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miRNA let-7b修饰的骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后脊髓NF-200、GFAP表达的影响 被引量：9
1
作者 徐玉生 崔浩 +4 位作者 张松 王培松 朱海洋 钟斌 苗金红 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2015年第3期400-403,共4页
目的:通过观察miRNA let-7b修饰的骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对脊髓损伤大鼠的运动功能恢复的作用,探讨miRNA let-7b在损伤脊髓修复中的作用和机制。方法:60只成年SD大鼠分为对照组、BMSCs组、miRNA组,每组20只。采用改良Allen's... 目的:通过观察miRNA let-7b修饰的骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对脊髓损伤大鼠的运动功能恢复的作用,探讨miRNA let-7b在损伤脊髓修复中的作用和机制。方法:60只成年SD大鼠分为对照组、BMSCs组、miRNA组,每组20只。采用改良Allen's法制备脊髓损伤模型。造模后1周,BMSCs组行BMSCs移植,miRNA组移植miRNA let-7b慢病毒载体感染的BMSCs,对照组注射生理盐水。移植后第3天至8周,按BBB标准量表对大鼠后肢运动功能进行评分,用免疫组化方法检测脊髓中神经丝蛋白-200(NF-200)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果:实验时间内,各组大鼠BBB评分和脊髓NF-200表达持续升高;不同时间点BBB评分和脊髓NF-200表达以miRNA组最高,BMSCs组次之,对照组最低(P<0.05)。移植后各组脊髓GFAP表达均呈持续性增高,各时间点GFAP阳性表达面积以对照组最大,BMSCs次之,miRNA组最小(P<0.05)。结论:miRNA let-7b可能通过促进BMSCs分化为神经元样细胞、抑制脊髓损伤后反应性胶质细胞的增生及胶质瘢痕形成等机制促进损伤后的神经功能恢复。 展开更多
关键词 mirna let-7b 骨髓间充质干细胞 脊髓损伤 细胞移植 大鼠
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MicroRNA Let-7b介导甲型流感突变型PB1重组病毒的构建 被引量：1
2
作者 谭鸣鸣 沈小玥 +2 位作者 孙文逵 夏迪 施毅 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2015年第7期683-687,共5页
目的疫苗是预防流感所致疾病的最有效方法,MicroRNA介导的基因沉默机制为构建新型疫苗提供了新思路。文中旨在构建包含装载有miRNA Let-7b结合靶位PB1基因的甲型流感重组病毒。方法比对A/Nanjing/108/2009H1N1的PA、PB1、PB2与let-7b的... 目的疫苗是预防流感所致疾病的最有效方法,MicroRNA介导的基因沉默机制为构建新型疫苗提供了新思路。文中旨在构建包含装载有miRNA Let-7b结合靶位PB1基因的甲型流感重组病毒。方法比对A/Nanjing/108/2009H1N1的PA、PB1、PB2与let-7b的靶序列选定PB1基因为最优序列后,通过基因突变,插入Let-7b的结合靶位;构建p DP2000重组表达载体,设计p DP-mu-PB1,同时设计对照组p DP-sclb-PB1,并与其余7个质粒共转染MDCK细胞和293T细胞拯救病毒;留取上清接种鸡胚尿囊腔,血凝法检测病毒,TCID50检测病毒滴度;提取病毒RNA,采用RT-PCR扩增病毒c DNA,通过琼脂糖凝胶电泳和核苷酸序列分析鉴定病毒。结果选择PB1片段最优序列(位置83 bp-107 bp),突变片段改变了3个氨基酸,同时有3个碱基不能与Let-7b靶序列配对;酶切鉴定重组质粒构建正确;重组病毒miRT(miRNA target elements)-H1N1和scramble(scbl)-H1N1的血凝效价分别为1∶32和1∶64,病毒滴度为4.68×105TCID50/m L和7.94×104TCID50/m L;测序确认突变病毒包含目的片段。结论构建成功重组病毒株,为进一步的毒力评估实验奠定了基础。 展开更多
关键词 H1N1流感 mirna let-7b 基因重组 反向遗传学
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hsa-let-7b-5p靶向ΔNp63抑制HaCaT细胞的增殖、迁移和侵袭 被引量：1
3
作者 李敏 丁毅 +4 位作者 郭琼 塔依尔·吐尔松 张美林 陈龙 冯树梅 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2020年第4期333-338,共6页
目的研究在人表皮细胞中hsa-let-7b-5p的作用和其对ΔNp63表达变化的影响,探讨hsa-let-7b-5p如何影响人表皮细胞的生物功能。方法人角质形成细胞株(HaCaT)分别转染hsa-let-7b-5p mimic NC、hsa-let-7b-5p mimic、hsa-let-7b-5p inhibito... 目的研究在人表皮细胞中hsa-let-7b-5p的作用和其对ΔNp63表达变化的影响,探讨hsa-let-7b-5p如何影响人表皮细胞的生物功能。方法人角质形成细胞株(HaCaT)分别转染hsa-let-7b-5p mimic NC、hsa-let-7b-5p mimic、hsa-let-7b-5p inhibitor和hsa-let-7b-5p inhibitor NC,通过CCK8检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移和细胞侵袭,利用miRcode网站和RNAhybrid网站预测p63和hsa-let-7b-5p结合,利用实时荧光定量PCR检测hsa-let-7b-5p及p63表达情况。结果hsa-let-7b-5p的高表达对HaCaT细胞的增殖、迁移和侵袭均有抑制作用,hsa-let-7b-5p表达的抑制则促进了HaCaT细胞的增殖、迁移和侵袭。通过网站预测发现hsa-let-7b-5p可与对皮肤表皮细胞有重要作用的p63结合;实时定量PCR分析发现hsa-let-7b-5p影响p63的表达。结论hsa-let-7b-5p可能通过靶向p63 mRNA水平而在人表皮细胞中发挥作用。 展开更多
关键词 mirna let-7b-5p ΔNP63 细胞增殖 细胞迁移 细胞侵袭
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miRNA-Let-7b调控胃癌顺铂耐药性的机制研究 被引量：2
4
作者 韩啸 张竞竞 韩正全 《中国卫生标准管理》 2017年第6期64-66,共3页
目的探究miRNA-Let-7b调控胃癌细胞顺铂化疗耐药的分子机理。方法将胃癌细胞系SGC-7901耐药株作为研究对象,采用RT-PCR法对miRNA-Let-7b在胃癌细胞中的表达水平进行检测,对细胞存活情况、转染前后细胞增殖情况及凋亡情况进行综合分析。... 目的探究miRNA-Let-7b调控胃癌细胞顺铂化疗耐药的分子机理。方法将胃癌细胞系SGC-7901耐药株作为研究对象,采用RT-PCR法对miRNA-Let-7b在胃癌细胞中的表达水平进行检测,对细胞存活情况、转染前后细胞增殖情况及凋亡情况进行综合分析。结果 SGC-7901/DDP细胞miRNA-Let-7b表达水平是SGC-7901的(27.37±2.84)%(P<0.05),差异有统计学意义;SGC-7901转染Let-7b inhibitor后对顺铂的敏感性降低(P<0.05),差异有统计学意义,SGC-7901转染miRNA-Let-7b minmic后对顺铂的敏感性则得到了增强(P<0.05);SGC-7901转染miRNA-Let-7b mimic后,细胞凋亡率增强,高于对照组(P<0.05),差异有统计学意义。结论miRNA-Let-7b表达水平的降低能够在一定程度上加快胃癌细胞增殖,抑制细胞凋亡,使胃癌细胞对顺铂敏感度降低,为临床抗癌药物的研发提供参考。 展开更多
关键词 mirna-let-7b 胃癌细胞 顺铂 耐药性 分子机理
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