当温度达到90°C时发酵液的抗菌活性明显减弱,调发酵液的p H值在1.0-12.0之间都有抗菌活性;加入胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K后抗菌活性减弱。【结论】获得了一株在毕赤酵母中表达量较高、有工业化生产潜力的产抗菌肽Misgurin的菌株。
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关键词
泥鳅抗菌肽
毕赤酵母
发酵
抑菌活性
溶血活性
耐酸碱
原文传递
题名
抗菌肽基因misgurin同向串连表达载体构建新策略
被引量：
8
1
作者
龚杰万
刘飞鹏
机构
暨南大学生命科学技术学院遗传室
出处
《生物技术》
CAS
CSCD
2002年第1期1-2,共2页
基金
广东省自然科学基金资助项目 (970 636)
文摘
目的是将抗菌肽基因misgurin以同向串连方式连接成多拷贝基因 ,并克隆到甲醇酵母表达载体上。在设计和连接中采用新策略 ,运用常规分子克隆操作进行表达载体构建 ,结果表明 ,该策略能方便高效地进行基因多拷贝同向串连表达载体的构建。
关键词
抗菌肽
misgurin
同向串连
多拷贝基因
表达载体
Keywords
antimicrobial peptide
misgurin
tandem in the same direction
multi-copy
expression vector
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
TQ460.38 [化学工程—制药化工]
下载PDF
职称材料
题名
泥鳅抗菌肽在毕赤酵母SMD1168中的高效表达及活性检测
被引量：
3
2
作者
马萍
薛林贵
尚海
何小燕
谢长庚
王霞
范桃桃
陈熙明
姜金融
李婷
机构
兰州交通大学化学与生物工程学院
中国科学院西北生态环境资源研究院沙漠与沙漠化重点实验室
兰州大学细胞活动与逆境适应教育部重点实验室
出处
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第5期970-980,共11页
基金
甘肃省科技支撑计划(1504FKCA015)
国家自然科学基金(31260135
31400437)~~
文摘
【背景】泥鳅抗菌肽Misgurin是泥鳅非特异性免疫防御系统的重要组成部分,具有广谱和较强的抗菌能力,所以获得大量抗菌肽是很有必要的。【目的】为了实现高效表达泥鳅抗菌肽Misgurin。【方法】将泥鳅抗菌肽的目的基因与p PIC9K表达载体连接,构建重组表达质粒p PIC9K-misgurin,Sal I酶切线性化,再通过电击法将其整合到毕赤酵母SMD1168染色体上。在MD固体培养基挑选阳性克隆子到MD液体培养基中,30°C、200 r/min摇瓶培养96 h,转接到BMMY液体培养基进行诱导表达,每隔24 h加入5%的甲醇。通过比较抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌圈直径的大小,筛选出活性较高的菌株p PIC9K-misgurin-22。将该菌株在100 L的发酵罐中诱导表达,48 h后进行活性检测。【结果】经Tricine-SDS-PAGE蛋白胶检测和质谱分析鉴定,p PIC9K-misgurin-22菌株诱导表达的活性物质为抗菌肽Misgurin。发酵罐发酵48 h相对于摇瓶发酵48 h,抗大肠杆菌的生物效价提高了1.47倍,抗金黄色葡萄球菌的生物效价提高了1.43倍;抗菌肽Misgurin对鲍曼不动杆菌、沙门氏菌有较弱的抗菌活性,对致病菌产气荚膜梭菌和益生菌如枯草芽孢杆菌、粪肠球菌、乳酸菌没有抗菌活性,无明显溶血活性;当温度达到90°C时发酵液的抗菌活性明显减弱,调发酵液的p H值在1.0-12.0之间都有抗菌活性;加入胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K后抗菌活性减弱。【结论】获得了一株在毕赤酵母中表达量较高、有工业化生产潜力的产抗菌肽Misgurin的菌株。
关键词
泥鳅抗菌肽
毕赤酵母
发酵
抑菌活性
溶血活性
耐酸碱
Keywords
misgurin
Pichia pastoris
Fermentation
Antimicrobial activity
Hemolytic activity
Tolerance acid and alkali
分类号
Q51 [生物学—生物化学]
Q78
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗菌肽基因misgurin同向串连表达载体构建新策略
龚杰万
刘飞鹏
《生物技术》
CAS
CSCD
2002
8
下载PDF
职称材料
2
泥鳅抗菌肽在毕赤酵母SMD1168中的高效表达及活性检测
马萍
薛林贵
尚海
何小燕
谢长庚
王霞
范桃桃
陈熙明
姜金融
李婷
《微生物学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2018
3
原文传递
已选择
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引证文献
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