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微RNA-30b-5p通过靶向Atg5抑制多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞自噬 被引量:3
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作者 王雪敏 王亚楠 +2 位作者 牛爱琴 叶英 李飞 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期20-28,共9页
目的·探究microRNA-30b-5p(miR-30b-5p)在多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠中的表达及miR-30b-5p过表达对卵巢颗粒细胞(granulosa cell,GC)自噬的影响。方法·采用脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA... 目的·探究microRNA-30b-5p(miR-30b-5p)在多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠中的表达及miR-30b-5p过表达对卵巢颗粒细胞(granulosa cell,GC)自噬的影响。方法·采用脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)建立PCOS大鼠模型,实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)和Western blotting检测正常组和PCOS组大鼠卵巢组织中miR-30b-5p和自噬相关蛋白5同源物(autophagy-associated protein 5 homologue,Atg5)的表达。分离并培养原代PCOS大鼠卵巢GC,分为对照组、miR-NC组、miR-30b-5p过表达组、miR-30b-5p过表达+pcDNA3.1-NC组、miR-30b-5p过表达+pcDNA3.1-Atg5组,另取正常组大鼠卵巢GC为空白组;将miR-30b-5p mimic和pcDNA3.1-Atg5及相应的阴性对照转染到细胞中,转染48 h后,qRT-PCR检测各组细胞中miR-30b-5p和Atg5 mRNA表达,验证转染效果。CCK-8及流式细胞仪分别检测细胞活力和凋亡率;免疫荧光染色检测各组细胞微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)阳性表达;Western blotting检测自噬相关蛋白Atg5、p62、Beclin-1和LC3蛋白表达。结果·PCOS组大鼠卵巢组织中miR-30b-5p表达水平显著低于正常组,Atg5 mRNA和蛋白水平显著高于正常组(均P=0.000)。转染后,与空白组相比,对照组卵巢GC中miR-30b-5p水平、细胞凋亡率、p62蛋白水平显著降低,Atg5 mRNA和蛋白水平、细胞增殖活性、LC3阳性细胞百分比、Beclin-1蛋白水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著升高(均P=0.000);与对照组相比,miR-30b-5p过表达组卵巢GC中miR-30b-5p水平、细胞凋亡率、p62蛋白水平显著升高,Atg5 mRNA和蛋白水平、细胞增殖活性、LC3阳性细胞百分比、Beclin-1蛋白水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著降低(均P=0.000)。上调Atg5可明显减弱miR-30b-5p过表达对卵巢GC增殖和自噬的抑制作用(均P=0.000)。结论·MiR-30b-5p在PCOS中呈低表达;过表达miR-30b-5p可抑制PCOS大鼠卵巢GC增殖和自噬,促进细胞凋亡,其作用 展开更多
关键词 多囊卵巢综合征 microrna-30b-5p 自噬 自噬相关蛋白5同源物 增殖 凋亡
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血浆miR-30b-5p、EVLWI与急性呼吸窘迫综合征患者病情严重程度及预后的关系 被引量:6
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作者 龙威 曾雅军 陈颖 《山东医药》 CAS 2021年第7期15-19,共5页
目的探讨血浆miR-30b-5p、血管外肺水指数(EVLWI)与急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者病情严重程度及预后的关系。方法选择172例ARDS患者,根据氧合指数(PaO_(2)/FiO_(2))分为轻度组(PaO_(2)/FiO_(2):201~300 mmHg,53例)、中度组(PaO_(2)/FiO... 目的探讨血浆miR-30b-5p、血管外肺水指数(EVLWI)与急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者病情严重程度及预后的关系。方法选择172例ARDS患者,根据氧合指数(PaO_(2)/FiO_(2))分为轻度组(PaO_(2)/FiO_(2):201~300 mmHg,53例)、中度组(PaO_(2)/FiO_(2):101~200 mmHg,71例)、重度组(PaO_(2)/FiO_(2):≤100 mmHg,48例),根据住院28 d内死亡情况将其分为死亡组(64例)和存活组(108例)。采用RT-PCR法检测血浆miR-30b-5p表达,脉波指示剂连续心排出量监测(PiCCO)法检测EVLWI指数,Spearman秩相关分析miR-30b-5p、EVLWI与ARDS分级、急性生理学和慢性健康状况评分Ⅱ(APACHEⅡ)评分、顺序序贯器官衰竭评估(SOFA)评分间相关性,二元Logistic回归分析ARDS患者预后的相关影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-30b-5p、EVLWI预测ARDS患者预后的价值。结果重度组血浆miR-30b-5p表达、EVLWI指数高于中度组和轻度组(P均<0.05),中度组血浆miR-30b-5p表达、EVLWI指数高于轻度组(P均<0.05)。死亡组SOFA评分、APACHEⅡ评分、血浆miR-30b-5p表达、EVLWI指数高于存活组(P均<0.05),PaO_(2)/FiO_(2)低于存活组(P<0.05)。Spearman秩相关分析结果显示,ARDS患者血浆miR-30b-5p表达、EVLWI指数与APACHEⅡ评分、SOFA评分、ARDS分级均呈正相关(r分别为0.502、0.498、0.573,0.568、0.623、0.619,P均<0.05)。二元Logistic回归分析结果显示,高APACHEⅡ评分、高表达miR-30b-5p、高EVLWI指数是ARDS不良预后的危险因素(P均<0.01)。ROC曲线分析结果示,miR-30b-5p、EVLWI、miR-30b-5p+EVLWI预测ARDS患者预后的曲线下面积分别为0.738、0.824、0.913。结论ARDS患者血浆miR-30b-5p、EVLWI与ARDS患者病情严重程度和预后有关,二者可作为预后评估的参考指标。 展开更多
关键词 急性呼吸窘迫综合征 微小RNA-30b-5p 血管外肺水指数 氧合指数 顺序序贯器官衰竭评估评分 急性生理学和慢性健康状况评分Ⅱ 预后
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微小RNA-30b-5p在前列腺癌组织的表达及其过表达对前列腺癌细胞增殖的影响 被引量:6
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作者 刘贤莉 乐汉娥 +2 位作者 陈浩 毛艳艳 江文凛 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1629-1632,共4页
目的观察微小RNA(miRNA,miR)-30b-5p在前列腺癌中的表达及其对前列腺癌细胞增殖的影响。方法通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测4l例前列腺癌组织及癌旁组织中miRNA-30b-5p的表达差异;分析上述组织中miR-30b-5p的表... 目的观察微小RNA(miRNA,miR)-30b-5p在前列腺癌中的表达及其对前列腺癌细胞增殖的影响。方法通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测4l例前列腺癌组织及癌旁组织中miRNA-30b-5p的表达差异;分析上述组织中miR-30b-5p的表达与患者临床病理特征的关系。将人前列腺癌PC-3细胞分为空白对照组,阴性对照组及过表达组,分别进行转染,RT-qPCR法检测各组细胞中miR-30b-5p的表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)实验和细胞平板集落实验检测细胞增殖能力,Westernblot检测细胞中细胞核增殖抗原(Ki-67)、13-连环蛋白(13.catenin)及细胞周期蛋白D1(CyclinD1)的蛋白表达。结果前列腺癌组织中miR-30b-5p的表达(0.469±0.032)显著低于癌旁组织(0.997±0.016,t=14.499,P=0.000)。miR-30b-5p低表达的患者在临床分期Ⅲ~Ⅳ期、病理分级G1~G4级及Gleason评分t〉8分者中所占比例明显高于临床分期I-Ⅱ期[65.2%(15/23)与33.3%(6/18),X^2=4.108,P=0.043]、病理分级G1~G2级[72.7%(16/22)与26.3%(5/19),X^2=6.145,P=0.013]、及Gleason评分≤7分[72.0%(18/25)与18.8%(3/16),X^2=11.072,P=0.001]所占比例均明显增加,而不同年龄患者的miR-30b-5p低表达比例比较差异无统计学意义[54.5%(12/22)与47.4%(9/19),X^2=0.210,P=0.647]。转染后,过表达组miR-30b-5p的表达(4.088±0.229)显著高于阴性对照组(1.028±0.054,F=168.200,P=0.000)。48h及72h时,过表达组A450值(0.308±0.040,0.512±0.033)显著低于阴性对照组A450值(0.494±0.035,0.840±0.037,F=6.514,P=0.001)。过表达组细胞菌落数(14.400±2.227)显著低于阴性对照组(87.600±4.760,F=111.000,P=0.000)。过表达组Ki-67、β-eatenin及CyclinD1的蛋白表达(0.622±0.095、0.437±0.091、0.237±0� 展开更多
关键词 前列腺癌 微小RNA-30b-5p 细胞增殖 Wnt/β-连环蛋白信号通路
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血浆微小RNA-30b-5p联合血管外肺水指数评估急性呼吸窘迫综合征患者预后的价值 被引量:5
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作者 李材忠 谭孟源 +2 位作者 王生成 蔡萧阳 李玄丹 《中华危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期570-574,共5页
目的探讨血浆微小RNA-30b-5p(miR-30b-5p)联合血管外肺水指数(EVLWI)对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者预后的评估价值。方法选择2016年1月至2019年6月儋州市人民医院收治的120例ARDS患者作为研究对象。收集患者的性别、年龄、体重指数(B... 目的探讨血浆微小RNA-30b-5p(miR-30b-5p)联合血管外肺水指数(EVLWI)对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者预后的评估价值。方法选择2016年1月至2019年6月儋州市人民医院收治的120例ARDS患者作为研究对象。收集患者的性别、年龄、体重指数(BMI)、基础疾病、病因以及心率(HR)、呼吸频率(RR)、氧合指数(OI)、动脉血二氧化碳分压(PaCO2)和急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ(APACHEⅡ)等基线值,根据住院期间生存情况分为存活组和死亡组,根据OI分为轻中度组(OI>100 mmHg,1 mmHg=0.133 kPa)和重度组(OI≤100 mmHg)。采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测血浆miR-30b-5p表达,并测定EVLWI。绘制受试者工作特征曲线(ROC),分析血浆miR-30b-5p及EVLWI预测ARDS患者死亡的价值;用Pearson相关法分析住院期间不同预后ARDS患者血浆miR-30b-5p与EVLWI的相关性。结果 120例ARDS患者均纳入分析,死亡组42例,存活组78例;轻中度组67例,重度组53例。死亡组患者APACHEⅡ评分高于存活组,但两组性别、年龄、BMI、基础疾病、病因及HR、RR、OI和PaCO2基线值比较差异均无统计学意义。死亡组患者血浆miR-30b-5p表达水平及EVLWI均明显高于存活组〔miR-30b-5p(2-ΔΔCt):2.28±0.74比0.52±0.06,EVLWI(mL/kg):15.38±4.60比10.24±2.15,均P<0.01〕。重度组血浆miR-30b-5p表达水平、EVLWI及住院病死率均明显高于轻中度组〔miR-30b-5p(2-ΔΔCt):2.05±0.65比0.93±0.17,EVLWI(mL/kg):14.65±4.20比11.36±2.28,住院病死率:58.5%(31/53)比16.4%(11/67),均P<0.01〕。ROC曲线分析显示,血浆miR-30b-5p及EVLWI预测ARDS患者住院期间死亡的最佳截断值分别为1.62和13.28 mL/kg,两项指标联合预测的ROC曲线下面积(AUC)明显高于二者单独预测(0.897比0.827和0.785),且联合预测的敏感度和特异度均较高,分别为90.5%和84.2%。Pearson相关分析显示,ARDS死亡患者血浆miR-30b-5p与EVLWI呈显著正相关(r=0.768,P<0.01);而存活者二者无� 展开更多
关键词 急性呼吸窘迫综合征 微小RNA-30b-5p 血管外肺水指数 预后评估
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miR-30b-5p通过HELLS抑制肺腺癌细胞增殖
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作者 刘爽 郭冉 +2 位作者 苏新云 杨文平 周玉法 《现代免疫学》 CAS 北大核心 2023年第5期376-385,共10页
为探讨miR-30b-5p靶向淋巴样特异性解旋酶(helicase lymphoid-specific, HELLS)对肺腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制,通过生物信息学分析miR-30b-5p和HELLS在肺腺癌组织中的表达及其与临床表型的关系;将体外培养的A549和Calu-3细胞分... 为探讨miR-30b-5p靶向淋巴样特异性解旋酶(helicase lymphoid-specific, HELLS)对肺腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制,通过生物信息学分析miR-30b-5p和HELLS在肺腺癌组织中的表达及其与临床表型的关系;将体外培养的A549和Calu-3细胞分为miR-NC组(转染miR-NC)、miR-30b-5p组(转染miR-30b-5p)、miR-30b-5p+HELLS组(转染miR-30b-5p和HELLS),采用RT-PCR检测各组细胞miR-30b-5p和HELLS mRNA的表达,Western blotting检测各组细胞核蛋白抗原Ki67、HELLS蛋白的表达,CCK-8检测各组细胞增殖情况,克隆形成试验检测各组细胞克隆形成数,FACS检测各组细胞周期及凋亡率,双荧光素酶报告试验验证miR-30b-5p与HELLS的靶向关系;建立肺腺癌裸鼠移植瘤模型,分为miR-NC组、miR-30b-5p组,记录裸鼠肿瘤体积、质量,免疫组化分析2组移植瘤Ki67蛋白表达。结果显示,GEO2R和TCGA数据库分析表明,miR-30b-5p在肺腺癌组织中表达下调,且其表达水平与患者生存期、N分期、复发和预后有关(P<0.05)。HELLS在肺腺癌组织中的表达水平高于癌旁组织(P<0.05),且其表达水平与患者肿瘤TNM分期、肿瘤分级、预后和生存期有关(P<0.05)。在A549和Calu-3细胞中,与miR-NC组比较,miR-30b-5p组miR-30b-5p表达量、G0/G1期细胞数、细胞凋亡率增加(P<0.05),细胞活力、克隆形成数、S期细胞数、HELLS mRNA水平及Ki67、HELLS蛋白水平显著降低(P<0.05);与miR-30b-5p组比较,miR-30b-5p+HELLS组G0/G1期细胞数、细胞凋亡率降低(P<0.05),细胞活力、克隆形成数、S期细胞数及Ki67、HELLS蛋白水平增加(P<0.05)。双荧光素酶报告试验表明,miR-30b-5p可靶向调控HELLS。与miR-NC组比较,miR-30b-5p组裸鼠移植瘤体积、质量及Ki67水平降低(P<0.05)。该研究提示,miR-30b-5p可靶向负调控HELLS的表达,抑制肺腺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 微小RNA-30b-5p 淋巴样特异性解旋酶 肺腺癌细胞 增殖 凋亡
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