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miR-148a-5p参与了高蛋氨酸饮食诱导ApoE^-/-小鼠的肝细胞凋亡 被引量:5
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作者 马芳 张辉 +6 位作者 李桂忠 马胜超 沈江涌 孙磊 郝银菊 马生贤 姜怡邓 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2020年第35期5632-5637,共6页
背景:高蛋氨酸饮食可以导致ApoE^-/-小鼠发生肝损伤,微小RNA(miRNA)参与细胞存活、分化和细胞凋亡等各种细胞过程,具有重要意义。目的:探讨miR-148a-5p在高蛋氨酸饮食诱导ApoE^-/-小鼠肝细胞凋亡中的作用。方法:12只ApoE^-/-小鼠随机分... 背景:高蛋氨酸饮食可以导致ApoE^-/-小鼠发生肝损伤,微小RNA(miRNA)参与细胞存活、分化和细胞凋亡等各种细胞过程,具有重要意义。目的:探讨miR-148a-5p在高蛋氨酸饮食诱导ApoE^-/-小鼠肝细胞凋亡中的作用。方法:12只ApoE^-/-小鼠随机分为2组,每组6只,ApoE^-/-对照组为普通饮食,ApoE^-/-高蛋氨酸组为高蛋氨酸饮食。苏木精-伊红染色观察2组肝组织形态学变化;TUNEL染色观察肝细胞的凋亡情况;Western blot测定Bax、Bcl-2的表达改变;荧光定量PCR检测miR-148a-5p的表达;运用Target Scan靶基因预测软件预测miR-148a-5p的靶基因;双荧光素酶活性实验明确其靶向关系。结果与结论:①与对照组相比,ApoE^-/-高蛋氨酸组肝脏组织肝小叶结构发生明显紊乱,部分细胞呈胞浆疏松化变性,肝细胞凋亡增加,Bax的表达明显上升且Bcl-2的表达显著下降(P<0.01);②荧光定量PCR结果显示,ApoE^-/-高蛋氨酸组miR-148a-5p的表达增加(P<0.05);③靶基因预测软件提示,Bcl-2为miR-148a-5p的潜在靶基因;④双荧光素酶活性实验确定了miR-148a-5p与Bcl-2的靶向关系(P<0.05);⑤肝细胞中过表达miR-148a-5p后Bax的表达显著上升且Bcl-2的表达明显下降(P<0.01);⑥提示在高蛋氨酸饮食诱导的ApoE^-/-小鼠肝细胞中,miR-148a-5p通过负调控Bcl-2促进肝细胞凋亡,这可能是造成肝损伤的机制之一。 展开更多
关键词 mir-148a-5p BCL-2 高蛋氨酸饮食 肝细胞 凋亡 动物
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干扰miR-148a-5p对肿瘤坏死因子-α诱导血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响 被引量:1
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作者 陈愿 赵子明 +5 位作者 宋爽 崔留义 李传荣 杨晓航 沈蕾 刘乾坤 《中西医结合心脑血管病杂志》 2021年第21期3674-3678,共5页
目的探讨干扰miR-148a-5p对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的影响。方法体外培养VSMC,分为对照组、TNF-α组、TNF-α+anti-miR-NC组和TNF-α+anti-miR-148a-5p组,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检... 目的探讨干扰miR-148a-5p对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的影响。方法体外培养VSMC,分为对照组、TNF-α组、TNF-α+anti-miR-NC组和TNF-α+anti-miR-148a-5p组,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测细胞中miR-148a-5p表达水平,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测细胞中细胞核增殖抗原Ki67、上皮型钙黏附蛋白(E-cadherin)和神经型钙黏附蛋白(N-cadherin)表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-148a-5p与第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)调控关系。结果与对照组比较,TNF-α组细胞中miR-148a-5p的表达水平升高(P<0.05),G0/G1期明显降低(P<0.05),S期明显升高(P<0.05),细胞迁移数和Ki67、N-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与TNF-α+anti-miR-NC组比较,TNF-α+anti-miR-148a-5p组细胞G0/G1期明显升高(P<0.05),S期明显降低(P<0.05),细胞迁移数和Ki67、N-cadherin蛋白表达水平明显降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。双荧光素酶报告基因结果显示,miR-148a-5p可降低PTEN野生型的荧光素酶活性(P<0.05)。结论干扰miR-148a-5p表达可抑制TNF-α诱导的VSMC增殖和迁移。 展开更多
关键词 血管平滑肌细胞 mir-148a-5p 肿瘤坏死因子-Α 细胞增殖 细胞迁移 实验研究
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多组学筛选及验证lncRNA CCAT1通过调节miR-148b-3p和FGF9促进结直肠癌发生及发展机制研究 被引量:3
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作者 才层 郑超 毛睿 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2021年第9期1034-1043,共10页
目的通过生物信息学及分子生物学探讨lncRNA CCAT1对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞增殖的影响,并进一步探讨其机制。方法应用R软件和Bioconductor软件包对9例CRC样本和9例正常样本进行差异表达基因(DEGs)分析,筛选差异表达lncRNA... 目的通过生物信息学及分子生物学探讨lncRNA CCAT1对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞增殖的影响,并进一步探讨其机制。方法应用R软件和Bioconductor软件包对9例CRC样本和9例正常样本进行差异表达基因(DEGs)分析,筛选差异表达lncRNA和mRNA。进一步选择30例CRC组织及匹配的癌旁组织(2016年1月至2019年12月从新疆医科大学第一附属医院CRC外科手术中获得的标本),然后通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测CRC组织及CRC细胞中CCAT1、miR-148b-3p、FGF9的表达,采用蛋白免疫印迹试验(Western blotting)检测CRC细胞中FGF9的表达情况。细胞转染后,用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期和凋亡。采用Transwell迁移实验检测各处理组细胞迁移情况。通过双荧光素酶报告基因检测验证CCAT1与miR-148b-3p、miR-148b-3p与FGF9的靶向关系。结果与癌旁组织及人正常结直肠上皮细胞相比,CCAT1在CRC组织和细胞系中高表达且差异有统计学意义(P<0.05)。进一步分析发现,高表达CCAT1的CRC患者与低表达CCAT1的患者相比,肿瘤较大,TNM分期较晚,总生存率较低。生物学功能测定结果表明,CCAT1具有促进细胞增殖的作用。我们还发现miR-148b-3p可以作为CCAT1在CRC细胞中的作用靶点,miR-148b-3p的过表达可以有效抑制由CCAT1敲低诱导的CRC进程。此外,我们发现FGF9作为miR-148b-3p的靶点在CRC中发挥致癌作用。结论CCAT1可通过调控miR-148b-3p及其靶蛋白FGF9促进CRC细胞增殖,这将为CRC的预防及治疗提供一个有效的治疗靶点及理论依据。 展开更多
关键词 结直肠癌 CCAT1 mir-148b-5p FGF9
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PDPK13′UTR双荧光素酶报告载体的构建及与gga-miR-148a-5p的靶向验证 被引量:1
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作者 余河玲 朱师良 +1 位作者 何启牮 王彦 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第1期147-151,共5页
本试验通过构建PDPK1基因3′UTR双荧光素酶报告载体,并验证gga-miR-148a-5p与PDPK1的靶向关系。利用生物信息学软件预测gga-miR-148a-5p与PDPK1结合位点;利用PCR扩增PDPK1基因3′UTR序列,将其克隆到PGL3-CMV-LUC-MCS双荧光素酶报告基因... 本试验通过构建PDPK1基因3′UTR双荧光素酶报告载体,并验证gga-miR-148a-5p与PDPK1的靶向关系。利用生物信息学软件预测gga-miR-148a-5p与PDPK1结合位点;利用PCR扩增PDPK1基因3′UTR序列,将其克隆到PGL3-CMV-LUC-MCS双荧光素酶报告基因载体中;将gga-miR-148a-5p及阴性对照分别与野生型gga-PDPK1-WT-3′UTR双荧光素酶报告质粒共转染至293T细胞中,双荧光素酶报告系统检测各组荧光素酶活性。Targetscan、miRbase数据库预测结果显示,gga-miR-148a-5p与PDPK1基因3′UTR存在互补结合位点;酶切及测序结果表明,双荧光素酶报告载体构建成功;荧光素酶活性试验结果表明,gga-miR-148a-5p mimics能够与PDPK1基因3′UTR结合并抑制荧光素酶活性。gga-miR-148a-5p能够与PDPK1靶向性结合,PDPK1是gga-miR-148a-5p的靶基因。 展开更多
关键词 pDpK1 gga-mir-148a-5p 禽白血病 双荧光素酶报告基因检测系统
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miR-148-5p靶向H型血管调控因子Slit3的实验研究 被引量:2
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作者 陈赛楠 黄云梅 +1 位作者 林燕萍 黄美雅 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期959-965,共7页
目的 观察绝经后骨质疏松症中H型血管调控因子Slit3表达差异,进一步探讨其上游靶向调控miRNAs。方法 雌性SD大鼠随机分假手术组和模型组,Real-time PCR和免疫组化检测骨组织Slit3 mRNA和蛋白表达水平;生物信息学预测可能与Slit3-3′UTR... 目的 观察绝经后骨质疏松症中H型血管调控因子Slit3表达差异,进一步探讨其上游靶向调控miRNAs。方法 雌性SD大鼠随机分假手术组和模型组,Real-time PCR和免疫组化检测骨组织Slit3 mRNA和蛋白表达水平;生物信息学预测可能与Slit3-3′UTR互作的miRNAs,构建野生型和突变型Slit3-3′UTR重组荧光素酶报告载体,和miRNAs表达载体共转染293 T细胞,双荧光素酶报告基因测定荧光素酶活性验证miRNA对Slit3-3′UTR的靶向作用。结果 与假手术组相比,模型组Slit3 mRNA表达水平略上调和平均光密度显著上调,生物信息学预测Slit3-3′UTR与miR-148a-5p、miR-148b-5p、miR-410-3p、miR-129-5p和miR-374-5p存在碱基结合位点,野生型Slit3-3′UTR共转染miR-148b-5p荧光活性下调至空白对照组的68.91%,突变型Slit3-3′UTR共转染miR-148b-5p荧光活性未见下调。结论 Slit3可能是绝经后骨质疏松症H型血管的调控基因,miR-148b-5p与Slit3-3′UTR的靶向结合直接调控Slit3的表达水平。 展开更多
关键词 绝经后骨质疏松症 H型血管 Slit3 mir-148-5p 双荧光素酶报告基因
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