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胡椒碱对帕金森痴呆模型小鼠小肠部位的自噬作用机制研究 被引量：8
1
作者 黄丽平 钟晓琴 +2 位作者 罗青 张芹欣 邓敏贞 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第21期5238-5247,共10页
该文旨在研究胡椒碱对帕金森痴呆(Parkinson′s disease with dementia,PDD)模型小鼠小肠部位的作用机制。将96只无特定病原体级别的雄性C57BL/6小鼠随机分为8组:正常组,模型组,自噬抑制剂组(6-氨基-3-甲基嘌呤,3MA,30 mg·kg^-1),... 该文旨在研究胡椒碱对帕金森痴呆(Parkinson′s disease with dementia,PDD)模型小鼠小肠部位的作用机制。将96只无特定病原体级别的雄性C57BL/6小鼠随机分为8组:正常组,模型组,自噬抑制剂组(6-氨基-3-甲基嘌呤,3MA,30 mg·kg^-1),自噬激活剂组(雷帕霉素,1 mg·kg^-1),胡椒碱低、中、高剂量组(10,20,40 mg·kg^-1)和美多巴组(112.5 mg·kg^-1)。除正常组外,其他各组小鼠均皮下注射利血平(0.1 mg·kg^-1),每48 h给药1次,持续40 d。此外,在给药第20天时,除正常组外,其余各组小鼠均再进行双侧颈总动脉阻断术,最终制备为PDD模型。同时,各组均给予相对应的药物治疗,每天1次,持续40 d。末次给药结束后,采用自主活动试验和热板试验观察小鼠的行为学变化;采用免疫组化法检测小肠组织中α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)和酪氨酸羟化酶(tyrosinehydroxylase,TH)表达;免疫荧光法检测小肠组织中beclin-1、微管相关蛋白轻链3B(microtubule-associated protein 1 light chain 3B,LC3B)和p62表达;苏木精-伊红染色法观察各组小肠组织的病理形态;酶联免疫吸附法检测小鼠组织β淀粉样蛋白前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)、磷酸化tau蛋白(phospho tauprotein,p-tau)、乙酰胆碱转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应法检测小肠组织α-syn,TH,beclin-1,微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)和p62的mRNA及mmu-miR-99a-5p表达。结果发现,与模型组比较,3MA组、胡椒碱各剂量组和美多巴组的活动次数、ChAT、TH和p62表达显著增加(P<0.05),3MA组、胡椒碱各剂量组和美多巴组的首次舔足时间缩短,APP,p-tau,IL-6,TNF-α,α-syn,beclin-1,LC3B和mmu-miR-99a-5p表达显著减少(P<0.05),雷帕霉素组的活动次数、ChAT、TH和p62表达显著减少(P<0.05),雷帕霉素组的APP,p-t 展开更多
关键词 胡椒碱 帕金森痴呆 自噬 炎症 mirna-99a Α-突触核蛋白
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苏木乙酸乙酯提取液靶向调控miRNA-99a抑制动脉粥样硬化的作用机制研究 被引量：8
2
作者 于玲 曹丽娟 +1 位作者 孙静 周亚滨 《中国中医急症》 2019年第4期585-589,共5页
目的研究苏木乙酸乙酯提取液(SAEE)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖、凋亡的机制及miRNA-99a在其中的可能作用。方法 ox-LDL诱导VSMC模型,分别将SAEE(200μg/mL)、miRNA-99a模拟剂、miRNA-99a抑制剂作用于... 目的研究苏木乙酸乙酯提取液(SAEE)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖、凋亡的机制及miRNA-99a在其中的可能作用。方法 ox-LDL诱导VSMC模型,分别将SAEE(200μg/mL)、miRNA-99a模拟剂、miRNA-99a抑制剂作用于细胞。采用MTT法检测各组VSMC的增殖,流式细胞学检测其凋亡水平,Western blotting法检测细胞中Ki-67、PCNA、Bax、Bcl-2、MMP-1、TIMP-1蛋白的表达,RT-PCR检测细胞中miRNA-99a的表达。结果与空白组相比,ox-LDL能显著增加VSMC细胞增殖、晚期凋亡和总凋亡率,上调细胞中Ki-67、PCNA、Bax、MMP-1蛋白的表达及Bax/Bcl-2、MMP-1/TIMP-1的比值,下调Bcl-2、TIMP-1蛋白和miRNA-99a的表达,差异均具有显著统计学意义(P <0.01);SAEE能够抑制VSMC细胞增殖、晚期凋亡和总凋亡率,上调Bcl-2、TIMP-1蛋白和mi R-99a的表达,下调细胞中Ki-67、PCNA、Bax、MMP-1蛋白的表达及Bax/Bcl-2、MMP-1/TIMP-1的比值,与模型组比较,差异均具有统计学意义(P <0.01)。结论 SAEE能够通过上调细胞中miRNA-99a的表达,抑制VSMC细胞增殖、凋亡和细胞外基质的降解,促进斑块的稳定和防止纤维帽的破裂,发挥抗动脉粥样硬化的作用。 展开更多
关键词 动脉粥样硬化 苏木乙酸乙酯提取液 血管平滑肌细胞 增殖 凋亡 mirna-99a 大鼠
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腺病毒介导microRNA-99a过表达抑制肝癌细胞生长 被引量：4
3
作者 张敬磊 金华君 +5 位作者 刘辉 吕赛群 杨远 傅思源 钱其军 周伟平 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期267-271,共5页
目的:利用腺病毒介导microrRNA-99a(miR-99a)的过表达,观察miR-99a对肝癌细胞生长的抑制作用,探讨一种腺病毒介导miRNA治疗肿瘤的新方法。方法:qRT-PCR检测正常肝细胞系L-02和肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721、Hep3B和Huh7细胞中miR-99a的表... 目的:利用腺病毒介导microrRNA-99a(miR-99a)的过表达,观察miR-99a对肝癌细胞生长的抑制作用,探讨一种腺病毒介导miRNA治疗肿瘤的新方法。方法:qRT-PCR检测正常肝细胞系L-02和肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721、Hep3B和Huh7细胞中miR-99a的表达,构建含miR-99a的重组5型腺病毒Ad5-miR-99a。用空载腺病毒Ad-blank和Ad5-miR-99a分别感染Huh7细胞,MTT法和集落形成实验检测miR-99a过表达对Huh7细胞生长的抑制作用。结果:与正常肝细胞L02和其他肝癌细胞相比,miR-99a在肝癌Huh7细胞中表达量相对最低(P<0.01)。成功构建重组腺病毒Ad5-miR-99a,Ad5-miR-99a感染Huh7细胞后,miR-99a可在Huh7细胞中稳定高表达。集落形成实验和MTT实验显示,相对于Ad-blank组,Ad5-miR-99a可显著抑制Huh7细胞的生长和集落形成(P<0.01)。结论:成功构建重组腺病毒Ad5-miR-99a,miR-99a能有效抑制肝癌细胞的增殖,Ad5-miR-99a有可能成为治疗肝癌的新药物。 展开更多
关键词 mirna-99a 5型腺病毒 肝细胞癌 靶向基因治疗
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miR-99a抑制物对骨肉瘤细胞生物行为学的影响 被引量：1
4
作者 谢远龙 孙文超 +2 位作者 肖凌飞 邓洲铭 蔡林 《武汉大学学报（医学版）》 CAS 2018年第1期36-41,共6页
目的:探索miR-99a在骨肉瘤中的表达情况及其对骨肉瘤细胞生物学行为特性的影响。方法:收集7例骨肉瘤组织及瘤旁骨组织,RT-PCR检测并比较miR-99a表达情况;RT-PCR技术检测miR-99a在骨肉瘤细胞系143B、MG-63和U2OS中的相对表达量,以人成骨... 目的:探索miR-99a在骨肉瘤中的表达情况及其对骨肉瘤细胞生物学行为特性的影响。方法:收集7例骨肉瘤组织及瘤旁骨组织,RT-PCR检测并比较miR-99a表达情况;RT-PCR技术检测miR-99a在骨肉瘤细胞系143B、MG-63和U2OS中的相对表达量,以人成骨细胞系hFOB1.19作为对照比较;RT-PCR检测hepG2、lovo、A549和MCF-7中的miR-99a相对表达量,以143B作对照比较。培养人骨肉瘤细胞系143B,瞬时转染miR-99ainhibitor后,CCK-8检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,划痕试验检测细胞迁移,Transwell小室法检测细胞侵袭,Western Blot检测RECK、MMP-2、MMP-9蛋白的表达情况。结果:miR-99a在7例骨肉瘤组织中的相对表达量(0.81±0.06)要明显高于瘤旁骨组织(0.48±0.06)(P<0.01)。3组骨肉瘤细胞系miR-99a表达量均高于人成骨细胞hFOB1.19,差异有统计学意义(P<0.01);骨肉瘤细胞系中miR-99a相对表达明显高于四种非骨肉瘤细胞系(P<0.05)。miR-99ainhibitor转染组细胞增殖速率显著减慢,低于inhibitor-NC组和空白组(P<0.05);转染组早期凋亡和晚期凋亡均未明显增加(P>0.05);转染组细胞迁移能力明显受到抑制;转染组143B细胞穿过小室底膜的数目明显低于inhibitor-NC组和空白组(P<0.05);转染组RECK蛋白表达上调,MMP-2和MMP-9蛋白表达下调。结论:miR-99a在骨肉瘤组织和细胞系中呈现高表达,下调miR-99a能抑制骨肉瘤细胞系143B增殖、侵袭和转移能力,其机制可能是通过调控RECK/MMP-2蛋白表达而实现的。 展开更多
关键词 骨肉瘤 微小RNA-99a 侵袭转移 回复引导半胱氨酸丰富蛋白 基质金属蛋白酶
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长链非编码RNA UCA1与miRNA-99b在膀胱癌细胞株和膀胱癌组织表达的相关性分析 被引量：7
5
作者 谢小娟 潘晶晶 +2 位作者 侯慧莲 李旭 陈葳 《陕西医学杂志》 CAS 2015年第10期1278-1280,共3页
目的:验证LncRNA UCA1与miRNA-99b的相关性。方法:采用荧光定量PCR法检测UCA1和miRNA-99b在过表达和敲低表达UCA1的膀胱癌细胞、膀胱癌组织中的表达。结果:在敲低UCA1表达的膀胱癌细胞5637中,UCA1表达下调60%,而miRNA-99b的表达上调250%... 目的:验证LncRNA UCA1与miRNA-99b的相关性。方法:采用荧光定量PCR法检测UCA1和miRNA-99b在过表达和敲低表达UCA1的膀胱癌细胞、膀胱癌组织中的表达。结果:在敲低UCA1表达的膀胱癌细胞5637中,UCA1表达下调60%,而miRNA-99b的表达上调250%;在过表达UCA1的膀胱癌细胞UMUC2中,UCA1表达上调410%,而miRNA-99b的表达下调60%;UCA1在膀胱癌中的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05),而miRNA-99b在膀胱癌中的表达水平明显低于癌旁组织(P<0.05);UCA1与miRNA-99b在膀胱癌组织中的表达呈负相关(R=-0.502,P<0.05)。结论:UCA1负向调节miRNA-99b的表达,但是它对miRNA-99b的调节在膀胱癌发生发展中的作用机制还需深入研究。 展开更多
关键词 膀胱肿瘤 RNA 长链非编码 基因表达调控 肿瘤 UCA1 mirna-99b
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莫西沙星联合卷曲霉素治疗耐多药肺结核患者的效果
6
作者 罗兰裕 《中外医学研究》 2023年第35期17-21,共5页
目的:观察莫西沙星联合卷曲霉素对耐多药肺结核患者的效果。方法:选取2020年3月—2023年1月龙岩市第二医院收治的80例耐多药肺结核患者,按照随机数表法分为研究组和对照组,各40例。对照组采用卷曲霉素治疗,研究组在对照组的基础上联用... 目的:观察莫西沙星联合卷曲霉素对耐多药肺结核患者的效果。方法:选取2020年3月—2023年1月龙岩市第二医院收治的80例耐多药肺结核患者,按照随机数表法分为研究组和对照组,各40例。对照组采用卷曲霉素治疗,研究组在对照组的基础上联用莫西沙星。比较两组的临床疗效、肺功能指标、免疫功能指标、炎症指标及临床症状改善情况。结果:研究组病灶总吸收率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组病灶空洞总闭合率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)、白细胞计数(WBC)水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后3 d,两组PCT、CRP和WBC水平均低于治疗前,且研究组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组第1秒用力呼气容积(FEV_(1))、FEV_(1)占用力肺活量(FVC)的百分比(FEV_(1)/FVC%)比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后3 d,两组FEV_(1)、FEV_(1)/FVC%均高于治疗前,且研究组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组γ干扰素(IFN-γ)、miRNA-99b、腺苷脱氨酶(ADA)水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后3 d,两组IFN-γ水平高于治疗前,miRNA-99b、ADA水平低于治疗前,且研究组IFN-γ水平高于对照组,miRNA-99b、ADA水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组日咯血量与日排痰量比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后3 d,两组日咯血量与日排痰量低于治疗前,且研究组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:莫西沙星联合卷曲霉素治疗耐多药肺结核效果较好,可有效缓解患者临床症状,抑制炎症反应,改善其肺功能和免疫功能。 展开更多
关键词 莫西沙星 卷曲霉素 耐多药肺结核 血清腺苷脱氨酶 Γ干扰素 mirna-99b
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miR-99b在新辅助化疗宫颈癌组织中的表达 被引量：3
7
作者 李连香 于翠革 +1 位作者 陈丽宏 杨晓梅 《陕西医学杂志》 CAS 2016年第10期1292-1293,1312,共3页
目的:研究miRNA-99b(miR-99b)在新辅助化疗宫颈癌组织中的表达。方法:宫颈癌患者55例分别于新辅助化疗前后收集肿瘤组织标本行micRNA的提取、反转录、实时定量PCR检测miR-99b的表达。结果:宫颈癌新辅助化疗后miRNA99b表达显著上升,与治... 目的:研究miRNA-99b(miR-99b)在新辅助化疗宫颈癌组织中的表达。方法:宫颈癌患者55例分别于新辅助化疗前后收集肿瘤组织标本行micRNA的提取、反转录、实时定量PCR检测miR-99b的表达。结果:宫颈癌新辅助化疗后miRNA99b表达显著上升,与治疗前表达比较有统计学差异(P<0.05)。结论:新辅助化疗可通过上调miRNA-99b表达,实现对宫颈癌的抑制。 展开更多
关键词 子宫颈肿瘤 基因表达调控 肿瘤 @mirna-99b
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miRNA-99b负调控mTOR抑制脑胶质瘤细胞的侵袭能力 被引量：2
8
作者 马鹏举 汲乾坤 +3 位作者 李祥生 常海刚 周文科 金保哲 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期473-479,共7页
目的研究miRNA-99b及mTOR在胶质瘤中的表达水平及其对脑胶质瘤侵袭能力的影响及机制。方法用real-time PCR法检测脑胶质瘤组织与对照脑组织中miRNA-99b及mTOR的表达。miRNA-99b模拟物与野生型或突变型mTOR 3'UTR重组载体共转染后,... 目的研究miRNA-99b及mTOR在胶质瘤中的表达水平及其对脑胶质瘤侵袭能力的影响及机制。方法用real-time PCR法检测脑胶质瘤组织与对照脑组织中miRNA-99b及mTOR的表达。miRNA-99b模拟物与野生型或突变型mTOR 3'UTR重组载体共转染后,应用荧光素酶基因报告系统检测miRNA-99b是否与mTOR基因3'UTR结合。应用real-time PCR法和Western blot检测miRNA-99b模拟物转染U251细胞后,细胞中miRNA-99b、mTOR mRNA和mTOR蛋白的表达,Transwell法检测细胞的侵袭能力。mTOR质粒转染U251细胞后,检测细胞中miRNA-99b的表达及细胞的侵袭能力的变化。统计学分析miRNA-99b表达水平与胶质瘤及预后的相关性。结果脑胶质瘤组织中miRNA-99b表达明显低于对照脑组织,mTOR mRNA表达明显高于对照脑组织;miRNA-99b模拟物和野生型mTOR 3'UTR重组载体共转染的U251细胞的荧光强度明显降低。miRNA-99b模拟物转染后,U251细胞中miRNA-99b的表达水平上升,而mTOR蛋白及mRNA的表达水平下降,U251细胞及侵袭能力下降。改变mTOR表达后,U251细胞中miRNA-99b的表达水平无明显变化,升高mTOR表达能够恢复因miRNA-99b抑制的细胞侵袭能力。Kaplan-Meier生存分析及Log-rank检验显示,低表达miRNA-99b患者的总生存期明显低于高表达组。结论过表达miRNA-99b可能通过靶向调控mTOR抑制脑胶质瘤细胞的侵袭能力,miRNA-99b可作为脑胶质瘤的治疗靶点。 展开更多
关键词 mirna-99b 哺乳动物雷帕霉素靶分子 脑胶质瘤 侵袭 预后 治疗靶点
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卡介苗促进人树突细胞miRNA-99b调控CD^4+初始T淋巴细胞分化为Th17/Treg失衡 被引量：1
9
作者 甄利波 陈园园 +3 位作者 邱美华 金春 陈凌燕 朱敏 《中华临床感染病杂志》 2018年第6期441-446,共6页
目的探究牛型结核分枝杆菌减毒活菌-卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin vaccine,BCG)感染人树突细胞(Dendritic cells,DCs)对新生儿脐血CD4+初始T淋巴细胞分化的作用。方法使用BCG感染体外培养的人DCs,然后与新生儿脐血CD^4+初始T淋巴细... 目的探究牛型结核分枝杆菌减毒活菌-卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin vaccine,BCG)感染人树突细胞(Dendritic cells,DCs)对新生儿脐血CD4+初始T淋巴细胞分化的作用。方法使用BCG感染体外培养的人DCs,然后与新生儿脐血CD^4+初始T淋巴细胞共培养,采用qRT-PCR检测DCs中的miRNA-99b表达水平及CD^4+T淋巴细胞中的Foxp3、ROR-γt、IFN-γ及IL-10基因转录水平。利用miRNA-99b反义寡核苷酸转染DCs,与新生儿脐血CD4+初始T淋巴细胞共培养后,再次检测CD^4+T淋巴细胞相关基因转录水平。采用SPSS 15.0对数据进行分析。结果BCG感染的DCs中miRNA-99b基因转录水平明显高于未感染BCG的DCs中的转录水平(t=7.06,P<0.05)。与感染BCG的DCs共培养的CD^4+T淋巴细胞中的IFN-γ基因[(45.61±4.46)比(3.54±1.73),t=32.32,P<0.01]、IL-10基因[(4.17±1.06)比(1.26±0.67),t=2.24,P<0.05]转录水平明显高于与未感染BCG的DCs共培养的CD^4+T淋巴细胞,而ROR-γt基因转录水平低于与未感染BCG的DCs共培养的CD^4+T淋巴细胞[(0.08±0.02)比(0.63±0.10),t=0.42,P<0.01]。与转染NC-siRNA的DCs共培养的CD^4+初始T细胞相比,阻断DCs中miRNA-99b的表达后,共培养的CD^4+初始T淋巴细胞Foxp3基因[(0.12±0.01)比(1.57±0.90),t=1.06,P<0.05]、IFN-γ基因[(0.03±0.01)比(0.64±0.35),t=0.44,P<0.05]、IL-10基因[(0.03±0.01)比(0.76±0.09),t=0.54,P<0.01]表达均降低,ROR-γt基因表达增加[(17.03±5.51)比(1.32±0.14),t=11.54,P<0.01]。结论BCG通过调控DCs中miRNA-99b的表达进而诱导初始CD^4+T淋巴细胞分化为Th17/Treg的失衡,导致感染的发生、发展。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 卡介苗 树突细胞 T淋巴细胞 mirna-99b
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卡介苗感染人树突状细胞对miRNA-99b表达和Th17/Treg分化的影响 被引量：1
10
作者 甄利波 陈园园 +4 位作者 邱美华 金春 陈凌燕 韩益明 朱敏 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1767-1771,共5页
目的 探讨牛型分枝杆菌减毒活菌—卡介苗(BCG)感染对人树突状细胞(DCs)microRNA-99b(miRNA-99b)表达的影响及对新生儿脐血CD4+初始T淋巴细胞分化为Th17/Treg的作用。方法 BCG感染体外培养的人树突状细胞,然后与新生儿脐血CD4+初始T淋巴... 目的 探讨牛型分枝杆菌减毒活菌—卡介苗(BCG)感染对人树突状细胞(DCs)microRNA-99b(miRNA-99b)表达的影响及对新生儿脐血CD4+初始T淋巴细胞分化为Th17/Treg的作用。方法 BCG感染体外培养的人树突状细胞,然后与新生儿脐血CD4+初始T淋巴细胞混合培养,qRT-PCR观察人树突状细胞miRNA-99b的表达变化,qRT-PCR检测CD4+T淋巴细胞Foxp3、ROR-γt、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-10(IL-10)基因转录水平,观察CD4+T淋巴细胞分化亚型的改变;ELISA法检测培养上清INF-γ、IL-17和IL-23表达水平。结果 BCG感染后,人树突状细胞miRNA-99b基因表达增加(P<0.001);CD4+T淋巴细胞IFN-γ、IL-10基因表达增加(P<0.05),ROR-γt基因表达降低(P<0.05),Foxp3基因转录增加,但差异无统计学意义;感染组培养上清中INF-γ表达水平增加(P<0.001),IL-17和IL-23表达水平均有一定的增加,但差异无统计学意义。结论 结核感染可能通过影响树突状细胞miRNA-99b的表达进而诱导初始CD4+T淋巴细胞分化为Th17/Treg的失衡参与结核病的发病过程。 展开更多
关键词 结核 免疫 树突状细胞 T淋巴细胞 mirna-99b
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