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靶向EGFR的miR-7-5p对人乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响 被引量：5
1
作者 林维佳 郑琳 +1 位作者 代建波 许澍阳 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2015年第15期1176-1179,共4页
目的验证靶向表皮生长因子(epidermal growth factor receptor,EGFR)的微RNA-7-5p(microRNA-7-5p,miR-7-5p)对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖和侵袭能力的影响。方法应用双荧光素酶检测试剂验证EGFR为miR-7-5p的下游靶基因;在人乳腺癌细... 目的验证靶向表皮生长因子(epidermal growth factor receptor,EGFR)的微RNA-7-5p(microRNA-7-5p,miR-7-5p)对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖和侵袭能力的影响。方法应用双荧光素酶检测试剂验证EGFR为miR-7-5p的下游靶基因;在人乳腺癌细胞MDA-MB-231中转染miR-7-5p阴性对照质粒和pMIR-report-3′UTR/3′UTRm质粒,观察细胞中EGFR的mRNA水平和蛋白水平的表达变化;通过CCK-8实验,观察转染pMIR-report-3′UTR/3′UTRm质粒后细胞增殖能力的变化;利用流式细胞术检测转染pMIR-report-3′UTR/3′UTRm质粒后MDA-MB-231细胞周期的改变。结果与对照组相比,miR-7-5p可显著降低非突变载体的相对荧光素酶活性,χ2=32.6,P<0.01。miR-7-5p靶向EGFR可使其mRNA表达水平比空白对照下调81.2%,χ2=136.1,P<0.05;比阴性对照下调79.1%,χ2=130.6,P<0.05。其蛋白水平则比空白对照下调71.0%,χ2=110.1,P<0.05;比阴性对照下调70.0%,χ2=107.7,P<0.05。过表达miR-7-5p第3天后,MDA-MB-231细胞的增殖能力比空白对照组降低29.3%,χ2=33.9,P<0.05;比阴性对照组降低27.5%,χ2=32.2,P<0.05。而细胞周期则表现为G0/G1期阻滞。相比空白对照组,实验组细胞的转移能力降低了约48.9%,χ2=64.9,P<0.05;相比阴性对照组则降低了50.9%,χ2=68.5,P<0.05。侵袭能力相比空白对照组降低了约45.7%,χ2=59.8,P<0.05;相比阴性对照组则降低了43.7%,χ2=56.4,P<0.05。结论靶向EGFR的miR-7-5p可抑制人乳腺癌细胞的增殖能力和侵袭能力。 展开更多
关键词 mir-7-5p EGFR 乳腺癌 细胞增殖 侵袭
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miR-7-5p对氢醌诱导TK6细胞损伤作用
2
作者 杨慧 陈玉婷 +4 位作者 梁海荣 罗皓 高羽亭 翟璐 唐焕文 《中国职业医学》 CAS 北大核心 2017年第3期270-275,280,共7页
目的通过慢病毒技术构建miR-7-5p稳定过表达的人淋巴母细胞TK6细胞株,探讨miR-7-5p对氢醌诱导TK6细胞损伤的作用机制。方法 (1)构建miR-7-5p过表达慢病毒载体,转染TK6细胞,经嘌呤霉素筛选获得miR-7-5p稳定过表达TK6细胞株(TK6-miR-7-5p... 目的通过慢病毒技术构建miR-7-5p稳定过表达的人淋巴母细胞TK6细胞株,探讨miR-7-5p对氢醌诱导TK6细胞损伤的作用机制。方法 (1)构建miR-7-5p过表达慢病毒载体,转染TK6细胞,经嘌呤霉素筛选获得miR-7-5p稳定过表达TK6细胞株(TK6-miR-7-5p细胞)和阴性空载体对照TK6细胞(TK6-NC细胞),采用实时荧光定量聚合酶链式反应鉴定构建效果。(2)以终浓度为0和40μmol/L的氢醌分别处理TK6细胞、TK6-NC细胞和TK6-miR-7-5p细胞48 h后,采用CCK-8法检测细胞存活率,采用流式细胞术检测细胞早期凋亡率;采用免疫印迹法检测以终浓度为40μmol/L的氢醌处理的3种细胞中PARP-1和BRCA1蛋白的相对表达水平。结果 (1)成功筛选出稳定过表达miR-7-5p的TK6细胞株;与正常TK6细胞比较,TK6-miR-7-5p细胞中miR-7-5p的相对表达水平升高约17倍(P<0.01),但细胞形态未出现明显改变。(2)予浓度为40μmol/L氢醌处理3种细胞后,与正常TK6细胞和TK6-NC细胞比较,TK6-miR-7-5p细胞存活率下降(P<0.01),细胞早期凋亡率增加(P<0.01),PARP-1和BRCA1蛋白相对表达水平均下降(P<0.05)。结论 miR-7-5p可能通过抑制PARP-1和BRCA1的DNA损伤修复能力而导致氢醌诱导TK6细胞早期凋亡增加。 展开更多
关键词 氢醌 人淋巴母细胞 mir-7-5p 细胞损伤
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