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转mgfp-5基因烟草的愈伤诱导及培养 被引量:2
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作者 王英娟 王睿劼 +2 位作者 吕亚维 张雨靖 杨泽熵 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期2061-2067,共7页
海洋软体动物贻贝(Mytilidae)足丝腺分泌的贻贝粘蛋白(mussel adhesive protein,MAP)即贻贝足丝蛋白(mussel foot protein,Mfp),不仅有水中高粘性及耐腐蚀性,而且无毒、无免疫原性,生物相容性好,其中Mfp-5粘性最强。现用的贻贝粘蛋白主... 海洋软体动物贻贝(Mytilidae)足丝腺分泌的贻贝粘蛋白(mussel adhesive protein,MAP)即贻贝足丝蛋白(mussel foot protein,Mfp),不仅有水中高粘性及耐腐蚀性,而且无毒、无免疫原性,生物相容性好,其中Mfp-5粘性最强。现用的贻贝粘蛋白主要是天然获取,但是其含量低易固化难获得,基因工程重组贻贝粘蛋白的研究刚刚开始。前期我们在烟草中表达了地中海贻贝蛋白(mytilus galloprovincialis foot protein type 5,Mgfp-5)基因,得到转mgfp-5基因烟草种子。本实验将转基因T1代种子无菌苗进行愈伤组织诱导,在附加不同浓度的2,4-D、6-BA、NAA的MS培养基上,诱导率≥90.0%,其中2,4-D 1.0 mg/L、6-BA 0.5 mg/L、NAA 0.1 mg/L时诱导率为100%;愈伤组织固/液培养过程中均以"S"型曲线生长,固体培养时12~27 d鲜质量增长率为3.73%,液体培养时间缩短6 d,在6~15 d时间内鲜质量会增加8.56~8.63倍;固/液培养的继代愈伤组织,PCR、RT-PCR及Western blotting分别检测到预期大小的电泳条带,显示了外源mgfp-5基因及Mgfp-5蛋白稳定表达。稳定表达Mgfp-5蛋白的愈伤组织,可以为获得重组蛋白Mgfp-5的原材料提供新途径,为研究植物表达贻贝粘蛋白提供参考。 展开更多
关键词 贻贝粘蛋白 mgfp-5基因 基因烟草 愈伤培养
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贻贝蛋白Mgfp-5的原核表达与纯化 被引量:2
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作者 吕玉伟 吕亚维 +3 位作者 杨泽熵 王睿劼 张雨靖 王英娟 《西北大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期390-396,共7页
贻贝(Mytilus galloprovincialis)足丝中黏附蛋白,是一种黏合强度高、生物相容性好、优质的生物黏合剂,可以应用于医学、表面化学、海洋工程等领域,其中富含DOPA(多巴,3,4-二羟基苯丙氨酸)的贻贝足丝蛋白5(Mytilus galloprovincialis fo... 贻贝(Mytilus galloprovincialis)足丝中黏附蛋白,是一种黏合强度高、生物相容性好、优质的生物黏合剂,可以应用于医学、表面化学、海洋工程等领域,其中富含DOPA(多巴,3,4-二羟基苯丙氨酸)的贻贝足丝蛋白5(Mytilus galloprovincialis foot protein type 5,Mgfp-5)显著表现出此特性。天然获取Mgfp-5含量低,易固化,纯化困难,越来越多学者尝试基因工程获得黏蛋白。文中构建重组质粒p ET28a-mgfp,在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中诱导表达出重组蛋白Mgfp-5。为得到高质量的Mgfp-5蛋白,优化了Mgfp-5蛋白诱导表达参数:菌液OD_(600)=0.8,诱导剂异丙基-β-D巯基半乳糖苷(IPTG)0.8 mmol/L,37℃,诱导8h;优化镍离子亲和层析纯化蛋白Mgfp-5最佳条件为:Elution Buffer的p H为7.0,500 mmol/L咪唑。Western Blot鉴定到重组Mgfp-5可以特异性表达。该研究为得到大量Mgfp-5蛋白奠定了基础,为加速黏蛋白的黏附机理及生物医学黏合剂的开发提供参考。 展开更多
关键词 贻贝 mgfp-5基因 原核表达 优化 纯化
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nptⅡ::mgfp5融合基因的构建及其在柑桔遗传转化中的应用 被引量:2
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作者 刘小丰 彭爱红 +4 位作者 许兰珍 邹修平 朱世平 赵晓春 陈善春 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2013年第7期1282-1287,共6页
早期、无损伤、易于操作的阳性芽检测技术,对提高柑橘遗传转化效率是十分有利的。本文设计和构建了nptⅡ::mgfp5融合基因,通过锦橙上胚轴转化体系研究其在柑橘遗传转化中的作用。nptⅡ::mgfp5融合基因全长1 578 bp,编码525个氨基酸... 早期、无损伤、易于操作的阳性芽检测技术,对提高柑橘遗传转化效率是十分有利的。本文设计和构建了nptⅡ::mgfp5融合基因,通过锦橙上胚轴转化体系研究其在柑橘遗传转化中的作用。nptⅡ::mgfp5融合基因全长1 578 bp,编码525个氨基酸,作为表达载体p1301NG的选择标记和报告基因。通过农杆菌介导法转化锦橙上胚轴,再生培养1周后用体式荧光显微镜观察外植体的再生情况。在再生培养第9天时即观察到GFP荧光再生芽的形成,再生培养后10~15 d是GFP再生芽形成的高峰期。GUS染色和PCR分子检测结果证明,GFP荧光检测结果是真实可靠的。研究结果表明:nptⅡ::mgfp5融合基因能够在再生培养早期筛选到阳性转化芽,有助于提高阳性转化芽的存活率,提高柑橘遗传转化效率。 展开更多
关键词 nptⅡ mgfp5融合基因 柑橘遗传转化 GFP荧光 转化效率
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