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题名斑马鱼miR-196a-1基因敲除品系的构建
被引量：3
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作者
曾婷
付贵芳
谢缤灵
杜涵
谢华平
印遇龙
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机构
动物肠道功能调控湖南省重点实验室
湖南师范大学生命科学学院
淡水鱼类发育生物学国家重点实验室
中国科学院亚热带农业生态研究所
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出处
《激光生物学报》
CAS
2020年第2期176-182,共7页
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基金
国家自然科学基金项目(31970504)
湖湘高层次人才聚集工程项目(2018RS3069)
湖南省科技领军人才项目(2019RS3022)。
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文摘
microRNA(miRNA)是一类内生的、长度约为19~23个核苷酸的非编码RNA,通过影响mRNA的稳定性和翻译,来参与基因表达的转录后调控。生物信息学分析表明该基因在各个物种中高度保守。为了阐明该基因在肠道发育中的作用,本文利用Cloning free CRISPR/Cas9基因编辑技术构建miR-196a-1基因敲除的斑马鱼品系。首先通过分析软件筛选出斑马鱼miR-196a-1基因的两个敲除位点,两个敲除位点相隔132 bp,利用PCR技术扩增miR-196a-1的向导DNA,再以向导DNA为模板转录得到miR-196a-1的sgRNA,将miR-196a-1基因的sgRNA和Cas9蛋白共同注射到斑马鱼胚胎1细胞期胚胎中。斑马鱼胚胎发育到36 hpf后进行基因编辑的有效性检测,研究结果显示,miR-196a-1基因出现102 bp碱基的缺失,表明CRISPR/Cas9系统对miR-196a-1基因的敲除有效。对其F0代、F1代、F2代进行筛选,成功获得斑马鱼miR-196a-1基因敲除品系,为研究miR-196a-1在肠道发育中的作用奠定了基础。
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关键词
斑马鱼
MICRORNA
CRISPR/Cas9
mir-196a-1基因
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Keywords
zebrafish
microRNA
CRISPR/Cas9
mir-196a-1 gene
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分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
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