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益气活血化痰方作用于巨噬细胞外泌体miRNA-let-7-5p/TAB2信号通路抗动脉粥样硬化的实验研究 被引量：7
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作者 黄宇 赵汉君 +5 位作者 苏立杰 陈婕 阮小芬 姚轶立 王肖龙 薛金贵 《中西医结合心脑血管病杂志》 2022年第5期835-840,共6页
目的通过验证巨噬细胞外泌体miRNA-let-7-5p/TAB2的信号通路,探寻益气活血化痰方抗动脉粥样硬化(AS)的分子机制,为益气活血化痰方抗AS提供依据。方法小鼠巨噬细胞RAW 264.7培养与构建AS模型细胞并分组;巨噬细胞外泌体的提取;免疫印迹法(... 目的通过验证巨噬细胞外泌体miRNA-let-7-5p/TAB2的信号通路,探寻益气活血化痰方抗动脉粥样硬化(AS)的分子机制,为益气活血化痰方抗AS提供依据。方法小鼠巨噬细胞RAW 264.7培养与构建AS模型细胞并分组;巨噬细胞外泌体的提取;免疫印迹法(Western Blot)测定外泌体标记表达,评价外泌体的质量;提取总RNA,反转录,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miRNA表达;双荧光素酶报告基因检测实验分析miRNA-let-7-5p与预测的靶向基因之间的结合关系;益气活血化痰方干预过的小鼠大动脉组织芯片进行比对,寻找差异性基因。结果①外泌体的鉴定:对照组(RAW264.7+磷酸缓冲盐溶液)与AS模型组细胞上清液中CD_(61)与CD_(81)几乎没有表达,而对照组(RAW264.7+磷酸缓冲盐溶液)与AS模型组提取的外泌体中CD_(61)与CD_(81)均高表达,表明外泌体提取成功。②外泌体微小RNA(miRNA)qPCR Array与生物信息学分析:检索3个与AS相关的数据库,有12个miRNA共存在于这3个数据库。③通过芯片分析这12个miRNA在外泌体中的表达,与对照组相比,外泌体组有4个miRNA(miRNA-885、miRNA-21、miRNA-451与miRNA-let-7-5p)表达异常。④外泌体与主动脉内皮细胞(HAEC)共培育后,RT-qPCR检测miRNA表达,与HAEC组相比,只有miRNA-let-7-5p在外泌体与HAEC共培养组中显著表达。⑤生物信息学分析差异miRNA-let-7-5p调控的靶向基因;应用双荧光素酶报告基因实验分析验证miRNA-let-7-5p与预测的靶向基因之间的结合关系,发现TAB2为miRNA-let-7-5p的靶基因。在HAEC中,过表达miRNA-let-7-5p抑制了TAB2的表达。通过查找益气活血化痰方干预过的小鼠大动脉组织芯片,发现miRNA-let-7-5p和TAB2均为差异性基因。结论益气活血化痰方可能通过作用于巨噬细胞外泌体miRNA-let-7-5p/TAB2的信号通路发挥抗AS作用。 展开更多
关键词 动脉粥样硬化 益气活血化痰方 外泌体 mirna-let-7-5p TAB2 实验研究
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hsa-let-7b-5p靶向ΔNp63抑制HaCaT细胞的增殖、迁移和侵袭 被引量：1
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作者 李敏 丁毅 +4 位作者 郭琼 塔依尔·吐尔松 张美林 陈龙 冯树梅 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2020年第4期333-338,共6页
目的研究在人表皮细胞中hsa-let-7b-5p的作用和其对ΔNp63表达变化的影响,探讨hsa-let-7b-5p如何影响人表皮细胞的生物功能。方法人角质形成细胞株(HaCaT)分别转染hsa-let-7b-5p mimic NC、hsa-let-7b-5p mimic、hsa-let-7b-5p inhibito... 目的研究在人表皮细胞中hsa-let-7b-5p的作用和其对ΔNp63表达变化的影响,探讨hsa-let-7b-5p如何影响人表皮细胞的生物功能。方法人角质形成细胞株(HaCaT)分别转染hsa-let-7b-5p mimic NC、hsa-let-7b-5p mimic、hsa-let-7b-5p inhibitor和hsa-let-7b-5p inhibitor NC,通过CCK8检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移和细胞侵袭,利用miRcode网站和RNAhybrid网站预测p63和hsa-let-7b-5p结合,利用实时荧光定量PCR检测hsa-let-7b-5p及p63表达情况。结果hsa-let-7b-5p的高表达对HaCaT细胞的增殖、迁移和侵袭均有抑制作用,hsa-let-7b-5p表达的抑制则促进了HaCaT细胞的增殖、迁移和侵袭。通过网站预测发现hsa-let-7b-5p可与对皮肤表皮细胞有重要作用的p63结合;实时定量PCR分析发现hsa-let-7b-5p影响p63的表达。结论hsa-let-7b-5p可能通过靶向p63 mRNA水平而在人表皮细胞中发挥作用。 展开更多
关键词 mirna let-7b-5p ΔNp63 细胞增殖 细胞迁移 细胞侵袭
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